Механизм функционирования и регуляция митохондриального К атф канала

• Автор: Негода, Александр Евгеньевич
• Шифр специальности: 03.00.02
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2001
• Место защиты: Пущино
• Количество страниц: 81 с. : ил

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1. ВЫДЕЛЕНИЕ И РЕКСМ1СТРУКЦИЯ МИТОХОНДРИАЛЬНОГО АТФ

ЧУВСТВИТЕЛЬНОГО КАЛИЕВОГО КАНАЛА

2. РЕГУЛЯЦИЯ МИТОХОНДРИАЛЬНОГО АТФЧУВСТВИТЕЛЫЮГО КАЛИЕВОГО

КАНАЛА.

2.1. Регуляция физиологическими агентами

2.2. Регуляция фармакологическими веществами

2.3. Регуляция БН и редокс агентами

3. ФИЗИОЛОГИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ МИТОХОНДРИАЛЬНОГО АТФ

ЧУВСТВИТЕЛЫЮГО КАЛИЕВОГО КАНАЛА
4. ОБЩНОСТЬ И РАЗЛИЧИЕ СВОЙСТВ МИТОХОНДРИАЛЬНОГО И
ЦИТОПЛАЗМАТИЧЕСКОГО КАТФ КАНАЛОВ.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
1. ВЫДЕЛЕНИЕ МИТОХОНДРИЙ И МИТОПЛАСТОВ
1.1. Выделение митохондрий печени крысы.
1.2. Выделение митохондрий сердца крысы.
1.3. Выделение митохондрий мозга крысы
1.4. Выделение митотастов из митохондрий печени крысы.
2. ВЫДЕЛЕНИЕ И ОЧИСТКА ТРАНСПОРТИРУЮЩЕГО БЕЛКА
3. ИЗУЧЕНИЕ ИОНТРАНСПОРТИРУЮ1 1ИХ СВОЙСТВ ТРАНСПОРТИРУЮЩЕГО
БЕЛКА ПРИ РЕКОНСТРУКЦИИ В БИСЛОЙНЫЕ ЛИПИДНЫЕ МЕМБРАНЫ БЛМ.
4. ИЗУЧЕНИЕ ИОНТРАНСПОРТИРУЮЩИХ СВОЙСТВ ВЫДЕЛЕННОГО БЕЛКА ПРИ
РЕКОНСТРУКЦИИ В ЛИГюсомы
5. ИЗУЧЕНИЕ ЭНЕРГОЗАВИСИМОГО ВХОДА КАЛИЯ В МИТОХОНДРИИ
СПЕКТРОФОТОМЕТРИЧЕСКИМ МЕТОДОМ
6. ИЗУЧЕНИЕ ПАРАМЕТРОВ ЗАВИСИМОГО ОТ РАЗОБЩИТЕЛЯ ВЫХОДА КАЛИЯ ИЗ
МИТОХОНДРИЙ С ПОМОЩЬЮ К СЕЛЕКТИВНОГО ЭЛЕКТРОДА.
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ.
1. СТРУКТУРНАЯ ОРГАИЗА1ЩЯ МИТОХОНДРИАЛЫ ЮГО А ГФЧУВСТВИТЕЛЬНОГО
КАЛИЕВОГО КАНАЛА
1.1. Свойства митохондриального Катф канала при реконструкции его в БПМ
1.2.Влияние АТФ на канал, реконструированный в БЛМ.
1.3. Реконструкция белкаканала в липосомы.
1.4.Изучение параметров АТФзависимого транспорта КТ в митохондриях.
1.5. Доказательство субъединичной структуры мигпоКатф канала.
2. РЕГУЛЯЦИЯ МИТОХОНДРИАЛЬНОГО АТФЧУВСТВИТЕЛЬНОГО КАЛИЕВОГ О
2.1. Изучение возможной роли фосфорилирования для регуляции митохондриального Катф канала
2.2. Выяснение места локализации нуклеотидсвязывающего центра
2.3. Регуляторы митоКлтФ канала
2.4. Природные активаторы митохондриального Кагф канала
ЗАКЛЮЧЕНИЕ.
ВЫВОДЫ.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


КАНАЛА. ЦИТОПЛАЗМАТИЧЕСКОГО КАТФ КАНАЛОВ. Выделение митохондрий печени крысы. Выделение митохондрий сердца крысы. Выделение митотастов из митохондрий печени крысы. ИЗУЧЕНИЕ ИОНТРАНСПОРТИРУЮ1 БЕЛКА ПРИ РЕКОНСТРУКЦИИ В БИСЛОЙНЫЕ ЛИПИДНЫЕ МЕМБРАНЫ БЛМ. МИТОХОНДРИЙ С ПОМОЩЬЮ К СЕЛЕКТИВНОГО ЭЛЕКТРОДА. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ. Влияние АТФ на канал, реконструированный в БЛМ. Реконструкция белкаканала в липосомы. Изучение параметров АТФзависимого транспорта КТ в митохондриях. Доказательство субъединичной структуры мигпоКатф канала. ЗАКЛЮЧЕНИЕ. ВЫВОДЫ. АТФчувствительные калиевые каналы внутренней мембраны митохондрий, которые по многим свойствам напоминают открытые Нома , АТФингибируемые каналы плазматической мембраны сердечных клеток, были обнаружены в митохондриальной мембране сравнительно недавно I . Однако, еще в г. Мироновой с соавт. Ктранспортирующий белок Миронова и др. Гарлида США исследованиях, формирует АТФчувствительный К канал . Предполагается, что основное физиологическое значение митохондриальных КЛтф митоКлтф каналов связано с регуляцией объема митохондрий, что в свою очередь оказывает влияние на такие процессы, как дыхание, синтез АТФ, окисление жирных кислот . Кроме того, одна из функций митохондриальных Кдтф каналов связана с обеспечением несократительного термогенеза при выходе гибернирующих животных из состояния зимней спячки Федотчева и др. Миронова и др. В последнее время интерес к исследованию этого канала возрос, что связано с обнаружением его роли в защите сердца при ишемии i . i . Катф каналов в настоящее время изучен недостаточно. Актуальным является также поиск активаторов этого канала, особенно природных, так как при существующей концентрации АТФ в клетке этот канал должен находиться в закрытом состоянии. Даже при экстремальной гипоксии концентрация АТФ в клетке не снижается до уровня, необходимого для открытия канала i . Поэтому в клетке должны существовать специальные механизмы активации митоКдтф канала. Как известно, открытие этого канала при гипоксии играет существенную роль в защите сердца от ишемических повреждений i . i . Целью настоящей работы являлось изучение структуры и механизмов регуляции митохондриального АТФчувствительного К канала. В основные задачи исследования входило изучение структурной организации митоКдтф канала, выяснение вопроса происходит ли фосфорилирование белкаканала при его связывании с АТФ, определение места связывания этого нуклеотида с каналом в митохондриальной мембране, а также поиск фармакологических агентов его регулирующих. Кроме того, в задачу работы входил поиск физиологических регуляторов этого каната. Научная новизна работы. Впервые получены доказательства того, что митохондриальный АТФчувствитсльный калиевый канал состоит из двух субъединиц, и что каналообразующей субъединицей является белок с молекулярной массой кДа.