Гены фактора некроза опухолей и лимфотоксинов: регуляция экспрессии и анализ биологических функций методом генетического нокаута

• Автор: Купраш, Дмитрий Владимирович
• Шифр специальности: 03.00.03
• Научная степень: Докторская
• Год защиты: 2006
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 48 с. : ил.; 19х14 см

ОГЛАВЛЕНИЕ

Список сокращений

Общая характеристика работы

Содержание работы

Глава I. Клонирование нуклеогидных последовательностей локуса ФИОЛТ и конструирование линий мышей с генетическим нокаутом.
Глава 2. ЛТбета. Ре1уляторные последовательности промотора и фалскринпионные факторы в Глкмфоцигах. ключевая роль ЛТбега в формировании и поддержании структуры вторичных лимфоидных органов.
Глава 3. ФНО. Роль белков семейства МРкВгс1 в транскрипции генов локуса ФНОЛТ. Ключевая роль ФНО в защите от бактериальных инфекций. Роль ФЛО в формировании Пейероаых бляшек.
Глава 4. ЛГальфа. Высокоаффииный участок связывания транскрипционных факторов семейства ЯР АТ в промоторе. Аномалии развития лимфоидных органах и нормальная продукция ФНО у мышей с чистым генетическим нокаутом.
Глава 5. Анализ вырожденных и кооперативных сигнальных путей ФНО и ЛТ на мышах с комбинаторными генетическими нокаутами ФНО. ЛТбета и ЛТальфа.

Список публикаций но теме диссертации

Список сокращений

ФНОР1, ФНОР2 рецепторы ФНО 1 и 2 типа, соответственно ФН физиологическая форма ФНО, гомотркмер ФНО фактор некроза опухолей см.
Т.П.Н. тысяча пар нуклеотидов РНК рибонуклеиновая кислота ГТЦР полимеразная цепная реакция п.н. пара нуклеот идов ЛТбета лимфотоксин бета
ЛТапьфа3 одна из физиологических форм Iальфа, гомелример ЛТальфа лимфотоксинальфа
ЛТ лимфотоксин, мембранносвязанная молекула, состоящая из двух субьсдиниц ЛТальфа и ЛГбста см. также
ЛЛС липополисахарид
ДНК дезоксирибонуклеиновая кислота
англоязычный вариант ФНО i
форболмиристилацегаг англоязычная аббривсатура
семейство транскрипционных факторов, родственных и .
Содержит белки , 2, , и .
ядерный транскрипционный фактор кВ
семейство транскрипционных факторов, родственных ядерному фактору активированных Тклеток iv
англоязычный вариант ЛТ xi
x система рекомбинации, основагшая за использовании рекомбмназы Сгс фага Р и ее участка узнавания x , 1 тысяча пар нуклеотидов т.п.н.
семейство транскрипционных факторов, гомологичных
1 семейство транскрипционных факторов, гомологичных 1 .
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
Актуальность


Анализ вырожденных и кооперативных сигнальных путей ФНО и ЛТ на мышах с комбинаторными генетическими нокаутами ФНО. ЛТбета и ЛТальфа. ФНОР1, ФНОР2 рецепторы ФНО 1 и 2 типа, соответственно ФН физиологическая форма ФНО, гомотркмер ФНО фактор некроза опухолей см. Т.П. Н. тысяча пар нуклеотидов РНК рибонуклеиновая кислота ГТЦР полимеразная цепная реакция п. ЛТ лимфотоксин, мембранносвязанная молекула, состоящая из двух субьсдиниц ЛТальфа и ЛГбста см. Содержит белки , 2, , и . Сгс фага Р и ее участка узнавания x , 1 тысяча пар нуклеотидов т. Актуальность проблемы. Супсрсемейсгво фактора некроза опухолей ФИО и соответствующее супсрсемейство рецепторов ФИО представляет собой поразительный пример взрывной экспансии и хоэволюции семейств сигнальных молекул, необходимых для регулировалия сложных взаимодействий между различными типами клеток в организме млекопитающих. Подсемейство лигандов, состоящее из ФНО, альфа и ЛТбста, выделяют кз суперссмсйства ФНО по следующим причинам I гены, кодирующие эти три цитоюша, находятся вместе в компактном докусе размером всею тысяч пар нуклеотидов ттш 2 аминокислотные последовательности белков подсемейства ФНОЛГ имеют болсс высокую гомологию друг с другом, чем с другими белками ФНО семейст ва, что свидетельствует об их эволюционном родстве 3 гомотримеры ФИО, и ЛГальфа взаимодействуюг с одними и теми же рецепторами ФНОР1 и ФНОР2 4 Iальфа и ЛТбста образуют гетеротример ЛТальфйЛТбега, который взаимодействует с рецептором ЛТбега Таким образом, представляется необходимым комплексное изучение функционирования всех трех генов локуса ФНОЛТ. ФНО и 1 были первоначально открыты и описаны как противоопухолевые и цнтосгатичсские факторы, однако в дальнейшем выяснилось, что они предегавляют бой многофункциональные цитокины, медиаторы развития и функционирования иммунной системы. Регуляция биологической активнее ФНО и ЛТ регулируется на многих уровнях, начиная с транскрипции, трансляции и секреции лигандов и заканчивая многочисленными внутриклеточными молекулами, тормозящими либо усиливающими запускаемые рецепторами ФНО и 1 сигнальные каскады Любое внешнее вмешательство в эту сложную систему приводит к разнообразным и не всегда предсказуемым последствиям. В частности. ФНО нашел лишь очень раничснное применение в качсспю противоопухолевого препарата вследствие своей высокой системной токсичности. Эго открытие привело к созданию и внедрению в зарубежную клиническую практику препаратов, фармакологическое действие которых основано на блокировании связывания ФНО с рецепторами ФИО на поверхности клеток. Такая блокада существенно облегчает симптомы таких заболеваний, как ревматоидный артрит и болезнь Крона, однако одновременно ослабляется иммунитет пациентов, что приводит к повышению частоты Вклеточкых лимфом и к увеличению вероятности реактивации латентного туберкулеза. Таким образом, понимание регуляции и биологических функций ФНО и родственных ему ЛТальфа и ЛТбста на молекулярном уровне имеет значение не только для молекулярной биологии и иммунологии, но и для практической медицины. Цель работы. В данной работе представлен цикл исследований, включающий в себя регуляцию генов ФНО, ЛТальфа и ЛТбега в клеточных линиях н в первичных клеточных культурах мыши и человека, получение линий мышей с генетическими нокаутами ФНО, ЛТальфа и ЛТбета поодиночке и в различных комбинациях комбинаторные нокауты, и анализ биологических функций ФНО и ЯГ с использованием этих линий мышей. Основные задачи исследования. Клонирование новых нуклеотидных последовательностей локуса фактора некроза опухолей ФНОУлимфотоксина ЛТ, анализ последовательностей, в том числе компьютерный, приготовление молекулярных проб, экспрсссионвых конструктов и конструктов с геномрепортером. Анализ регуляторных последовательностей и факторов транскрипции, участвующих в регуляции экспрессии генов ФНО, ЛТальфа и ЛТбега генов локуса в первичных культурах клеток и в клеточных линиях. Получение лилий мышей с одиночным и комбинаторным генетическим нокаутом генов ФНО, ЛТальфа и Л Гбета в клетках зародышевого пути.