Структурная организация плазмид Р группы несовместимости RP4, RK2, R751 и R906

• Автор: Крупенко, Майя Андрониковна
• Шифр специальности: 03.00.03
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1985
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 149 c. : ил

Сравнительное исследование опубликованных последовательностей на основании компьютерного анализа , показывает возможность подобной генетической организации и у других i элементов I4 , I3 и I2 рис. I1 элемент имеет по две открытые рамки считывания на каждой из нитей ДНК, а также последовательности, характерные для промоторов i x и последовательности, комплементарные 3концу 1бз рРНК последовательность i . Терминатор транскрипции В I1 не обнаружен. Белки, кодируемые генами i и i , ответственны за слияние плазмид, индуцированное элементом I1 , хотя необходимость белка I пока предположительна. Возможно, что связывание I и I белков с I происходит при участии некоторых клеточных белков i . I4. I1 и I2 содержат три открытые рамки считывания элементы I и I, скорее всего, содержат одну открытую рамку считывания, которая в случае I кодирует два белка, отличающиеся по своим концам и функциям. В элементе I2 имеются последовательности, сходные с известными терминаторами транскрипции и отсутствуют последовательности, напоминающие последовательности известных промоторов . I , несущий два больших прямых повтора длиной в 0 п. Концы всех I элементов содержат инвертированные повторы I длиной 9 п. Вероятно, именно в этих последовательностях находятся сайты, с которыми взаимодействует белок транспозиции транспозаза ii . Возможно также, что именно i являются незаменимыми компонентами транспозиции i элементов, т. I3. Транспозоны, имеющие на концах лишь короткие инвертированные повторы. Это ТпЗ и семейство близкородственных эму элементов. Транспозоны, фланкированные прямо направленными I элементами или же инвертированными I элементами ,. II. Тп1 , Тп, Тп , Тп , Тп , Тп4 , Тп1 , Тп1 . Все они имеют аналогичную структуру последовательность порядка 5 т. Генетическая организация. Транспозон ТпЗ п. Концевые инвертированные повторы высококонсервативны во всем семействе ТпЗэлемента и содержат специфическую последовательность АЦГАААА ,. Реципрокная рекомбинация в сайте прямо повторенных транспозонов, что приводит к дезинтеграции донора и реципиента СО включенным новым ТпЗ i ,. Предположение о том, что коинтеграты являются промежуточными продуктами транспозиции, а дезинтеграция происходит вследствие сайтспецифической рекомбинации, независимо выдвинуто двумя группами авторов i . Для первого этапа транспозиции нужны функции продукта гена фермента транспозазы с мол. Д. На основании результатов изучения вторичной структуры фермента предполагается, что белок состоит из двух доменов. Очищенная транспозаза прочно, но неспецифически связывается с однонитевой ДНК, не оказывая при этом предпочтения концевым повторам транспозона, что находится в
противоречии с генетическими результатами i . Транскрипция гена начинается с го нуклеотида, трансляция терминируется стопкодоном у го нуклеотида внутри концевого повтора рис. Повидимому, РНКполимераза транскрибирует не только всю эту последовательность, но считывает и соседний с ТпЗ элементом ген. Следовательно, транспозон ТпЗ может быть использован как бродячий промотор ,. Предполагается, что количество транспозазы лимитирует частоту транспозиции . Дезинтеграция коинтегратов происходит в специфических сайтах вследствие сайтспецифической рекомбинации внутри АТбогатой последовательности длиной в п. Последовательность эта локализована между м и м нуклеотидами рис. Для дезинтеграции коинтегратов необходим продукт гена фермент резольваза с мол. Д i . I Кгавпот iii ,. Биохимические исследования резольвазы транспозона дают несколько предпосылок для описания процесса дезинтеграции. Фермент превращает суперспирализованную плазмиду, содержащую сайты в прямо повторенной ориентации,в сцепленные рекомбинатные кольца Д1. Энергия фосфатных связей, разрушенных во время рекомбинации, запасается в ковалентном комплексе резольвазаДНК i ,. Сайт разрезания транспозона ТпЗ находится в палиндромной последовательности ТТАТАА ЕрИ нуклеотиде рис. Рис. Часть нуклеотидной последовательности транспозона ТпЗ . Очень вероятно, что связывание резольвазы с репрессором влияет и на регуляцию экспрессии траяспозазы и индуцирует дезинтеграцию коинтегратов. Но как регулируются эти активности, все еще неизвестно.