Экспрессия генов C-FOS и интерлейкина-2 в клетках головного мозга и селезенки при стрессорных воздействиях

• Автор: Барабанова, Светлана Владимировна
• Шифр специальности: 03.00.04, 14.00.16
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2000
• Место защиты: Санкт-Петербург
• Количество страниц: 123 с.

СОДЕРЖАНИЕ
1.ВВЕДЕНИЕ

2.0БР ЛИТЕРАТУРЫ.

2.1.Стресс и иммунная система

2.1.1 .Взаимодействие нервной и иммунной систем

2.1.2.Действие стресса на иммунную и нервную системы.

2.1.2.1 .Иммобилизационный стресс

1.2.2.Психоэмоциональный стресс

2.2.Экснресся генов немедленного и раннего ответа как молекулярнобиологическая основа реализации реакций на стрессирующие воздействия

2.3.Протоонкоген сГо5 как маркер активации клеток ЦНС

2.3.1.Общие сведения.

2.3.2.Экспрессия гена сбэБ
2.3.2.1.Индукторы активации гена соя и механизмы его экспрессии.
2.3.2.2. Экспрессия гена ооу в клетках нервной системы
2.3.3.Влияние стресса на экспрессию гена сТоб
2.4. Интсрлейкнн2 как маркер активации определенных
клеток иммунной системы
2.4.1.Общие сведения.
2.4.2.Общие механизмы регуляции индуцибельных генов
2.4.3.Регуляция экспрессии гена интерлейкина2 белковыми
трансфакторами
2.4.4.Экспрессия гена интерлейкина2 в клетках нервной системы
2.4.5.Влияние стресса на экспрессию гена интерлейкина
2.5.3аклченнс
З.МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
3.1. Анализ синтеза ИЛ2 мРНК и Ыоб мРНК лимфоцитами селезенки и клетками ткани головного мозга.
3.1.1.Модели стрессориого воздействия
3.1.2. Определение содержания ИЛ2 мРНК и мРНК в клетках тканей селезенки.
3.1.2.1. Получение и инкубация лимфоцитов
3.1.2.2. Выделение тотальной мРНК
3.1.2.3. Выявление комплекса iДНКмРНК
3.1.3. Получение меченых ДНКзондов
3.1.3.1 Трансформация клеток .i тазмидной ДНК,
содержащей кДНК ИЛ2 или кДНК v
3.1.3.2. Выделение тазмидной ДНК из . i методом
щелочной экстракции
3.1.3.3. Рестрикция ДНК эндонуклеазами .
3.1.3.4. Электрофорез ДНК в агарозном геле.
3.1.3.5. Выделение фрагментов ДНК из лекготавкой агарозы.
3.1.3. б. Нерадиактивное меченые кДНКфрагментов дигоксигенином
3.1.4. Определение содержания мРНК и ИЛ2 мРНК в клетках тканей головного мозга крыс
3.1.4.1. Получение срезов головного мозга крыс.
3.1.4.2. Анализ содерэсания ИЛ2 и мРНК методом гибридизации i i на срезах головного мозга крыс
3.1.4.3.Иммунодетекция комплекса iмРНКкДНК.
3.2. Иммунохимическое выявление и ИЛ2подобных белков в тканях головного мозга
3.2.1. Иммунохимическое выявление подобных белков в тканях головного мозга крыс.
3.2.1.1. Получение срезов головного мозга крыс.
3.2.1.2. Иммунохимическое выявление подобного белка
3.2.2. Иммунохимическое выявление ИЛ2подобного белка с
использованием моноклональных ИЛ2 антител
3.2.2.1. Приготовление проб для определения содержания
ИЛ2подобного белка в структурах головного мозга мышей
3.2.2.2. Иммунохимииеское выявление ИЛ2подобного белка
3.3. Статистическая обработка результатов.
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
4.1.Влияние ротационного стресса на экспрессию генов сГоэ н интерлсйкина2 в лимфоцитах селезенки мышей и клетках головного мозга крыс
4.1.1. Влияние ротационного стресса на экспрессию генасТоБ и интерлейкина2 в лимфоцитах селезенки мышей.
4.1.1.1. Влияние ротационного стресса на экспрессию соя мРНК в лимфоцитах селезенки мышей.
4.1.1.2. Влияние ротационного стресса на экспрессию ИЛ2 мРНК в лимфоцитах селезенки мышеи.
4.1.2.Влияние ротационного стресса на экспрессию генов сСоб мРНК
и ИЛ2 мРНК в клетках головного мозга крыс
4.1.2.1. Влияние ротационного стресса на экспрессию соз мРНК
в клетках головного мозга крыс
4.1.2.2. Влияние ротационного стресса на экспрессию ИЛ2 мРНК
в клетках головного мозга крыс.
4.2. Влияние болевых и комплексных стрессорных воздействий на экспрессию генов сГов и ИЛ2 в клетках спинного и головного мозга крыс
4.2.1. Влияние стрессорных воздействий на синтез сТоямРНК и ИЛ2 мРНК в головном мозге крыс через 2 часа после применения стимула
4.2.2.Влияние стрессорных воздействий на синтез сРоб и
ИЛ2подобных белков в головном мозге крыс
5.0БСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
6.ВЫВОД Ы
7.СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
I. ВВЕДЕНИЕ
Обтай характеристика работы.
Актуальность


Присутствие цитокинов в головном мозгу объясняется также их продукцией экспрессией цитокиновых генов клетками глии и некоторыми нейронами . К сожалению, существует относительно небольшое количество сведений о возможных путях передачи информационного сигнала от ЦЫС к ИС и лишь начато изучение механизмов передачи информации от ИС к ЦНС, о структурах ЦНС, вовлеченных в ответную реакцию на стресс или антигенное воздействие, и временных параметрах этого процесса. Большое значение в исследованиях такого рода имеет совершенствование методических подходов. Появление высоко специфических, прецизионных методов анализа в различных областях биологии позволяет проводить исследования на стыке дисциплин. Множественность путей передачи сигнала , . Применение методов анализа функциональной активности той или иной системы на организменном или клеточном уровнях не позволяет решить вопрос о молекулярных механизмах изменения метаболизма клетки в ответ на внешние стимулы. Однако, появление высокочувствительных специфических методов молекулярнобиологического и молекулярногенетического анализа и применение их в сочетании с гистохимическими и иммунохимическими методами исследования позволило подойти к изучению проблемы механизмов нейроиммуномодуляции на генном уровне. Мишеныо для такого рода исследований могут служить гены немедленного и раннего ответа, экспрессирующиеся в нервных или иммунокомпетентных клетках. Изменение характера их экспрессии при действии стимулов воздействий позволяет оценивать изменение функциональной активности клеток в ходе развития реакции на определенные стимулы. Фундаментальной основой такого рода исследований является доказанное ранее положение, согласно которому клетки, участвующие в формировании ответа на примененный внешний стимул, усиливают или уменьшают экспрессию соответствующих генов, что необходимо для компенсации возникающих изменений гомеостаза , . Определение генетически запрограммированного ответа, поиск соответствующих маркеров, позволяющих регистрировать изменения метаболизма клетки на ранних стадиях реакции на стимуляцию, и исследование экспрессии соответствующих генов создает основу для выяснения механизмов реализации влияния стресса на функции определенных клеток. Признанным маркером активации нейрональных клеток является продукт гена немедленного ответа протоонкогена , белок i, , выполняющий функцию регулятора транскрипции ряда индуцибельных генов и играющий существенную роль в процессах клеточного роста и дифференцировки . Примером индуцибельного гена раннего ответа, кодирующего структуру одного из ключевых медиаторов иммунной системы, может служить ген интерлейкина 2 ИЛ2. ИЛ2 является одним из важнейших цитокинов, обеспечивающих контроль над процессами пролиферации и дифференцировки Тзависимых имму некомпетентных клеток, и синтезируется Т лимфоцитами хелперами под действием мигогенов, ИЛ1 и некоторых других агентов. Существует большой объем литературы, посвященной проблеме регуляции активности гена ИЛ2 специфическими белковыми трансфакторами . К числу трансфакторов гена ИЛ2 относится и белок . ИЛ2 V . В настоящее время присутствие ИЛ2 было обнаружено не только в Тлимфоцитах, но и в различных структурах головного мозга, в клетках олигодендроглии, астроцитах и нейронах , . Следовательно, можно предположить, что ИЛ2 может участвовать в механизмах активации не только иммунокомнетентных, но и нервных клеток , . Существует значительное количество данных, свидетельствующих об изменении экспрессии гена в ответ на неантигенные стимулы . Передача информационного сигнала может осуществляться через нервные пути, т. Однако, несмотря на интенсивные исследования физиологических и биохимических механизмов реализации реакций клеток ЦНС на неантигенные воздействия, в том числе, и стрсссиндуцирующие, интенсивность экспрессии гена в иммунокомпетентных клетках и гена ИЛ2 в клетках ЦНС практически не изучена. Решение данных вопросов представляется актуальным для фундаментальной науки и направлено на раскрытие проблемы молекулярногенетических механизмов реализации реакций НС и ИС на стресс и механизмов нейроиммунного взаимодействия.