Исследование биологически активных в сверхмалых дозах регуляторных белков, выделенных из предстательной и молочной желез, а также молока

• Автор: Назарова, Полина Андреевна
• Шифр специальности: 03.00.02, 03.00.25
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2007
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 139 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

Глава 1. Обзор литературы

1.1. Регуляторные белки, биологически активные в сверхмалых дозах

1.2. Анатомическое и клеточное строение молочной и предстательной желез

Молочная железа

Структура ВКМ молочной железы

Предстательная железа

Структура ВКМ предстательной железы в норме и при патологии

1.3. Состав и свойства секретов молочной и предстательной желез

Молоко
Молоко как коллоидная система
Транспорт компонентов молока в клетках молочной железы
Состав секрета предстательной железы
Глава 2. Экспериментальная часть
2 Л. Используемые реактивы и оборудование
2.2. Получение тканевых экстрактов
2.3. Высаливание тканевых экстрактов сернокислым аммонием
2.4. Получение фракций супернатантов молока, а также препаратов сухого молока и детского питания
2.5. Изоэлектрофокусирование фракций супернатантов
2.6. Высокоэффективная жидкостная хроматография
2.7. Исследование препаратов регуляторных белков с помощью метода кругового дихроизма
2.8. Электрофорез белков в полиакриламидном геле
2.9. Определение концентрации белка во фракциях регуляторных белков
2 Определение влияния исследуемых гликопротеинов на вязкоупругие свойства мембран гепатоцитов мыши при кратковременном органном культивировании i vi
2 Получение поликлональной кроличьей антисыворотки
2 Иммуноферментный анализ антител I
2 Роллерное органное культивирование предстательной железы мыши i vi
2 Гистологическое исследование органных культур простат мышей после воздействия регуляторных белков, выделенных из предстательных желез быков
2 Исследование локализации регуляторных белков в тканях иммуногистохимическим методом
2 Атомносиловая микроскопия исследуемых РБ
2 Определение гидродинамического радиуса частиц РБ в водном растворе
2 Исследование РБ с помощью ядериого магнитного резонанса ЯМР
Глава 3. Результаты и их обсуждение
3.1. Регуляторные белки молока, молочной и предстательной желез крупного рогатого скота выделение и очистка
3.2. Локализация слабокислого РБ молока и слабокислого РБ предстательной железы в тканях молочной и предстательной желез, соответственно
3.3. Исследование влияния в СМД кислого и слабокислого регуляторных белков, выделенных из предстательных желез КРС, на состояние предстательных желез мышей в условиях роллерного культивирования i vi
3.4. Исследование РБ с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии
3.5. Исследование гидродинамического радиуса частиц РБ в водных растворах
3.6. Исследование состояния РБ с помощью атомной силовой микроскопии
3.7. Исследование РБ с помощью электрофореза в полиакриламидном геле ПААГ
3.8. Исследование вторичной структуры пептидных фракций слабокислого РБ предстательной железы и слабокислого РБ молока с помощью кругового дихроизма
3.9. Исследование РБ с помощью ядерного магнитного резонанса
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Например, фракции кислых и основных РБ, выделенных из тимуса млекопитающих, диаметрально различались по действию на отдельные фракции Тлимфоцитов фракция кислых белков оказывала влияние на ТЬ2 Тхелперы типа 2, а фракция основных белков на ТЫ Тхслперы типа 1 Казанский и др. Следовательно, фракция кислых белков тимуса препятствовала процессам, идущим по аутоиммунному механизму, а фракция основных белков стимулировала процессы клеточного иммунитета, обеспечивающих антибактериальную, противовирусную и противоопухолевую защиту организма. При исследовании РБ, выделенных из ткани нейральной сетчатки и пигментного эпителия глаза быка, было показано, что только фракция кислых белков сетчатки оказывала выраженное протекторное действие на нейроны сетчатки и клетки Мюллера, а фракция основных РБ пигментного эпителия эффективно действовала на адгезию между нейральной сетчаткой и пигментным эпителием, а также ингибировала пролиферацию пигментированных клеток Краснов и др. При исследовании РБ, выделенного из сыворотки крови млекопитающих значение р1 4,,7, удалось идентифицировать членный фрагмент структуры молекулы, ближайшим гомологом которого являлся домен адрсномсдуллииов гомологии. Необходимо отметить, что адреномедуллины, представляющие собой 8аминокислотные белки, не содержащие углеводов, значение изоэлектрической точки которых лежит около 6,0, экспрессируются эндотелиальными клетками сосудов. Функция адреномедуллннов мало изучена, вероятно, она связана с регуляцией гомеостаза сердечнососудистой системы Кйатига е а1. По мнению авторов этого исследования, идентификация членного фрагмента сывороточного РБ, позволяет поставить вопрос об исследовании его первичной структуры с помощью методов генной инженерии. Такой экспериментальный подход к установлению первичной структуры активно применяется в настоящее время, и он является особенно эффективным для проведения исследования малых количеств белка сложного состава Ямсков и др. Исследуемые РБ проявляют способность не осаждаться в насыщенном растворе сульфата аммония Ямскова, Резникова, Ямсков и др. Ввиду наличия сходства белков этих двух групп представляется необходимым более подробно рассмотреть свойства белков 0. В мозге быка в г был обнаружен первый представитель этого семейства , . Дальнейшее исследование показало, что данный белок представляет собой кислый белок с молекулярной массой кДа, значение i которого лежит в области значений 4,,3 i, vi, . Исследование вторичной структуры с помощью метода кругового дихроизма выявило наличие альфаспиралей спиралей и статистического клубка. При нагревании до С белки 0 денатурируют , i, период их полураспада при комнатной температуре составляет несколько часов , i . Аминокислотный анализ белка, выделенного из мозга быка, показал высокое содержание остатков дикарбоновых аминокислот глутаминовой и аспарагиновой, присутствие остатков серосодержащих аминокислот, ароматических, в том числе, триптофана. В области Сконца у молекул белков 0 обнаружен специфический аминокислотный мотив, получивший название , с помощью которого белки этого семейства связывают ионы кальция ii , , i . Необходимо отметить, что аминокислотный состав РБ также характеризуется наличием большого количества ссрина, глицина и остатков дикарбоновых кислот Ямсков и др. Таким образом, данный аминокислотный состав характерен для углеводсодержащих белков i, V, . В дальнейшем, используя моноклональные антитела к белку 0, выделенному из мозга быка, высокогомологичные белки были обнаружены практически во всех тканях млекопитающих, птиц, амфибий, а также в тканях беспозвоночных, но не в растениях , . Краснов и др. В настоящее время идентифицировано не менее белков 0,
объединенных в одно семейство Са связывающих белков. Для большей части представителей определена первичная структура и выявлена высокая степень гомологии , . Белки 0, согласно полученным данным, являются низкомолекулярными фосфорилированными полипептидами, не содержащими остатков углеводов, липидов, нуклеиновых кислот , , . Сравниваемые белки относятся к различным группам биорегуляторов, так как сопоставление свойств белков 0 негликопротеиновая природа, данные аминокислотного анализа и исследования вторичной структуры, термоденатурация и др.