Исследование активных центров сериновых гидролаз методом спиновых меток

• Автор: Дорохов, Константин Евгеньевич
• Шифр специальности: 03.00.02
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1985
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 192 c. : ил

Введение спинового зонда в активный центр фосфорилхимотрипсина.

4.4. Концентрационная зависимость кающейся константы диссоциации комплекса ХТРi

4.5. Влияние органических растворителей

на комплекс I1X

4.6. КонФормапиоиное изменение при переходе

от нейтральных к кислым значениям .

4.7. Взаимодействие сгашово.ч метки

с трипсином

ГЛАВА 5. ВЯЛИМО,1Е .ЖКЕ С1ШНДЕЧЕННХ ИНГИБИТОРОВ

С АКТИВНЙ ШПТРО. ВуХЭ.

5.1. Спектр оПР соединения i

в присутствии БуХЭ.
5.2. Локализация радикала i в комплексе с БуХЭ.
5.3. Сопоставление данных ЭПР
и ферментативной кинетики
5.4. Влияние ионной сили к органического растворителя на связывание i с ВуХЭ.
5.5. Расположение иктроксила i в углублении белковой молекулы.
5.6. Влияние на взаимодействие 1 с БуХЭ
5.7. i с пени ,Ические центры, связывания.
5.8. Взаимодействие иктроксила I с БуХЭ.
5.9. Взаимодействие нитроксила ХУ с БуХЭ.
5 Влияние сшшмеченого новокаина
на активность ЬуХЭ.
5 Взаимодействие катионов парамагнитных металлов с БуХЭ.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


При изменении от до сек по мере постепенного усреднения анизотропных взаимодействий происходит изменение спектра от вида рис. Б к вида рис. А 9. В этом диапазоне возможно определение частоты вращения радикала. Определение скоростей вращения. ЛР. Фрида и Френкеля можно получить следующие приближенные соотношения для рассчета Тс. ЛИ0М. I, соответствующие ядерннм квантовым числам, обозначают низкополевую, среднюю и высокополевую компоненты, соответственно. В работах ,7,3,5 предлагаются различные параметры спектров, монотонно зависящие отв области медленных вращений. В работах 5,1 предложено использовать сдвигаШ В работе 3предлагается в интервале 2х96хЮ9 сек определять эффективное время корреляции по пюрглулам 4 и 5 и находить Тс по рассчетной номограмме. При этом вычисляют отношение . Тс С Дкя диффузионного вращения органических радикалов Кузнецов к др. Ь 1,5. В тех случаях, когда точное значение 2кп неизвестно, его можно определить, застекловав образец или путем экстраполяции к бесконечной вязкости. Т.ЗПараметры, характеризующие полярность окружения. Изменение полярности растворителя сказывается как на изотропных константах Ос к О , так и на главных значениях тензора СТВ и . Увеличение а0 в полярных растворителях связано с увеличением отрицательного заряда на атоме кислорода и ростом спиновой плотности ка атоме азота . Зависимость констант СТВ от полярности среды используется для оценки полярности окружения спиновых меток. Но пользоваться значением константы СТВ для характеристики полярности можно только в области быстрых вращения, или когда есть уверенность, что вращение предельно медленное к не ускоряется при изменении полярности среды. СТВ в воде, Эр в реперном гидрофобном растворителе, а экспериментальная величина а0. Взаимодействие между парамагнитными частицами. До сих пор подразумевалось, что взаимодействия между радикалами в рассматриваемо. При повышении локальной концентрации нитроксилов учет этих взаимодействии расширяет возможности метода спиновых меток. Выделяют дипольдипольное и обменное взаимодействия между неспаренныгди электронами. Обменное взаимодействие обусловлено перекрыванием орбиталей неспаренных электронов, является близкодействующим и изотропным и гложет быть заметным как в жидкой, так и в твердой фазе. Его интенсивность в растворах определяется частотой столкновения радикалов Т . Если д С , то модуляция обменного взаимодействия тепловым движением приводит к ушмрению линия спектра слабое обменное взаимодействие. При больших концентрациях радикалов обменное взаимодействие усредняет сверхтонкое, к линии спектра сливаются в одну. С увеличением концентрации радикалов эта линия продолжает сужаться . В бирадикалах и полирадикалах обменное взаимодействие проявляется в спектрах оПР более сложным образом. Анализ спектров бирадикалов приведен в работах ,5. Из величины максимального дапольдипольного расщепления можно найти расстояние между взаимодействующими алектронами ,,. При малых или когда взашлделствуют несколько спиновых меток, дипольдипольное взаимодействие проявляется в уширении линии спектров ЭПР. Парамагнитные атомы РеСцЯп входят в состав некоторых ферментов, или образуют комплексы с кофергдентами и субстратами. Взаимодействие спиновых меток с этими парамагнитными центрами позволяет получать информацию о пространственной структуре и динамических свойствах биомолекул. Теория взаимодействия нытроксилов с парамагнитными ионами подробно изложена в работе , а конкретные результаты, полученные при изучении белков в сборнике Берлинера и монографии Г. К.Лихтенштейна . С концентрация нитрокскла, ДМ уширенке, гс, К в ЬГсек Наличие нескольких центров связывания метки, различающихся по доступности, будет проявляться в виде изломов ка графике й1с С . Кратким выражением такой ситуации является наличие 2х вариантов локализации метки связанной с белком и недоступной действию уширителя, и находящейся в растворе и эффективно взаимодействующей с уширяющими пошли.