Антифунгальные целлобиозолипиды дрожжевых грибов

• Автор: Кулаковская, Екатерина Владимировна
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2006
• Место защиты: Пущино
• Количество страниц: 105 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
Введение

Глава I. Обзор литературы. Внеклеточные гликолипиды дрожжевых грибов

1.1. Распространение и структура внеклеточных гликолипидов

1.2.Условия образования внеклеточных гликолипидов, пути биосинтеза и их генетическая детерминация

1.3. Методы очистки внеклеточных гликолипидов

1.4. Биологическая активность и перспективы практического использования внеклеточных гликолипидов дрожжевых грибов

Глава 2. Материалы и методы исследования

2.1 Объекты исследования

2.2.Состав среды и условия культивирования

2.3.Очистка гликолипидов

2.4.Тонкослойная хроматография
2.5.Мстанолиз гликолипидов
2.6.Углеводный анализ
2.7.Массспектрометрический анализ
2.8.ЯМРспектроскопия 2.9.0пределение антифунгальной активности по подавлению роста тесткультур на агаризрованной среде
2Определение выживаемости клегок дрожжей после обработки
гликолипидами
2. .Определение выхода АТФ из клеток дрожжей
2 Окрашивание бромкрезоловым пурпурным
2. .Измерение закисления среды клетками vii
2Получение сферопластов из клеток vii
2Определение влияния целлобиозолипида В на накопление ортофосфата и полифосфатов у vii.
2Определение ортофосфата
2Определение содержания полифосфатов
2Определение активности аглюкозидазы
Глава 3. Результаты исследования и их обсуждение
3.1.Получение антифунгальных гликолипидов из культуральной жидкости дрожжевых грибов
3.2.Физикохимические свойства и структура целлобиозолипидов
3.2.1.Растворимость в воде и органических растворителях
3.2.2.Стабильность при хранении
3.2.3. Структура целлобиозолипидов
3.3.Антифунгальная активность целлобиозолипидов.
3.3.1.Влияние целлобиозолипидов на рост и выживаемость дрожжей и грибов
3.3.2.Мембраноповреждающее действие целлобиозолипидов
3.3.2.1 Выход АТФ из клеток дрожжей при обработке целлобиозолипидами
3.3.2.2.Дополнительные методы оценки мембраноповреждающего действия целлобиозолипидов
3.3.2.3.Действие целлобиозолипида В на сферопласты и синтез полифосфатов у vii
Заключение
Список цитируемой литературы


Исследовать механизм действия данных соединений на клетки дрожжей. Научная новизна работы. В данной работе у двух видов дрожжевых грибов рода Рьеис1о1ута и ЗутроЛютусорьь рарМоресИИ впервые обнаружены внеклеточные целлобиозолипиды, обладающие фунгицидным действием. Разработан эффективный способ очистки целлобиозолипидов из культуральной жидкости штаммовпродуцентов. Установлено, что ЦутроШотусорязрарЫоресИИ секретирует целлобиозолипид А, представляющий собой рПглюкопиранозил14Р0глкжопиранозил1И62,,тригидроксигексадекановую кислоту. Представители рода РяеисЬгута. В, представляющий собой 203гидроксигексаноилр0глюкопиранозил 1 460ацетилР0глюкопиранозил1 2,,тригидроксигексадекановую кислоту. Эти целлобиозолипиды отличаются от известных ранее антифунгальных целлобиозолипидов Сгур1ососст ИиппсоЬ отсутствием или уменьшенным количеством ацетатных групп в остатке целлобиозы, наличием остатка 3гидроксикапроновой кислоты в качестве Озаместителя для рода РяеиЛогута и дополнительной гидроксильной группы в остатке пальмитиновой кислоты. Показано исследованные целлобиозолипиды обладают фунгицидным действием при кислых значениях среды и активны против широкого спектра дрожжевых и мицелиальных грибов, включая виды, патогенные для растений, животных и человека. Научнопрактическое значение. Полученные в работе данные изменяют представления о функциях внеклеточных гликолипидов дрожжевых грибов и открывают возможности их нового практического применения. Сведения о действии изученных гликолипидов на дрожжевые и мицелиальные грибы, вызывающих заболевания человека, животных и рас гений, представляег интерес для разрабо тки на их основе фунгицидов нового поколения. Изучаемые соединения могут быть использованы в качестве мембраноповреждающих агентов в исследовательских целях. Апробация работы. Материалы данной работы были представлены на 8ой и 9ой Международной Пущинской школеконференции молодых ученых Биология наука 2Г века Пущино, , . Публикации. По материалам диссертации опубликовано 5 статей. Благодарности. Автор приносит искреннюю благодарность и признательность научным руководителям членукорреспонденту РАН Игорю Степановичу Кулаеву и доктору биологических наук Владиславу Ивановичу Голубеву за постоянное внимание к работе и плодотворное обсуждение результатов. Автор благодарит доктора химических наук . . Шишкова ИОХ им. Зелинского РАН за проведение ЯМРспектроскопического и массспектрометрического анализов, В. Я. Лысанскую ИБФМ им. Г.К. Скрябина РАН за проведение углеводного анализа, а также сотрудников лаборатории регуляции биохимических процессов ИБФМ им. Г.К. Скрябина РАН за содействие при выполнении работы и активное обсуждение результатов. v, V. v, . V. v, . x ii i. . v V. v . v . V., v . ii iii ii ii iii. , , v. В.И. Голубев, Т. В.Кулаковская, Е. В.Кулаковская, Н. В.Голубев. Фунгицидная активность внеклеточного гликолипида ii iii i . Микробиология, , т. v V. v . ., v . V., vI ii i i ii i i . . В. Кулаковская, В. И. Голубев, И. С. Кулаев. Внеклеточные антифунгальные гликолипиды дрожжей i. Доклады Академии Наук, , т. Е.В. Кулаковская Очистка и характеристика антифунгальных гликолипидов, секретируемых головневыми дрожжами. Биологиянаука XXI века. Международная Путинская конференция молодых ученых Сборник тезисов. Пущино, г. Е.В. Кулаковская Действие целлобиозолигшдов, секретируемых ii i на накопление полифосфатов у viii. Биологиянаука XXI века 9я Международная Путинская конференция молодых ученых Сборник тезисов. Пущино, г.