Выделение пептидов из панинтестина и изучение их биологических свойств

• Автор: Брещенко, Елена Евгеньевна
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2003
• Место защиты: Краснодар
• Количество страниц: 148 с. : ил

ОГЛАВЛЕНИЕ

ВВЕДЕНИЕ
ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ. НЕЙРОГУМОРАЛЬНАЯ ^ РЕГУЛЯЦИЯ СЕКРЕТОРНОЙ ФУНКЦИИ ЖЕЛУДКА И ЭКЗО-
* КРИННОЙ СЕКРЕЦИИ ПОДЖЕЛУДОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ
1.1. Регуляция желудочной секреции гормонами пептидной
и непептидной природы
1.2. Ферменты панкреатического сока и регуляция
экзокринной секреции поджелудочной железы
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Технология получения препарата «Панинтестин» и
выделения из него биологически активных пептидов
2. 2. Постановка эксперимента на животных
2.2. 1. Определение содержания пептидов в пробе
для расчета дозировки
2. 3. Методы исследования
2.3. 1. Определение молокосвертывающей способности
пепсина

| 1 2. 3. 2. Определение протеолитической активности пепсина.
2. 3. 3. Определение активности панкреатических
протеиназ суммарно
2. 3. 4. Определение активности трипсина
2. 3. 5. Определение активности химотрипсина
2. 3. 6. Определение активности амилазы
2. 4. Статистические методы исследования

ГЛАВА 3. ВЫДЕЛЕНИЕ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ПЕПТИДОВ ИЗ ПАНИНТЕСТИНА И ИЗУЧЕНИЕ
ИХ ОСНОВНЫХ БИОХИМИЧЕСКИХ СВОЙСТВ
3.1. Хроматографическое разделение пептидов панинтестина методом гель-фильтрации
3.2. Определение молекулярной массы пептидов, выделенных
из панинтестина
3.3. Высокоэффективная жидкостная хроматография и ее использование для фракционирования пептида В, выделенного
из панинтестина
3.4. Разделение и анализ пептида В панинтестина
с использованием методов капиллярного электрофореза, масс-спектрометрии и мембранной фильтрации
ГЛАВА 4. ДЕЙСТВИЕ ПЕПТИДОВ, ВЫДЕЛЕННЫХ ИЗ ПАНИНТЕСТИНА, НА АКТИВНОСТЬ ПИЩЕВАРИТЕЛЬНЫХ ФЕРМЕНТОВ В СЛИЗИСТОЙ ЖЕЛУДКА, ДВЕНАДЦАТИПЕРСТНОЙ КИШКИ И ТКАНИ
ПОДЖЕЛУДОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ У КРЫС
4.1. Влияние пептидов, выделенных из панинтестина методом гель-фильтрации, на активность пищеварительных ферментов желудка, поджелудочной железы и двенадцатиперстной кишки
4.2. Влияние низкомолекулярного пептида С’з, выделенного из пептида В методом мембранной фильтрации, на активность пищеварительных ферментов в органах гастропанкреато-дуоденального комплекса
4.3. Сравнение изменения активности пищеварительных ферментов под действием пептида С3, выделенного

из панинтестина, и патентованных средств, применяемых для стимуляции или подавления внешнесекреторной деятельности органов гастропанкреатодуоденального
комплекса
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

*> ПРИЛОЖЕНИЯ
УСЛОВНЫЕ ОБОЗНАЧЕНИЯ
ЖКТ - желудочно-кишечный тракт Ж - желудок
ДИК - двенадцатиперстная кишка
ПЖ - поджелудочная железа
ХЦК (ССК) - холецистокинин (сііоіеяузіокіпіп)
ВНП - вазоактивный интестинальный пептид
ПП - панкреатический полипептид
цАМФ - циклический аденозинмонофосфат
ПФЗТ — препараты ферментозаместительной терапии
МАС - молочно-ацетатная смесь
ПА - лротеолитическая активность
СПА - суммарная лротеолитическая активность
ММ - молекулярная масса
КЭФ - капиллярный электрофорез
МС - масс-спектрометрия
ТЕ - тирозиновые единицы
БАПНА - бензоиларгинин-п-нитроанилид
ССР - гастроульцерозный пептид

ГЛАВА
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
2Л. Технология получения препарата «Панинтестин» и выделения из него биологически активных пептидов
Препарат «Панинтестин» получали по методике, описанной в Авт. свид. СССР № 1476653, 1987. Для этого брали свежую или дефростиро-ванную поджелудочную железу крупного рогатого скота, отделяли от жира и фасций, промывали дистиллированной водой, перемалывали мясорубкой с диаметром отверстий решетки 2-3 мм и помещали в стеклянную емкость. Тонкую кишку (свежую или дефростированную) тех же животных (лучше брать участки кишки из близлежащих к желудку отделов) промывали и скальпелем счищали слизистую оболочку. Полученную слизистую тонкой кишки переносили в емкость с фаршем ПЖ в соотношении Г. 10. К гомогенату добавляли 0,5 частей поваренной соли, а затем 0,5 части бикарбоната натрия для получения pH 7,3-8,3, при котором проявляется оптимальное действие ферментов, обеспечивающих превращение проферментов в ферменты. Все компоненты тщательно перемешивали. Смесь инкубировали при 37 °С в течение 1,5-2 часов, регулярно перемешивая. Полученный гомогенат оставляли в рефрижераторе при температуре 4°С на 16-20 часов для экстракции ферментов. После экстракции гомогенат отжимали через 2-3 слоя марли, а полученную вытяжку центрифугировали при 3000 об/мин в течение 15 минут и дополнительно фильтровали через фильтровальную бумагу. Вытяжка из гомогената поджелудочной железы и тонкой кишки представляла собой прозрачную жидкость желтоватого цвета.
Выделение пептидов вели на установках для гель-хроматографии, оснащенных автоматическим коллектором фракций фирмы І.КВ (Швеция) по методу Л.А. Остермана (1985), как описано в главе 3 собственных ис-