Роль лейкемияингибирующего фактора в регуляции роста эмбриональных стволовых клеток и зародышей мыши в культуре

• Автор: Федорова, Виктория Викторовна
• Шифр специальности: 03.00.02
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2003
• Место защиты: Пущино
• Количество страниц: 124 с. : ил.

1 ii

7 i i i7 I6 ii

i ii I i iii I i iii i

v i i i
ii i i
3 i iv ii
i i
1 i
СОДЕРЖАНИЕ
ВВЕДЕНИЕ


Кроме того, мутантные линии ЭСК с нокаутами по генам ключевых компонентов рецепторных путей передачи Iсигнала , i, и 3 обладают эмбриональными свойствами и способны к цитодифференцировкам, как и стволовые клетки исходных линий . Таким образом, известные пути регуляции с участием рецепторных комплексов не являются единственными и достаточными для объяснения механизмов поддержания тотипотснтного состояния стволовых клеток при культивировании i vi. Для решения широкого круга современных биотехнологических и медицинских задач на основе использования методов трансгеноза и заместительной терапии бсспорнос преимущество перед любыми другими клеточными системами имеют тотипотентные ЭСК. Поэтому проблема сохранения и поддержания этих уникальных клеток в культуре, особенно в течение длительного периода, относится к числу наиболее значимых. В связи с этим основное внимание в данном исследовании было уделено изучению особенностей развития и культивирования ЭСК мыши, а также ранних зародышей, производными которых являются стволовые клетки. Эмбриональные стволовые клетки ЭСК млекопитающих. ЭСК позвоночных это нетрансформированные клеточные линии, полученные непосредственно из внутренней клеточной массы ВКМ доимплантационных зародышей на стадии бластоцист v, , i, , сохраняющие тотипотентное состояние и способность давать функциональные, дифференцированные типы клеток, как i vi, так и i viv . При переносе культивируемых ЭСК в бластоцисту, они включаются в эмбриональное развитие и участвуют в формировании всех тканей зародыша, включая генеративные, способствуя развитию химерных животных. Открытие ЭСК и их способности воспроизводить в системе i vi ранний эмбриогенез создало реальные предпосылки для проведения исследований по биотехнологии, молекулярной и клеточной биологии. Основные направления фундаментальных исследований, проводимых с использованием ЭСК. ЭСК, получение дифференцированной ткани для заместительной трансплантологии. Известно три типа эмбриональных стволовых клеток. Первый тип включает клетки, полученные из эмбриобласта доимплантационных зародышей млекопитающих. Именно их принято называть эмбриональными ЭСК v, , i, . Вторым типом эмбриональных линий клеток являются эмбриональных клегки карцином ЭКК. ЭКК получили из тератокарцином, состоящих из смеси дифференцированных клеток различных зародышевых слоев и недифференцированных стволовых клеток i v, . Недостатком ЭКК являются явные кариотинические отклонения и низкая степень участия в эмбиональном развитии при переносе в бластоцисту. К третьему типу эмбриональных стволовых клеток относятся примордиальные половые клетки зародыша ПТТКЗ i . От ЭСК их отличает высокая степень метилирования специфических генов , . Рис. I. олучение мышиных стволовых клеток по i,
Все три вида стволовых клеток имеют ряд общих свойств, однако только ЭСК являются аналогами зародышей млекопитающих и обладают всеми свойствами, присущими им. Широкие возможности использования мышиных ЭСК стимулировали интенсивные исследования по получению таких же линий клеток у ценных видов животных. Одна из первых работ в этой области была посвящена получению клеток сирийского хомячка i . Выход линий ЭСК составил приблизительно 1 от общего количества культивированных бластоцист, в то время как у мышей эта цифра составила . Были попытки получить ЭСК овец и свиней ii . Васильева и др. Однако нет положительных данных о потенциальных возможностях этих клеток i viv и их способности сохранять тотипогентнос состояние на протяжение продолжительного периода культивирования, в результате чего их называют ЭСподобными клетками. К настоящему моменту известно, что только три вида млекопитающих эффективно производят ЭСК, способные стабильно поддерживать тотипотентное состояние в культуре мышь, мартышка и человек v, , i а. И только две инбредные линии лабораторных мышей, а именно 9v, 6 и их гибриды, способны давать ЭСК . Повидимому, на эффективность получения и выделения линий ЭСК влияют генетические особенности организма. Основные характеристики ЭСК. ЭСК представляют собой мелкие округлые клетки с высоким ядерноцигоплазматичсским отношением.