Маутнеровские нейроны рыб как объект для испытания ядов паукообразных и их фракций с целью поиска новых нейротоксинов, взаимодействующих с актином

• Автор: Михеева, Ирина Борисовна
• Шифр специальности: 03.00.02
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1999
• Место защиты: Пущино
• Количество страниц: 150 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
Введение

1. Литературный обзор

1.1. Морфофункциональные исследовании пластичности нейронов с использованием фармакологических воздействий.

1.1.1. Морфофункциональные исследования пластичности нейронов.

1.2. Использование идентифицированных нейронов

Маутнера в изучении механизмов пластичности.

1.2.1. Маутнеровские нейроны, структу ра и функция.

1.2.2. Морфофукционалытые исследовании Маутнеровских нейронов рыб и амфибий.

1.3. Использование специфических нейротокеннов в качестве фармакологических инструментов в

нейробнологических исследованиях.

1.4. Роль цитоскелега в пластических изменениях нейронов
и синапсов.
2. Объекты и методы исследования.
2.1. Объекты исследования.
2.2. Исследованные яды.
2.3. Фракционирование цельного яда среднеазиатского
черного скорпиона.
2.4. Инъекции веществ.
2.5. Оценка функционального состояния Маутнеровских
нейронов по поведению рыб в кольцевой камере.
2.6. Естественная стимуляция Маутнеровских нейронов.
2.7. Адаптация Маутнеровских нейронов к дли тельной естественной стимуляции.
2.8. Электрофитиолотаческие методы исследования.
2.9. Электронномикроскопические методы.
2 Морфометрическнй анализ.
2 Метод негативного контрастирования.
3. Результаты.
3.1. Исследование влияния на функциональное состояние МП золотых рыбок аппликации цельных ядов некоторых паукообразных.
3.1.1. Характеристика обшен токсичности исследованных ядов.
3.1.2. Оценка проницаемости .тля гематоэнцефалического барьера.
3.1.3. Оценка специфической ненро токсичности исследованных ядов.
3.2. Изучение влияния аппликации цельною яда скорпиона в сочетании с утомительной стимуляцией на функциональное состояние и ультраструктуру МН золотой рыбки.
3.2.1. Результаты косвенной оценки функционального состояния МН золотых рыбок.
3.2.2. Результаты улы раструктурных исследований.
3.3. Исследование влияния аппликации некоторых индивидуальных фракций, выделенных из яда
скорпиона на функциональное состояние МП золотых рыбок.
3.3.1. Характеристика обшей токсичности некоторых фракций, выделенных из яда скорпиона.
3.3.2. Косвенная оценка функционального состояния МН.
3.3.3. Исследование экстраклеточной электрической активности МН.
3.4. Ультраструктурный анализ действия на МН фракций 6 и 9, выделенных из яда скорпиона.
3.4.1. Качественный ультраструктурный анализ.
3.4.2. Количественный анализ афферентных синапсов МН после действия фракций 6 и 9, выделенных из яда скорпиона.
3.5. Исследование взаимодейсгвия фракций яда, обладающих потенциальны ми свойствами взанмодейсгвова ть с нейрональным актином, с хроматографическн чистым мышечным актином в молельных экспериментах i vi.
4. Обсуждение.
5. Выводы.
6. Список литературы.
Введение


Таким образом, получены абсолютно новые данные о существовании в яде скорпиона фракций, взаимодействующих с нейрональным актином, которые впоследствии могут послужить объектом для дальнейшей очистки и молекулярнобиологической идентификации. Уже на достигнутом уровне очистки эти фракции могут оказаться полезными ненрофармакологическими инструментами, пригодными для исследования актина i vi и для тонких вмешательств i viv в структурную организацию и функцию цитоскелета живых клеток, для выяснения механизмов пластичности, адаптации и памяти на клеточном и мембранном уровнях. МП i vi после косвенной оценки его по поведению, измененному аппликацией физиологически активных веществ или естественной стимуляцией. Установлена четкая корреляция между прямым и косвенным методами оценки функции МН. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ. ВОЗДЕЙСТВИЙ. МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ ПЛАСТИЧНОСТИ НЕЙРОНОВ. Из широкого круга проблем, связанных с организацией и физиологией головного мозга, большой интерес представляет функциональная морфология нервной системы. Постановка этих вопросов своей историей обязана применением в биологии методов электронной микроскопии и мнкроэлектродной техники Питерс и др, Артюхина, . На сегодняшний день электронная микроскопия дает наиболее полное представление о строении основных структур клеток и межклеточных образований Саркисов, Боголепов, Бабминдра, Брагина, Бабминдра и др, . Благодаря ей было обнаружено разнообразие элементов синапсов головного мозга, что послужило основой для предположения об изменчивости синаптической организации и причастности внутрнсинаптических процессов к мозговым функциям Бабминдра, Маннна, Косицын, . Сочетание ультраструктурного подхода в изучении идеггифицированных нейронов с воздействиями на них, индуцирующими изменение функции этих нервных клеток, дает новую информацию о процессах, которые лежат в основе приспособления клеток и синапсов в ответ на изменение макро или микроокружения. Такой подход приближает к решению одной из ключевых задач современной морфофнзиологни ультраструктурной диагностике
определенного функционального состояния нейронов по структурным признакам нейронов и синапсов. Изучение механизмов пластичности единичной нервной клетки сводится к выявлению меры пластичности отдельных звеньев афферентных синапсов, синаптических мембран, внутриклеточных компонентов постсннаптических и других областей цитоплазмы. Подразумевается, что совокупность определенных структурных особенностей всех перечисленных звеньев определяет то или иное функциональное состояние нейронов Пушкин, Бабминдра, , Ярыгин, Попова, . Чтобы иметь возможность оценить вклад каждого звена в функцию отдельного нейрона, нужны надежно воспроизводимые экспериментальные высокоспецифичные и тонкие вмешательства и адекватные объекты, позволяющие от опыта к опыту исследовать одни и те же клетки или даже отдельные участки клетки. Этим требованиям отвечают идентифицированные нейроны Среди позвоночных животных классическим объектом такого рода может служить Маутнеровский нейрон рыб и амфибий. Л в качестве инструментов для тонких вмешательств в нейробиологических исследованиях давно зарекомендовали себя специфические нейротоксины. ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ИДЕНТИФИЦИРОВАННЫХ НЕЙРОНОВ МАУТНЕРЛ В ИЗУЧЕНИИ МЕХАНИЗМОВ ПЛАСТИЧНОСТИ. ФУНКЦИЯ. Выбор объекта при исследовании различных проблем нейробиологии имеет важное значение. В настоящее время накоплено много данных, касающихся ультраструктури ы х перестроек, возникающих под воздействием разнообразных природных и экспериментальных условий. Эти результаты получены в основном на мозговых структурах или на клеточных популяциях, состоящих из большого числа нейрональных элементов, гетерогенных и по морфологии, и по функции Боголепов, . Однако обилие и сложность связей между клетками, недостаточность знаний об их исходном состоянии, невозможность контролировать одну и ту же клетку от опыта к опыту создают затруднения в получении однозначных результатов Бабмнндра, , Мошков, . В этом отношении удобным объектом в разнообразных нейробиологнческих исследованиях служат Маутнеровские нейроны МП костистых рыб и амфибий.