Взаимодействие нитрита с антиокислительными ферментами и гемоглобином как важнейший элемент его токсичности

• Автор: Марголина, Анна Александровна
• Шифр специальности: 03.00.02
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2000
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 117 с. : ил.

Содержание.
Содержание.
Содержание
Введение.

Глава I. Обзор литературы

1.1. Основные источники солей азотной и азотистой кислоты в организме человека.

1.1.1 Экзогенные нитраты как источник нитрита в организме.

1.1.2 Экзогенное поступление нитритов в организм человека.

1.1.3 Окись азота как основной эндогенный источник нитрита.

1.2. Токсические эффекты нитрита.

1.2.1 Общее представление о токсичности нитрита

I.2.2. Нитрит индуцированная метгемоглобинемия.
1.2.3.1. Исследование закономерностей развития нитрит индуцированной метгемоглобинемии в условиях i viv.
1.2.3.2. Исследование процесса нитрит индуцированного меггемоглобинобразования на модельных системах.
1.2.3.3. Существующие схемы развития нитрит индуцированной метгемоглобинемии.
1.3. Пероксидазное окисление нитрита.
1.3.1 Образование нитритрадикала при пероксидазном окислении нитрита.
1.3.2 Образование пероксинитрита, его физиологическое значение.
I.3.3 Роль антиокислительных ферментов в токсических эффектах
нитрита.
I.4. Методы определения нитратов и нитритов в биологических объектах.
тема Взаимодействие нитрита с антиокиспитепьными ферментами и гемоглобином как важнейший
автор Марголина Анна Александровна
тема Взаимодействие нитрита с антиокиспитепьными фермеь
элемент его токсичности.
Содержание.
Глава II. Материалы и методы
.1 Приготовление растворов и сред.
.2 Препаративные методы.
.2.1 Методика выделения эритроцитов.
.3 Аналитические методы.
.3.1 Перманганатометрический метод определения концентрации перекиси водорода.
.3.2 Определение содержания нитрита с помощью реактива НЕДА.
.3.3 Метод динамической калориметрии.
.3.3 Спектрофотометрические исследования.
.3.3.1. Спектрофотометрическая регистрация окисления гемоглобина.
.3.3.2. Динамическая фотометрия.
II.4. Статистическая обработка данных.
Глава III. Результаты
III. 1. Ингибирование каталазы в присутствии нитрита важнейший
механизм его токсичности.
1.2. Возможность использования каталазы для количественного определения нитритов в биообъектах.
1.3. Нитрит индуцированное окисление гемоглобина в эритроцитах и их гемолизатах. Механизм, пути защиты и профилактики.
Глава IV. Обсуждение
Выводы
Список литературы


При отсутствии данных галоидов и псевдогалоида ингибирования не происходит. Это показано как на изолированной каталазе из печени быка, так и на каталазе гемолизатов эритроцитов кролика, курицы, коровы и человека, а также на гомогенатах печени курицы. В то же время по отношению к исследованным нами пероксидазам хрена, лактопероксидазе, а также по отношению к пероксидазной активности метгемоглобина нитрит при тех же условиях не проявлял ингибирующего эффекта даже будучи взятым в концентрациях на несколько порядков больших, чем те, которые полностью ингибировали каталазу. Снижает устойчивость органов и тканей к токсическому действию перекиси водорода за счет ингибирования каталазы, поскольку этот фермент наиболее эффективно защищает клетки от перекиси Саундес Б. Титов В. Ю. и др . Блокируя каталазный путь разложения перекиси, увеличивает долю пероксидазного пути в ее метаболизме. Последнее было продемонстрировано на системе, содержащей каталазу и метгемоглобин. Так как нитрит способен окисляться в пероксидазной реакции с образованием высокотоксичного 2 . Vi . 2, усиливая тем самым собственную токсичность. Последнее было продемонстрировано на системе, содержащей гемолизат эритроцитов, нитрит и перекись. Таким образом, установлен еще один важнейший механизм токсичности нитрита. То обстоятельство, что зависимость степени ингибирования каталазы от концентрации нитрита была одинаковой для всех исследованных нами биологических объектов, дает возможность использовать данный фермент как детектор на нитриты, позволяющий, в отличие от официальных методик, производить определение в нейтральной среде, без закисления, и тем самым избегать неконтролируемых потерь исследуемого вещества, особенно при наличии аскорбата и других восстановителей i . ii . v . . Поэтому нами Благодаря ему была установлена стехиометрия нитрит индуцированного окисления гемоглобина. Нами установлено, что нитрит при добавлении к гемоглобину при наличии соединений, блокирующих его окисление в пероксидазной реакции бензидина, рнафтола и др. Наиболее эффективные пероксидазные субстраты способны полностью предотвращать окисление гемоглобина будучи взятыми в концентрациях на несколько порядков меньших, чем концентрации гемоглобина и нитрита. Последнее говорит о том, что вопреки установившемуся мнению Н. М. ii . Непосредственным окислителем гемоглобина, повидимому, является короткоживущий продукт пероксидазного окисления нитрита метгемоглобиноперекисными комплексами, восстанавливающийся при окислении до нитрита. Таким образом, количество окисленного гемоглобина может более чем на порядок превышать количество израсходованного нитрита. Последнее также было установлено при помощи предложенного нами биодетектора. На основании кинетических закономерностей окисления гемоглобина, а также сопряженного с ним расхода нитрита как в цельных эритроцитах так и в их гемолизатах и данных о воздействии на процесс ферментных каталаза, гемовые пероксидазы и неферментных антиоксидантов маннитол, этанол, аскорбат и ряда физиологически активных веществ серотонин, половые гормоны и др. Взаимодействие нитритов с антиокислительными ферментами и гемоглобином, как важнейший элемент их токсичности. Разработанный нами метод определения нитрита при помощи каталазы как биодетектора может быть использованным не только в научных исследованиях, но и в клинике. По чувствительности метод не уступает общепринятым методикам . i . v . Емченко С. В. и др. . В отличии от последнего он не требует предварительных процедур по снижению изначальной мутности или окрашенности объекта, так как не основан на фотометрической регистрации. Таким образом, все неконтролируемые потери исследуемого вещества сведены к минимуму. Предложенный в данной работе механизм развития индуцированной метгемоглобинемии позволяет определить характеристики, которыми должны обладать средства профилактики и купирования данного патологического процесса, подвести теоретическую базу под поиск таких средств.