Трансляционная активация генома некоторых фитовирусов в составе вириона или вирусного транспортного рибонуклеопротеида

• Автор: Карпова, Ольга Вячеславовна
• Шифр специальности: 03.00.03
• Научная степень: Докторская
• Год защиты: 2002
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 49 с. : ил.; 20х14 см

Впервые продемонстрировано, что молекулы ТБ1 ХВК, селективно связываясь с БО на одном из концов вириона ХВК, переводят РНК в составе вириона в транслируемую форму. Впервые обнаружено, что фосфорилирование белка оболочки в составе вириона ХВК i i индуцирует конформационные изменения в структуре БО ХВК, вследствие чего РНК ХВК в составе вириона приобретает способность транслироваться. Доказано, что сайты фосфорилирования БО ХВК в составе 8Ириона находятся в концевом районе молекулы БО ХВК. БО вируса и образование комплекса с ТБ1. При этом фосфорилирование и взаимодействие с ТБ1 осуществляются в пределах различных областей молекулы БО ХВК. Впервые показано, что РНК в составе комплекса ТБ1ХВК становится доступной для рибосом не путем котрансляционного раздевания, а вследствие быстрой и кооперативной разборки нуклеокапсида, индуцируемой рибосомами на начальном этапе трансляции РНК ХВК, даже в условиях подавления синтеза вирусспецифических белков циклогекси МИДОМ. Передача индуцированного транспортным белком сигнала линейной дестабилизации вдоль полярно ориентированного спирального нуклеокапсида, приводящего к кооперативной трансляционной разборке частиц ХВК, представляет собой неизвестный до сих пор способ регуляции трансляции вирусных РНК. Практическая ценность работы. Результаты работы могут быть использованы в практике научных исследований в области молекулярной биологии и вирусологии. Полученные данные, можно применить при создании экспрессирующих конструкций в биотехнологии и получении трансгенных растений. Материалы работы используются при чтении курсов лекций на Биологическом факультете МГУ им. М.В. Апробация работы. Материалы диссертации докладывались и обсуждались на российских и международных конференциях и симпозиумах в том числе на XII Международном вирусологическом конгрессе Париж, XIII конгрессе Федерации европейских обществ физиологов растений Греция, Международной конференции в честь А. С.Спирина Синтез белков Пущино, Международном симпозиуме Сигнальные системы растительной клетки Москва, на семинаре Европейского биохимического общества Vi Ivi Греция, ой Ежегодной конференции Американского вирусологического общества Канада, Международной конференции Фундаментальные и прикладные проблемы фитопатологии Ялта, Курсах ФЕБО Геном вирусов растений структура и экспрессия Рига, . СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ. Транспортные белки тобамовирусое образуют с РНК рибонуклеопротеидный комплекс и подавляют трансляцию РНК в составе комплекса. Вирус табачной мозаики ВТМ представитель тобамовирусое, палочковидных вирусов растений длина 0 нм диаметр нм. Геномная плюс РНК состоит из нуклеотидов и содержит, по крайней мере, четыре открытые рамки трансляции ОРТ. Геном ВТМ кэпирован, а Зпроксимапьная нетранслируемая последовательность включает около 0 нуклеотидов и формирует тРНКподобную структуру. Белки 6К и 3К являются компонентами вирусной репликазы транслируются непосредственно с геномной РНК. Два других белка транспортный белок ТБ К и белок оболочки БО . К транслируются с субгеномных РНК МевЫ е1 а. Мо а . Более десяти лет назад были получены первые результаты, свидетельствующие о том, что в зараженных ВТМ растениях присутствуют информосомоподобные рибонуклеопротеидные РНП комплексы Эогокбоу е а. После обнаружения РНКсвязывающих свойств у ТБ ВТМ СОУбку а. РНП комплексы могут быть образованы кооперативно связанными с вирусной РНК молекулами ТБ. Сйогеку а. РНП комплексы представляют собой транспортные формы, и РНК в их составе должна выводиться из цикла репликации и переключаться на выполнение транспортной функции. Мы предположили, что это может быть достигнуто, если ТБ окажется способным препятствовать трансляции РНК, благодаря своей РНКсвязывающей активности. Влияние транспортных белков на трансляцию РНК в бесклеточных белоксинтезирующих системах ББС из лизата ретикулоцитов кролика ЛРК или экстракта зародышей пшеницы ЭЗП, исследовали, добавляя экспрессированные в бактериях ТБ в трансляционную систему либо в свободном состоянии, либо в форме предварительно сформированных РНП комплексов. Поскольку связывание транспортных белков с РНК является неспецифическим, те.