Методика и применение автоматизированной микроскопии лейкоцитов с количественной оценкой цитохимических реакций

• Автор: Парпара, Анатолий Анатольевич
• Шифр специальности: 03.00.02
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2007
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 0 с. : 118 ил.

Оглавление
Введение

1 Автоматизированная видеоцитометрия лейкоцитов обзор литературы

1.1 История развития видеоцитометрии.

1.2 Место микроденситометрии в арсенале видеоцитометриче

ских методик и е задачи

1.3 Оборудование для микроденситометрии

1.4 Измерение количества поглощающего вещества по цифровому изображению.

1.5 Обработка и анализ данных микроденситометрии

1.6 Видеоцитометрия лейкоцитов.

2 Материалы и методы

2.1 Состав и характеристики аппаратуры.
2.2 Методика количественной оценки реакции на неспецифическую эстеразу
2.3 Методика микроспектрофотометрии
2.4 Алгоритмы и программное обеспечение
3 Результаты собственных исследований
3.1 Количественная оценка активности НЭ в лейкоцитах и е
ингибирования МаР при острых лейкозах.
3.2 Результаты микроспектрофотометрии при пяти наиболее
распространнных цитохимических окрасках
3.3 Проверка работы алгоритма фокусировки .
3.4 Проверка работы алгоритма выбора места на мазке
4 Обсуждение
Литература


Целью настоящей работы является разработка методики количественной оценки активности неспецифической эстеразы и е ингибирования фторидом натрия в лейкоцитах средствами автоматизированной видеоцитометрии, а также проверка применимости этой методики для исследования клеток костного мозга в норме и при острых лейкозах. Задачи. Разработать методику количественной оценки активности неспецифической эстеразы и е ингибирования фторидом натрия в лейкоцитах на мазке костного мозга средствами автоматизированной видеоцитометрии. Создать макет прибора для микроспектрофотометрии, с его помощью зарегистрировать спектры поглощения клеток и их частей и подобрать оптимальные спектральные диапазоны для количественной оценки активности неспецифической эстеразы, а также для ряда других цитохимический окрасок на миелопероксидазу, гликоген ШИКреакция. В, кислую фосфатазу. Подобрать набор признаков клеток, достаточный для оценки реакции на неспецифическую эстеразу, разработать алгоритмы их автоматического измерения. Разработать алгоритмы выбора места на мазке и автофокусировки для автоматизации сбора выборки клеток. Оценить практическую значимость разработанной методики для исследования костного мозга практически здоровых пациентов и больных острыми лейкозами. Научная новизна. Проведн анализ современного состояния видеоцитометрии, что позволило сформулировать и решить ряд задач, существенно важных для создания полноценной автоматизированной системы видеоцитометрии, в частности для количественной оценки цитохимических реакций. Впервые разработана методика количественной оценки активности неспецифической эстеразы и е ингибирования фторидом натрия найдены оптимальные условия для измерения оптической плотности, подобран набор признаков клеток характеризующий данную реакцию, предложена нормировка по интегральной оптической плотности эритроцитов, позволяющая учесть вариации окрашивания. Впервые разработай алгоритм автоматического выделения гранул фермента Найдены спектральные диапазоны для измерения поглощения при ряде других цитохимических окрасок. Впервые разработан алгоритм автоматической фокусировки для микроскопии, позволяющий получать сфокусированные изображения клеток с максимальной эффективностью и наджностью более . Впервые разработан алгоритм автоматического выбора траектории на мазке крови, позволяющий собирать выборку клеток в оптимальной зоне, в том числе при неправильной форме мазка. Разработан оригинальный алгоритм оценки качества места на мазке по толщине слоя эритроцитов. Теоретическое и практическое значение работы. Проведнные работы являются существенным вкладом в процесс создания системы автоматизированной видеоцитометрии. Разработанный метод заметно повышает информативность, объективность и точность оценки активности неспецифической эстеразы и е ингибирования фторидом натрия, что имеет существенное значение для проведения научных и клиникодиагностических исследований. Реализация результатов исследования. Внедрение полученных результатов в практику осуществляется следующими путями. Разработанные алгоритмы с г. МЕКОСЦ2. Данный комплекс эксплуатируется в более чем 0 медицинских и научноисследовательских учреждениях России. Результаты опубликованы в 9 печатных работах, докладывались на научных и научнопрактических конференциях. Разработанная методика количественной оценки активности неспецифической эстеразы и е ингибирования фторидом натрия применяется в Российской детской клинической больнице в качестве экспериментального метода при диагностике острых лейкозов. Апробация диссертации. Материалы работы докладывались на заседании кафедры биофизики РГМУ . Публикации. По материалам диссертации опубликовано 9 печатных работ. Объем и структура работы. Работа изложена на 8 страницах, иллюстрирована рисунками и 4 таблицами. Список литературы включает наименований, из которых работы представлены на русском языке, а на английском. Работа выполнена на кафедре высшей математики ГОУ ВПО РГМУ Росздрава заведующий профессор, доктор физикоматематических наук В. Н. Акимов и в цитологической клинической лаборатории ГУ РДКБ Росздрава заведующая кандидат медицинских наук Л. В. Байдун.