Активность основных карбоксипептидаз в тканях мышей при введении тестостерона и прогестерона

• Автор: Салдаев, Дамир Абесович
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2001
• Место защиты: Пенза
• Количество страниц: 123 с. : ил

СОДЕРЖАНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Нейропептиды и их обмен.

1.2. Физикохимические свойства, субстратная специфичность и биологическая роль карбоксипеитидазоВподобных
ФЕРМЕНТОВ.

1.2.1. Карбоксипептидаза Н.

1.2.2. ФМСФингибируемая карбоксипептидаза.

1.3. ПОЛОВЫЕ СТЕРОИДНЫЕ ГОРМОНЫ.

1.3.1. Тестостерон.

1.3.2. Прогестерон.
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.
2.1. Материал исследования
2.2. Методы исследования
2.2.1. Метод введения половых стероидных гормонов
2.2.1. Метод определения активности карбоксипептидазы Н
2.2.2. Метод определения активности ФМСФиш ибируемой карбоксипептидазы.
2.2.3. Метод определения концентрации белка
2.2.4. Статистическая обработка результатов исследования
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
3.1. Тканевое распределение активности основных
карбоксипептидаз у самцов и самок мышей.
3.1.1. Распределение активности карбоксипептидазы Н в гипоталамогипофизарнонадпочечниковогонадной системе самцов и самок мышей.
3.1.2. Распределение активности ФМСФингибируемой карбоксипептидазы в в гиноталамогипофизарнонадпочечниковогонадной системе самцов и самок мышей
3.2. АКТИВНОСТЬ ОСНОВНЫХ КАРБОКСИПЕПТИДАЗ У САМОК МЫШЕЙ ПРИ ВВЕДЕНИИ ТЕСТОСТЕРОНА И ПРОГЕСТЕРОНА.
3.2.1. Активность карбоксипептидазы Н и ФМСФингибируемой карбоксипептидазы при введении тестостерона в тканях самок мышей.
3.2.2. Активность карбоксипептидазы Н и ФМСФингибируемой карбоксипептидазы при введении прогестерона в тканях самок мышей.
3.3. АКТИВНОСТЬ ОСНОВНЫХ КАРБОКСИПЕПТИДАЗ У САМЦОВ МЫШЕЙ ПРИ ВВЕДЕНИИ ТЕСТОСТЕРОНА И ПРОГЕСТЕРОНА.
3.3.1. Активность карбоксипептидазы Н и ФМСФингибируемой карбоксипептидазы при введении тестостерона в тканях самцов мышей
3.3.2. Активность карбоксипептидазы Н и ФМСФингибируемой карбоксипептидазы при введении прогестерона в тканях самцов мышей
3.4. АКТИВНОСТЬ КАРБОКСИПЕПТИДАЗЫ Н И ФМСФИНГИБИРУЕМОЙ КАРБОКСИПЕПТИДАЗЫ I VI ПРИ ДЕЙСТВИИ ТЕСТОСТЕРОНА И ПРОГЕСТЕРОНА.
ГЛАВА 4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ
ЛИТЕРАТУРА


В цистернах эндоплазматического ретикулума под действием сигнальной пептидазы происходит отщепление сигнальной последовательности, а также Ыгликозилирование и формирование характерной для полипептида третичной структуры, которая препятствует обратному выходу белка в цитоплазму. Постгрансляционная модификация, включающая гликозилирование, амидирование, ацетилирование или сульфирование, предотвращает нарушение процессинга и образование нетипичных пептидов 1, . Предшественники нейропептидов синтезируются на рибосомах фанулярного эндоплазматического ретикулума. Как сказано выше, препропептиды не обладают функциональной активностью. Для получения активных форм, они подвергаются посттрансляционному процессингу, одним из основных механизмов которого является офаниченный протеолиз 3, 5, , . Процессинг биологически активных пептидов осуществляется при передвижении молекул пропегггидов но фанулярному эндоплазматическому рстикулуму, комплексу Гольджи и в секреторных везикулах 3. Секреторные везикулы содержат полный набор ферментов, необходимых для процессинга и специальные системы поддержания внуфи везикул . Процессинг нейропептидов внутри секреторных везикул включает в себя эндо и экзопротеолитические реакции. РС1, РС2, РСЗ и РС4 8. В результате происходит расщепление пропептидов по парам остатков основных аминокислот , 8. Продукт, образовавшийся после действия эндопептидаз, далее подвергается экзопротеолизу с участием аминопептидазоВ иили карбоксипептидазоВподобных ферментов. В результате происходит удаление лишних Ы иили Сконцевых остатков основных аминокислот. Известно, что в различных тканях из одного белкового предшественника образуются различные нейропептиды 1, . Так из проопиомеланокортина в аденогипофизе образуются преимущественно АКТГ, 3липотропин и 3эндорфин. В промежуточной доле гипофиза они подвергаются дальнейшему расщеплению с образованием амеланоцитстимулирующего гормона и фрагментов 3эндорфина 1. Тканевая специфичность, повидимому, может быть связана с различным набором ферментов в разных тканях иили с различными способами регуляции их активности. Поэтому представляет интерес изучение ферментов процессинга со сходной но не идентичной субстратной специфичностью. Такие исследования интересны не только для выяснения вопросов, связанных с функционированием данных энзимов, но и для понимания механизмов образования различных нейропептидов из одних и тех же предшественников в разных тканях. Поскольку карбоксипептидазоВподобные ферменты, то есть отщепляющие остатки основных аминокислот аргинина и лизина с карбоксильного конца пептидов, участвуют в конечной стадии процессинга биологически активных пептидов, то их изучение представляет особый интерес. К настоящему времени в тканях человека и животных обнаружен ряд таких ферментов КПВ КФ 3. КПИ КФ 3. КИМ КФ 3. КП и, КП Н КФ 3. ФМСФингибируемая КП и др. КП В, К . КГ1 М, КП и и КП Н отщепляют аргинин и лизин с Сконца пептидов , , , 2, 4, 0, 2, 1, 2, 3, 7, 7. КПВ способна также но с меньшим сродством отщеплять остатки ароматических аминокислот . Все вышеперечисленные карбоксинептидазы, кроме КП и и КП Н, обладают и эстеразной активностью , , , 2, 4, 0, 2, 1, 2, 3, 4, 7, 7. Причем у КП и КП М она намного превышает нептидазную , 2, 4,3,7,7. КПН имеет кислый оптимум 5,56,0 5, 4. Другие карбоксипептидазы проявляют максимальную активность в нейтральной либо слабощелочной среде. В частности, оптимум для КП В, КП и К М равны, соответственно, 7,09,0 7,6 и 7,0 , , 2, 2, 7. Ионы Со повышают пептидазную активность КПВ, КПКГ, КИ М, КПН , 3, 7, 7, 4, но снижают эстеразную активность КПВ 4, а также пептидазную активность КП И , 2. Ионы Сс снижают активность КПВ 4, КП 3, 7, КП М 7. Хелатирующие агенты ЭДТА, офенантролин, и дикарбоновые кислоты, такие как ГПЯК, АПМЯК и ГЭМЯК, ингибируют КП В, КП И, КП М, КП Н , , , , 2, 2, 3,4, 7, 6, 5, 2, 7, 7, 6. Карбоксипептидазы КПВ, КПП, КПМ, КПИ и КПН являются металлокарбоксипептидазами и содержат в своих активных центрах ионы гп2 , 8, 1, 3, 1, 2,3. КПВ М кДа , КПМ М кДа , 7 и КПН , 1, 2 состоят из единственной полипептидной цепи.