Исследование роли митохондрий в апоптозе в тимоцитах и клетках культуры U937

• Автор: Галитовский, Валентин Евгеньевич
• Шифр специальности: 03.00.02
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2001
• Место защиты: Пущино
• Количество страниц: 97 с. : ил

Введение.

II. Обзор литературы.

Глава I Виды клеточной гибели.

1. Апоптоз и некроз два вида клеточной гибели.

2. Характерные признаки апоптоза.

3. Межпуклеосомная фрагментация ДНК один из основных признаков апоптоза в тимоцитах.

4. Регуляторные механизмы апоптоза.

5. Молекулярные механизмы апоптоза.

6. Роль цистеиновых протеаз каспаз в апоптозе.

7. Роль митохондрий в апоптозе.

8. Снижение мембранного потенциала митохондрий

при апоптозе.
9. Роль цитохрома с в апоптозе.
. Механизмы выхода цитохрома с из митохондрий. Глава II. Индукция нсспсцифичсской проницаемости
митохондриальной мембраны.
. Кальциевый гомеостаз клетки и его регуляция.
2. Роль митохондрий в регуляции клеточного гомеостаза.
3. Система аккумуляции ионов Са.
4. Система выхода ионов Со из митохондрий.
5. Индукция неспецифической проницаемости митохондриальной мембраны.
Глава III. Материалы н методы исследования.
1. Выделение и подготовка тимоцитов к опыту.
2. Выделение митохондрий печени.
3. Оценка функциональной активности митохондрий.
4. Оценка активности систем транспорта ионов Са в митохондриях пермеабилизованных тимоцитов.
5. СпектроФотометрическое определение межнуклеосомной деградации ДИК.
6. Электрофоретическое определение фрагментации ДИК.
7. Облучение.
8. Оценка содержания А ТР.
Глава IV. Результаты собственных исследований.
1. Ингибиторы митохондриальной энергетики предотвращают межнуклеосомную фрагментацию
ДНК в тимоцитах при апоптозе.
2. Влияние ингибиторов энергетики митохондрии на индукцию неспецифической проницаемости митохондриальной мембраны.
3. Исследование аккумулирующей способности митохондрий тимоцитов при апоптозе.
4. Влияние энергетического состояния митохондрий на межнуклеосомную фрагментацию
ДНК в тимоцитах после облучения.
5. Никлоспориин А предотвращает падение мембранного потенциала митохондрий и выход ионов кальция в отсутствие индукции неспецифической проницаемости митохондриальной мембраны.
6. Исследование подавления ингибиторами митохондрильной энергетики межнуклеосомной фрагментации ДНК в клетках 7.
Глава V. Обсуждение результатов.
Выводы.
Список литературы


Список литературы. I. Введение. Анализируя морфологические и биохимические изменения, происходящие в процессе гибели клетки, исследователи обнаружили и описали два вида клеточной гибели апоптоз и некроз i. Некротическая гибель является пассивным ответом клетки на внешние воздействия, которые повреждают, прежде всего, плазматическую мембрану i. , . В результате повреждения плазматической мембраны, а виоследствие и мембран клеточных оргаиелл, происходит выброс лизосомальных ферментов в межклеточное пространство, что приводит к возникновению очага воспаления i, . Апоптоз в отличие от некроза является активным процессом самоубийства клетки необходимым для нормального протекания процессов эмбрио и морфогенеза , , . Эта форма клеточной гибели имеет место практически на всех этапах развития и жизнедеятельности организма. Сбой в функционировании механизмов, лежащих в основе апоптоза, способен вызвать целый ряд патологических изменений гак ослабление апоптоза в результате утраты рецепторов которые принимают участие в формировании сигнала к его развитию, определяет повышенную всроягность формирования аутоиммунных процессов. И напротив, повышенная склонность к апоптозу приводит к заболеваниям, связанным с развитием атрофических процессов Ярилин, . i, , i. , . Выяснение механизмов клеточной гибели при различных патологиях позволяет не только понять причины заболеваний, но и осуществлять направленный поиск способов лечения. В последние годы к изучению процесса апогтгоза привлечено значительное внимание исследователей, работающих в разных областях биологии и экспериментальной медицины. Исследуя ряд морфологических признаков апоптоза, таких как уменьшение объема клетки, образование изгибов на плазматической мембране и образование апоптозных телец, были идентифицированы и биохимические признаки апоптоза, такие как межнуклеосомная деградация хроматина, активация целою ряда цистсиновых протсаз этим ферментам многие исследователи придают ключевую роль в реализации апоптоза, появление фосфат ид ил ссрина на наружной стороне плазматической мембраны и ряд других. В последнее десятилетие появились данные о непосредственном участии митохондрий в апоптозс. Было показано, что в первые часы апоптоза происходит падение мембранного потенциала Ду на М1гтохонлрнатьной мембране i, . По мнению этих авторов, снижение мембранного потенциала обусловлено индукцией нсспецифической проницаемости митохондриальной мембраны вследствие открытия поры во внутренней мембране митохондрий. Эго приводит к набуханию органелл. i, . 1, и прокаспазой9. Именно этой каспазс принадлежит ключевая роль в реализации апоптоза. В ряде работ апоптоз удавалось инициировать ингибиторами энергетики митохондрий такими как ингибитор дыхательной цепи антимицином, либо разобщитель окислительного фосфорилировання СССР. Следует отмстить, что при этом апоитоз наблюдали и в присутствии ингибитора митохондриальной АТФазы олигомицина, соединения, не оказывающего непосредственного влияния на величину мембранного потенциала , . Следует также отмстигь. Са7 из митохондрий, и, следовательно, предотвращать индукцию неспецифической проницаемости митохондриальной мембраны, поскольку кальциевая нагрузка является необходимым условием для открытия поры. Кроме того известно, что открытие нссслскгнвнон поры, скорее всего, свидетельствует о некротических изменениях в клетке, нежели об изменениях апонготического характера , . Таким образом, суммируя вышеизложенные данные, нами была поставлена задача, исследовать роль митохондрий как в инициации, так и в реализации программируемой гибели клетки. Исследование функциональной активности, в частности, Са2 аккумулирующей способности митохондрий при апоптозс. Исследование роли индукции неспецифической проницаемости митохондриальной мембраны для реализации апоптоза. Сопоставление роли митохондрий в индукции апоптоза в тимоцитах и клетках культуры 7.