Определение размеров и оптических свойств тромбоцитов методом лазерной дифракционной спектроскопии

• Автор: Космовский, Сергей Юрьевич
• Шифр специальности: 03.00.02
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2003
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 78 с. : ил

СОДЕРЖАНИЕ
ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Строение и свойства тромбоцитов

1.2 Процессы характеризующие активацию тромбоцитов

Адгезия тромбоцитов

Реакция высвобождения

Агрегация тромбоцитов

Изменение концентрации и размера тромбоцитов.

1.3 Рассеяние и поглощение света малыми частицами.

Метод лазерной дифракционной спектроскопии для определения распределения частиц по размерам.
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.
2.1 Метод лазерной дифракционной спектроскопии
Прибор i7 i. Блок схема.
Восстановления исходного распределения частиц по размерам из картины
светорассеяния.
Объемная концентрация рассеивающих частиц
2.2 Определение размеров и оптических свойств тромбоцитов.
2.3 Индукторы активации тромбоцитов.
2.3 Выделение тромбоцитов.
2.4 Определение концентрации тромбоцитов на счетчике клеток.
2.5 Турбидометрический метод исследования агрегации тромбоцитов
2.6 Метод сканирующей электронной микроскопии для исследования количества и морфологии адгезированных тромбоцитов
2.7 Схема проведения эксперимента.
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ.
3.1 Выбор экспериментальных условий для измерения углового распределения рассеянного на тромбоцитах света
3.2 Определение размеров и оптических свойств тромбоцитов.
Выбор модели анализа и презентации с помощью минимизации
коэффициента невязки
Вычисление среднего объема тромбоцитов
Вычисление концентрации тромбоцитов.
Использование концентрации тромбоцитов для выбора презентации
Процедура получения распределения тромбоцитов по размерам,
вычисления СОТ и концентрации тромбоцитов здорового донора
3.3 Изменения оптических свойств тромбоцитов под действием
ИНДУКТОРОВ АКТИВАЦИИ
Сдвиговое напряжение
Изменение
Хранение в тромбоцитарных контейнерах.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ.
ВЫВОДЫ.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Изменение концентрации и размера тромбоцитов. Рассеяние и поглощение света малыми частицами. Метод лазерной дифракционной спектроскопии для определения распределения частиц по размерам. ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ. Прибор i7 i. Блок схема. Определение размеров и оптических свойств тромбоцитов. Индукторы активации тромбоцитов. Выделение тромбоцитов. Определение концентрации тромбоцитов на счетчике клеток. Схема проведения эксперимента. ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ. Определение размеров и оптических свойств тромбоцитов. Вычисление концентрации тромбоцитов. Хранение в тромбоцитарных контейнерах. ЗАКЛЮЧЕНИЕ. ВЫВОДЫ. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ. Биосовместимость медицинских изделий, предназначенных для кратковременного или длительного контакта с кровыо, во многом определяется реакцией тромбоцитов, играющих важную роль в поддержании гемостаза и сохранении агрегатного состояния крови . Несмотря на прогресс в изучении отдельных этапов и механизмов активации тромбоцитов различными внешними факторами, описание процессов, характеризующих реакцию клеток, носит часто качественный или полуколичественный характер. В значительной степени это связано с ограниченным количеством имеющихся методов исследования. Известно, что концентрация тромбоцитов в организме поддерживается постоянной, и ее существенное изменение клинически проявляется рядом тяжелых заболеваний . Более того, основными отрицательными эффектами при использовании систем искусственного и вспомогательного кровообращения являются тромбозы, тромбоэмболии, тромбоцитопения и т. Традиционно функциональное состояние тромбоцитов связывают с их способностью к адгезии, агрегации и высвобождению внутриклеточных биологически активных веществ , . К сожалению, количество адгезированных тромбоцитов и их морфология не могут дать объективной информации о влиянии поверхности на клетки. Так, например, на контактирующей с потоком крови поверхности изделия не всегда удастся найти адгезированные тромбоциты, но при этом активация клеток в объеме крови может инициировать образование тромбоэмбол. Однако такой метод является дорогостоящим, а полученные результаты не отличаются хорошей воспроизводимостью. Широко распространенным методом анализа функциональных свойств тромбоцитов является изучение их агрегационной активности. Метод основан на увеличении светопропускания суспензии тромбоцитов под действием индукторов агрегации физической или химической природы . Следует заметить, что измеряемый эффект может быть связан не столько с уменьшением количества рассеивающих объектов в результате агрегации клеток, сколько с изменением индивидуальных размеров тромбоцитов и их оптических свойств коэффициентов преломления и поглощения. В связи с этим, поиск новых экспериментально определяемых количественных параметров, характеризующих функциональное состояние тромбоцитов, является актуальной и практически важной задачей, имеющей большое фундаментальноприкладное значение. Для измерения оптических свойств и размеров тромбоцитов был выбран метод лазерной дифракционной спектроскопии. Несмотря на сложность метода, связанного с необходимостью математического решения обратной задачи рассеяния света и выбором начальных данных о параметрах распределения по размерам и оптических свойствах рассеивающих частиц, он достаточно часто применяется для определения размеров объектов не биологической природы суспензии, эмульсии, аэрозоли. Учитывая высокую чувствительность метода лазерной дифракционной спектроскопии к выбору оптических свойств объектов для определения их размеров, нами было высказано предположение о возможности использования данного метода для определения размеров и оптических свойств тромбоцитов как показателей, характеризующих их функциональное состояние. В связи с этим, цслыо настоящей работы является разработка на основе лазерной дифракционной спектроскопии метода измерения размеров и оптических свойств тромбоцитов человека. среды и контакта с чужеродной поверхностью на размер и коэффициент преломления тромбоцитов.