Получение и характеризация рекомбинантных антител человека против ортопоксвирусов

• Автор: Морозова, Вера Витальевна
• Шифр специальности: 03.00.03
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2005
• Место защиты: Кольцово
• Количество страниц: 125 с. : ил.

Оглавление

Список сокращений.

Введение

Глава 1. Обзор литературы.

1.1.Краткая классификация семейства поксвирусов

1.2.Структура и морфогенез ортопоксвирусов.

1.3.Краткая характеристика генома ортопоксвирусов.

1.4.Механизмы распространения вируса

1.5.Основные методы исследования ортолоксвирусных белков

1.6. Белки вириона

1.6.1.Основные белки сердцевины вириона.

1.6.2.Мембранные белки зрелой вирусной частицы.
1.6.3.Белки дополнительных мембран вириона
1.7.Использование иммуноглобулинов, направленных против ортопоксвирусов.
1.8. Фаговый дисплей
Глава 2. Материалы и методы
2.1.Реактивы и материалы
2.2.Метод ы.
Глава 3. Результаты
3.1.Получение препаратов ортопоксвирусов
3.2.Аффинная селекция антител против вируса осповакцины из иммунной
0 библиотеки.
3.3. Аффинная селекция антител против вируса осповакцины из синтетической библиотеки
3.4. Аффинная селекция фаговых антител против вируса натуральной оспы
из синтетической библиотеки.
З.б.Отбор фаговых антител против вируса эктромелии
3.6.Определение аминокислотных последовательностей отобранных одноцепочечных антител
3.7.Исследование связывания отобранных фаговых антител с различными ортопоксвирусами
3.8.Исследование связывания фаговых антител, отобранных из синтетической библиотеки с различными штаммами вируса натуральной оспы
3.9.Исследование антигенной специфичности отобранных антител.
3Исследование вируснейтрализующих свойств антител.
Глава 4. Обсуждение
Список литературы


Впервые обнаружены антитела, обеспечивающие различное связывание штаммов вируса натуральной оспы, обладающих разной вирулентностью vi и vi i. В ходе данной работы впервые были отобраны одноцепочечные антитела человека, способные подавлять инфскционность вирусов осповакцины, оспы коров и эктромелии. На основе данных антител в датьиейшем могут быть сконструированы полноразмерные антитела человека. Такие полноразмерные антитела человека, после проверки их противовирусных свойств в модельных экспериментах на животных, могли бы представлять интерес для создания на их основе иммунопрофилактических средств, а также терапевтических препаратов предупреждения поствакцииальных осложнений и, возможно, лечения ортопоксвирусных инфекций. Апробации работы и публикации. По материалам диссертации опубликовано 4 статьи, получено положительное решение о выдаче авторского свидетельства. Материалы диссертации были представлены на Международных конференциях 5 v i I Пущиио, Россия, , I ii i Прага, Чехия, Берн, Швейцария, ой Международной конференции ivi Прага, Чехия, на XIII Международном вирусологическом конгрессе Париж, Научной конференции Проблемы инфекционной патологии в регионах Сибири, Дальнего Востока и Крайнего Севера Новосибирск, Международной научнопрактической школеконференции Цитокины. Воспаление. Иммунитет. СанктПетербург, Россия, 6 v i I, Пущино, Россия, , ой Международной конференции ivi Саванна, США, , ой Международной конференции ivi Туксон, США, , ой Международной конференции ivi Барселона, Испания, . Вклад автора. ВБЬ 34, вместе с автором участвовали А. А.Гуськов, Е. Б.Сокунова, Т. Э.Юи, Е. В.Жираковская, Е. И.Бовшик, к. Н.В. Тикунова. Тестирование антител на наличие вируснейтрализующей активности проводилось в лаборатории общих вирусов, руководитель к. Е.Ф. Беланов, в тестировании антител принимали участие вместе с автором Н. И.Бормотов и З. Ф.Киселева. Все остальные эксперименты и анализ полученных данных сделаны лично автором. Глава 1. Поксвирусы xvii представляют собой обширное семейство крупных, ДНКсодержащих вирусов, реплицирующихся в цитоплазме клеток позвоночных и беспозвоночных. Семейство поксвирусов делится на два подсемейства поксвирусы позвоночных xvii и поксвирусы насекомых xvii. xvi В и xvi С. Подсемейство поксвирусов позвоночных включает восемь родов xvi, xvi, vixvi, ixvi, ixvi, ixvi, ixvi и xvi. Наибольший интерес среди них представляет род Ортопоксвирусов, к которому относят вирус натуральной оспы, являющийся возбудителем тяжелого генерализованного заболевания человека, а также ряд других вирусов, патогенных для человека и млекопитающих вирусы оспы обезьян, осповакцины, оспы коров, эктромелии, оспы верблюдов, а также поксиирус енотов, поксвирус полевок и Татера поксвирус. Вирионы ортопоксвирусов имеют сложное строение и крупные размеры. Размер частиц вируса осповакцины, полученных путем разрушения зараженных клеток, составляет примерно 0x0x0нм. По данным электронной микроскопии, вирионы поксвирусов имеют характерную овоидную или кирпичсобразную форму. В составе вириона выделяют ряд морфологически обособленных структур рис. . Общая схема морфогенеза ортопоксвирусов на примере вируса осповакцины представлена на рис. Этот процесс начинается с появления в цитоплазме скоплений гранулярного или фибриллярного электронноплотного материала, содержащего вирусные белки и ДНК i , . Данные скопления называются вироплазмой, она представляет собой начало формирования вирусной фабрики, которая включает в себя вироплазму и вирионы на разных стадиях сборки. Рис. Структура внеклеточного вириона ортопоксвирусов . IV.