Анализ динамики фибринообразования и фибринолиза

• Автор: Субботина, Татьяна Федоровна
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Докторская
• Год защиты: 2007
• Место защиты: Санкт-Петербург
• Количество страниц: 202 с. : 9 ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1Л. Фибринообразование

1.1.1. Строение и свойства фибриногена человека

1.1.2. Механизм тромбининдуцированного фибринообразования

1.1.3. Стабилизация фибринового сгустка

1.2. Фибринолиз

1.2.1. Система фибринолиза и ее компоненты

1.2.2. Характеристика тАПзависимого фибринолиза

1.2.3. Особенности фибринолиза, индуцируемого стрептокиназой
1.3. Факторы, влияющие на фибринообразование
1.3.1. Условия среды и эндогенные эффекторы
1.3.2. Экзогенные эффекторы
1.4. Факторы, влияющие на фибринолиз
1.5. Нарушения системы гемостаза
1.5.1. Нарушения гемостаза при дисфибриногенемиях
1.5.2. Нарушения гемостаза при метаболическом синдроме
1.5.3. Нарушения гемостаза при острых лейкозах
1.6. Методы изучения свойств фибрина и динамики свертывания и фибринолиза
1.6.1. Оценка свойств фибринового сгустка
1.6.2. Оценка динамики свертывания
1.6.3. Оценка эффективности фибринолиза
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Источник материала для исследований
2.2. Использованная аппаратура
2.3. Реагенты
2.4. Турбидиметричсский анализ свертывания
2.5. Турбидиметрический анализ свертывания и фибринолиза
2.6. Оценка размеров фибриновых волокон
2.7. Определение концентрации плазминогена в плазме
2.8. Анализ полиморфизма гена фибриногена
2.9. Определение концентрации фибриногена в плазме
2 Регистрация активности ферментов
. Регистрация фибринолитической активности коллагеназы и змеиных ядов
. Регистрация активности цистеиновых катепсинов
2 Обработка стрептокиназы препаратом цистеиновых катепсинов
2 Электрофорез в полиакриламидном геле
2 Фракционирование яда У1рега шкокки
2 Статистические методы
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ .
3.1. Оптимизация экспериментальной системы
3.1.1. Турбидиметрическая регистрация процесса свертывания
3.1.2. Одновременная турбидиметрическая регистрация процессов свертывания и фибринолиза
3.2. Действие эффекторов фибринообразования и фибринолиза по данным турбидиметрического анализа
3.2.1. Влияние свободных аминокислот на фибринообразование и фибринолиз
3.2.2. Влияние гепарина и экстракта Ьапппапа са на фибринообразование и фибринолиз
3.2.3. Влияние протеиназ коллагеназы и цистеиновых катепсинов
на компоненты системы фибринообразования и фибринолиза
3.2.4. Влияние ядов змей и их компонентов на фибринообразование и фибринолиз
3.2.5. Влияние катионов двухвалентных металлов на фибринообразование и фибринолиз
3.3. Применение турбидиметрического анализа фибринообразования и фибринолиза в клинических исследованиях
3.3.1. Варьирование параметров турбидиметрической кривой свертывания и фибринолиза
3.3.2. Взаимосвязь между параметрами турбидиметрической кривой в исследуемых группах
3.3.3. Фибринообразование и фибринолиз при нормальной беременности
3.3.4. Фибринообразование и фибринолиз при метаболическом синдроме
3.3.5. Влияние генотипа ГСЛ Т2Л на фибринообразование и фибринолиз у здоровых лиц и пациентов с метаболическим синдромом .
3.3.6. Турбидиметрический анализ фибринообразования и фибринолиза в динамическом наблюдении больных острыми лейкозами ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ ПРИЛОЖЕНИЕ
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
АТ антитромбин III
АЧТВ активированное частичное тромбопластиновое время
ДВС диссеминированное внутрисосудистое свертывание
ДИ доверительный интервал
ЕД единица действия
ИАП ингибитор активатора плазминогена
КА коэффициент атсрогенности
ЛВП липопротсины высокой плотности
ЛНГ липопротсины низкой плотности
МЕ международная единица
ПААГ полиакриламидный гель
Плг плазминоген
РФМК растворимые фибринмономерные комплексы
СК стрептокиназа
СРБ Среактивный белок
ТВ тромбиновое время
ТГ триглицериды
Тр тромбин
тАП тканевый активатор плазминогена
уАП активатор плазминогена урокиназного типа
ФГ фибриноген
ФПА фибринопептид А
ФПВ фибринопептид В
ХС холестерин
ЭДТА динатриевая соль этилендиаминтетрауксусной кислоты ЭФР эндотелиальный фактор роста
оптические единицы
единицы активности ген Аацепи фибриногена
I Ii i i, Международное Нормализованное
Отношение
аргинин
лиз лизин
орн орнитин
I i Ii
0 i i, оптическая плотность при длине волны 0 нм 0 акарбобензоксиЬлизинпаранитрофснила гидрохлорид формилаланилфенилаланиллизилпаранитроанилида гидробромид
ВВЕДЕНИЕ
Актуальность


При их формировании центры полимеризации А взаимодействуют с комплементарными им центрами а в Пдоменах соседних мономеров рис. В результате дезАА мономеры образуют двунитчатые протофибриллы, где молекулы расположены в шахматном порядке, так что одна молекула одного ряда наполовину перекрывает 2 молекулы соседнего ряда. Таким образом, начальный этап полимеризации происходит как бимолекулярная ассоциация бифункциональных компонентов. Скорость этого процесса пропорциональна минус первой степени концентрации мономеров. Симметричное строение мономера фибрина позволяет новым мономерам присоединяться к растущей фибрилле с обеих сторон, и скорости присоединения мономеров или олигомеров не отличаются 1, 9. Доказательства соответствия процесса фибринообразования этой модели были получены с помощью анализа кинетики ассоциации, динамики светорассеяния, путем электронной микроскопии и другими методами 2, 3. С другой стороны, рядом авторов было показано наличие на ранних стадиях фибринообразования двуцепочечных протофибрилл, на концах которых находились мономеры с только одним отщепленным ФПА, то есть на одну протофибриллу, независимо от ее длины, приходилось по 2 концевых ФПА. ФПА являются стадией, которая предшествует появлению двуцепочечных протофибрилл из дез А А мономеров. Рис. Образование протофибрилл классическая модель ХоллаСлейтера. Ей области в молекуле фибринмономера А и В центры полимеризации, расположенные в Еобластях а и Ь центры полимеризации, комплементарные центрам А и В, находящиеся в областях на рисунке показано взаимодействие между Еобластью одной молекулы и областями двух соседних мономеров после открытия центров полимеризации А, что приводит к образованию двунитчатой протофибриллы по v, . Хунцикером была предложена модель однонитевых протофибрилл 0. Согласно этой модели, основным продуктов активации фибриногена является АдезА мономер фибрина, у которого ФПА отщеплен только от одной из Аацепей. Таким образом, в начальный этап полимеризации включается только один домен каждого фибринового мономера. Эта модель предполагает наличие фибриновых АдезА мономеров в достаточной концентрации и возможность их длительного существования, поскольку для полимеризации и создания правильной пространственной организации необходима сближенность мономеров и растущих олигомеров и достаточное время для их вращательной и латеральной диффузии. Этот вопрос остается нерешенным, поскольку одними авторами наличие АдезА мономеров было показано 1, а другие с помощью тех же методик обнаруживали только дез А А мономеры. В ряде работ было показано, что концентрация АдезА оказывалась слишком низкой для преимущественной полимеризации их в одноцепочечные протофибриллы 3, 5,8. Таким образом, свидетельств, подтверждающих правильность модели двунитчатых протофибрилл, явно больше. Следующим спорным вопросом является роль ФПА и ФПВ в полимеризации фибрина. Хорошо известно, что отщепление ФПА тромбином происходит значительно раньше отщепления ФПВ. Поэтому сгусток на начальных стадиях состоит в основном из дезАА фибрина, а высвобождение ФПВ продолжается и после формирования сгустка , 3, 1. Как и для процессов отщепления ФПА, имеется общепринятая модель для объяснения роли ФПА и ФПВ, которой придерживается большая часть авторов. Согласно этой модели, отщепление тромбином ФПА важно для образования протофибрилл, поскольку при этом происходит открытие центра полимеризации А, и именно его взаимодействие с комплементарным ему сайтом а приводит к образованию двунитчатых протофибрилл. Отщеплению ФПВ и открытию сайтов полимеризации В, которые наступают позднее, приписывают важную роль в латеральной агрегации протофибрилл , 1. В таком случае задержка отщепления ФПВ нужна для формирования оптимальных по своим свойствам протофибрилл 4. Эта схема является простой и удобной, но реальная ситуация не полностью ей отвечает. Вопервых, хорошо известно, что полимеризация происходит и в том случае, когда отщепляется только ФПА или ФПВ, что показано с помощью тромбиноподобных ферментов из ядов змей.