Влияние бромпроизводного аминоадамантана - ладастена на активность протеинкиназ и фосфорилирование белков в клетках головного мозга и печени крыс

• Автор: Салимгареева, Миляуша Хамитовна
• Шифр специальности: 03.00.04, 14.00.25
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2004
• Место защиты: Уфа
• Количество страниц: 109 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ
Введение.

1. Обзор литературы

Фармакологические свойства и механизмы действия бромпроизводного аминоадамантана ладастена

1.1. Общие сведения о препарате

1.2. Фармакологические свойства ладастена.

1.2.1. Иммуностимулирующие свойства

1.2.2. Актопротекторные свойства.

1.2.3. Психостимулирующие свойства.

1.2.4. Другие фармакологические активности ладастена.

1.3. Внутриклеточные системы сигналинга.

1.3.1. Фосфорилированисдсфосфорилирование белков
1.3.2. цАМФзависимые протеинкиназы.
1.3.3. Са фосфолипидзависимые протеинкиназы.
1.3.4. Са2кальмодулинзависимые протеинкиназы.
1.3.5. Механизмы Са сигнализации в клетках
1.3.6. Митогенактивируемые протеинкиназные каскады
2. Объекты и методы исследования
2.1. Объект исследований
2.2. Выделение белков цитоплазмы
2.3. Выделение белков мембраны
2.4. Выделение лимфоцитов крови.
2.5. Приготовление тотального клеточного лизата для ИхМмуноблоттинга
2.6. Фосфорилирование белков i viv
2.7. Определение активности протеинкиназ
2.8. Электрофорез белков
2.9. Определение Са2АТФазы
2 Иммуноблоттииг
2 Статистический анализ результатов исследований.
2 Реактивы и материалы.
3. Результаты и их обсуждение
Влияние ладастена на активность протеинкиназ и фосфорилирование белков
3.1. Фосфорилирование белков i viv.
3.2. Влияние ладастена на активность цАМФзависимых протеинкиназ в
клетках головного мозга и печени крыс
3.3. Влияние ладастена на активность Са фосфолипидзависимых протеинкиназ в клетках головного мозга и печени крыс
3.4. Влияние ладастена на активность Сакальмодулинзависимых протеинкиназ II в клетках стриатума и гипоталамуса головного мозга крыс.
3.5. Влияние ладастена на активность митогенактивируемых киназ
Заключение.
Выводы.
Список литературы


К числу фармакологических препаратов, производных адамантана, относятся хорошо известное противовирусное средство ремантадин противопаркинсонические мидантан, гимантан иммуномодулирующее средство кемантан психостимулятор адапромин эффективный при болезни Альцгеймера мемантин и др. vi . , . Галегов и др. Шмарьян и др. Атрошенко, Арцимович, Галушина, . Среди производных адамантана имеются соединения, способные повышать адаптационные возможности организма к действию комплекса экстремальных факторов среды обитания и деятельности так называемые актопротекторы. Наиболее активными в этом отношении оказались производные 2аминоадамантана, в частности, ладастсн, содержащий Вг в фенильном радикале у азота 2аминоадамантана адаптоген экстренного типа действия хлодантан комбинация бемитила с ладастеном бромитил Жирнов, Кундашев, Красных, . Производное 2аминоадамантана ладастен К2адамантилИпбромфениламин разработан в качестве средства фармакологической коррекции изменений функционального состояния организма в условиях действия стрессорных факторов различной природы. Его особенностью является сочетание психостимулирующих и анксиолитичсских свойств, что, как полагают, обусловлено его регулирующим влиянием на центральные дофамин, серотонин и ГАМКергические медиаторные системы Сергеева, Девойно,. Морозов и др. Лосев и др. АМФ, Са и др. С активацией этих систем сопряжены такие фундаментальные клеточные процессы, как пролиферация, дифференциация, иммунный ответ и др. В то же время для более эффективного и безопасного использования фармакологических средств необходимо детальное знание путей их воздействия на клетку, ткань и организм в целом. Следовательно, изучение внутриклеточных систем сигнальной трансдукции, участвующих в реализации фармакологических эффектов ладастена, позволит понять некоторые молекулярные механизмы его действия. При выборе органов мозг, печень, в клетках которых изучали динамику активности протеинкиназ, руководствовались данными о фармакокинетике и фармакодинамике препарата при однократном его применении Сергеева, Красных, . Ладастен проявляет избирательную тропность к тканям мозга, через мин после перорального введения коэффициент распределения составляет Кр2. Также ладастен быстро и в высоких концентрациях проникает в печень, максимальная концентрация наблюдается через мин Кр6. Цель и задачи исследования. Целью настоящего исследования явилось выявление основных внутриклеточных сигнальных систем, задействованных в реализации биологических эффектов ладастена. ЕНК1ЕК2 и их активность в клетках головного мозга крыс и культуре клеток Тлимфоцитов крови человека под действием ладастена. Научная новизна работы. ЕКК1 2 и рЕКК12 в реализации биологического действия ладастена. Са активируемых систем сигнальной трансдукции в этом процессе. Впервые обнаружена дифференциальная активация Сакапьмодулинзависимых протеинкиназ II в клетках стриатума и гипоталамуса через разные промежутки времени. Впервые экспериментально показано, что комитогенный эффект ладастена в культуре Тлимфоцитов сопряжен с активацией конечного эффектора МАПкиназного каскада ЕИК2. Практическая значимость работы. Полученные результаты вносят вклад в познание отдельных молекулярных механизмов действия фармакологических препаратов аминоадамантанового ряда, в частности ладастена, и могут использоваться для разработки новых фармакологических модуляторов отдельных этапов сигналинга. Результаты работы могут быть использованы также в лекционном материале при чтении курсов по биохимии и фармакологии. Апробация работы. Рецепция и внутриклеточная сигнализация Пущино, Научнопрактической конференции Проблемы создания новых лекарственных средств Уфа, i i i i i, . Публикации. По теме диссертации опубликовано 6 работ. Объем и структура диссертации. Работа иллюстрирована 1 таблицей и рисунками. Библиографический указатель включает отечественных и 7 зарубежных источников литературы.