Ретровирус М813: молекулярные свойства и воздействие на клетки

• Автор: Иванов, Дмитрий Сергеевич
• Шифр специальности: 03.00.03, 03.00.06
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2004
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 130 с. : ил.

Оглавление
Оглавление.

Список сокращений

Введение.

Обзор литературы.

Введение

Общие свойства ретровирусов.

Строение ретровирусного вириона

Строение генома ретровирусов.

Жизненный цикл ретровирусов

Взаимодействие ретровирусов с клеточным рецепторами и проникновение

в цитоплазму.
Обратная транскрипция и интеграция в геном.
Транскрипция провируса, синтез вирусных белков и сборка вириона
Взаимодействие вирусов с клеточными рецепторами и
синцитиеобразование
Группы интерференции ретровирусов семейства V
История открытия ретровируса М3
Материалы и методы.
Материалы
Методы работы с клеточными культурами эукариот.
Пересев клеток.
Криоконсервация клеток.
Са2фосфатная трансфекция.
Определение титра ретровирусного вектора.
Анализ синцитиеобразования.
Трансформация и селекция клеток . i, выделение плазмиды
Анализ геномной ДНК методом Саузерна.
0 А нализ РНК методом Нозерн блоттинга.
Результаты и обсуждение.
Характеристика ретровируса М3.
Определение спектра хозяев М3.
Определение группы интерференции вируса М3
Морфологическая характеристика ретровируса М3.
Определение индексов слияния фибробластов мыши , экспрессирующих ретровирусы разных групп интерференции V, при действии
ретровируса М3
Определение условий, необходимых для синцитиеобразования под
действием вируса М3
Определение наличия в геноме мыши эндогенных ретровирусов, родственных ретровирусу М3, методом Саузерн
блоттинга
Определение экспрессии ретровирусов М3 и 4 с помощью Нозерн
блоттгибридизации.
Определение спектра хозяев ретровируса 4
Определение группы интерференции ретровируса 4.
Выводы.
Список литературы


Впервые определены условия индукции синцитиев это наличие рецептора для ретровируса М3 на клеточной поверхности и экспрессия белков других ретровирусов семейства МЬУ в клетках. Ретровирусы РНКсодержащие вирусы, многие из которых вовлечены в патогенез ряда заболеваний включая такие социальнозначимые, как СПИД и Ткпеточный лейкоз взрослых и являются уникальным инструментом для применения в фундаментальной биологии и генной терапии. Ретровирусы широко используют для изучения процесса онкогенеза, эволюционных связей между вирусами и их хозяевами, а также в качестве основы для конструирования векторов для переноса генов в лабораторных и клинических целях . Один из наиболее широко распространенных объектов исследования ретровирусы группы МЬУ вирусов лейкоза мышей. Главным преимуществом вирусов этой группы является отсутствие ярко выраженного цитопатического как правило, зараженная клетка остается живой действия, простота организации, а, следовательно, и удобство генноинженерных манипуляций с геномом . Первая часть обзора литературы посвящена общим свойствам ретровирусов, их строению и жизненному циклу. Во второй части рассмотрены особенности взаимодействия ретровирусов МЬУ с чувствительными клетками взаимодействие с рецептором, слияние мембран, проникновение в клетку, явление интерференции и классификация вирусов на основе используемых рецепторов. Третья часть посвящена истории открытия ретровируса М3. Ретровирусы обладают рядом необычных свойств. При ретровирусной инфекции клеточная пролиферация либо увеличивается, либо не меняется вообще. Для достижения хронической инфекции ретровирусы используют уникальную стратегию репликации. Хотя вирусный геном в составе вириона представлен одноцепочечной РНК, в ходе его репликации он проходит стадию двухцепочечной ДНК, которая эффективно интегрирует в геном хозяйской клетки. Превращение генома ретровируса из вирионной РНК в ДНК осуществляет РНКзависимая ДНКполимераза. Название ретровирус и отражает присутствие у всех представителей этого семейства обратной транскриптазы и наличие стадии ДНК в цикле репликации их генома. Надо отметить, что обратная транскрипция не является уникальной только для ретровирусов и присутствует в жизненном цикле гепадновирусов представитель вирус гепатита В человека и некоторых вирусов растений. Еще одно уникальное свойство ретровирусов, связанное с особенностями их репликации существование некоторых из них в виде эндогенных провирусов и ретровирусоподобных элементов, которые интегрированы в ДНК клеток и передаются вертикально. Ретровирусы классифицируют на основе многих свойств, таких как морфология, гомология эволюционноконсервативных участков их генома, строении их генома, биологических свойств, спектру хозяев и др. Наиболее общепринятая классификация ретровирусов как семейства деление на 3 подсемейства онковирусы, лентивирусы и спумавирусы. Онковирусы, как явствует из названия способны вызывать онкологические заболевания у своих хозяев чаще всего лейкозы и саркомы. Опухоль чаще всего развивается через длительный инкубационный период, и все это время организм хозяина хронически инфицирован вирусом. Лентивирусы названы так изза очень длительного инкубационного периода и хронический характер вызываемых ими заболеваний. К данному подсемейству относится вирус иммунодефицита человека ВИЧ. Спумавирусы исходно обнаружены как инфекционные загрязнения первичных клеточных культур . Они получили свое название изза вызываемой ими характерной пенной дегенерации культуры. Спумавирусы выявлены у различных представителей млекопитающих, включая кошек, коров, приматов и человека. Они могут вызывать хроническую инфекцию у своих хозяев вирус длительно присутствует в организме, однако пока не удалось связать их с какимлибо известным заболеванием. Внутри подсемейства онковирусов выделяют еще несколько групп, и таким образом, ретровирусы в общей сложности подразделяют на 7 групп , как это показано в табл. Табл. Вирион ретровирусов является округлой частицей диаметром 0 нм. Внутри этой частицы находится нуклеокапсид вируса, окруженный наружной липопротеидной оболочкой.