Влияние различных повреждающих факторов на раннее развитие эмбрионов млекопитающих

• Автор: Серобян, Гаянэ Азатовна
• Шифр специальности: 03.00.02, 03.00.11
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2002
• Место защиты: Пущино
• Количество страниц: 100 с. : ил

1.1. Устойчивость доимплантационных эмбрионов млекопитающих к механическим воздействиям
1.2. Устойчивость доимплантационных эмбрионов млекопитающих к условиям культивирования

1.2.1. Изменение физиологии эмбриона в процессе развития.

1.2.2. Энергетический метаболизм в раннем эмбриогенезе. Роль

1.2.3. Роль аминокислот в раннем эмбриогенезе.

1.2.4. Осмолиты

1.2.5. Буферы

1.2.6. Пластичность эмбриона

1.3 Устойчивость доимплантационных эмбрионов млекопитающих при

положительных околонулевых температурах

1.3.1. Процессы, развивающиеся в клетках млекопитающих при околонулевых температурах гипотермия
1.3.2. Влияние околонулевых температур гипотермия на ранние эмбрионы
1.3.3. Зависимость чувствительнеости к гиперемии от стадии доимплантационного развития
1.3.4. Видовые особенности чувствительности зародышей к холоду .
1.3.5. Пути совершенствования метода гипотермического хранения эмбрионов млекопитающих
1.3.6. Технологические принципы гипотермического хранения доимплантационных эмбрионов
1.3.7. Практическое применение метода гипотермического хранения доимплантационных эмбрионов млекопитающих
1.4 Устойчивость доимплантационных эмбрионов млекопитающих к разным
способам криоконсервации
1.4.1. Факторы криоповреждения клеток эмбрионов
1.4.2. Использование криопротекторов
1.4.3. Низкотемпературное охлаждение эмбрионов в присутствии криопротектора глицерина
1.4.4. Выведение криопротектора из клеток эмбриона
1.4.5. Условия оттаивания и возможные повреждения эмбрионов
1.4.6. Криоконсервация доимплантационных эмбрионов млекопитающих прямым погружением в жидкий азот сверхбыстрое замораживание и витрификация
1.4.7. Зависимость криорезистснтности эмбрионов от их генотипа
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1. Работа с эмбрионами мышей.
2.1.1. Получение доимплантационных эмбрионов мышей
2.1.2. Оценка качества эмбрионов мышей
2.1.3. Приготовление гистологических суховоздушных препаратов эмбрионов мышей.
2.1.4. Гипотермическое хранение и культивирование
i vi эмбрионов мышей.
2.1.5. Замораживание эмбрионов мышей на
программном замораживателе .
2.1.6. Свербыстрое замораживание эмбрионов мышей
2.1.7. Оттаивание замороженных эмбрионов мышей .
2.1.8. Трансплантация эмбрионов мышей
2.2 Работа с эмбрионами крыс
2.2.1. Получение доимплантационных эмбрионов крыс
2.2.2. Оценка качества эмбрионов крыс .
2.2.3. Гипотермическое хранение и культивирование i vi эмбрионов крыс
2.2.4. Трансплантация эмбрионов крыс.
2.3. Работа с эмбрионами к.р.с
2.3.1. Нехирургическое извлечение и трансплантация эмбрионов к.р.с.
2.3.2. Определение стадии развития и оценка качества эмбрионов к.р.с.
2.3.3. Разделение эмбрионов к.р.с.
2.3.4. Хранение эмбрионов к.р.с. при положительных
около нулевых температурах
2.3.5. Культивирование i vi эмбрионов к.р.с.
2.3.6. Транспортировка эмбрионов к.р.с. при околонулевых температурах
2.3.7. Замораживание эмбрионов КРС на
программном замораживателе
2.4 Статистическая обработка
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ.
3.1 Развитие доимплантационных эмбрионов мышей и крыс
3.1.1.Уточнение ранних стадий развития эмбрионов крыс
3.1.2. Сравнительный анализ количества клеток на стадиях
морулы и бластоцисты у разных линий мышей
3.2. Изучение способности к развитию доимплантационных эмбрионов коров после механического разделения
3.3. Влияние различных культуральных сред на доимплантационных эмбрионов млекопитающих.
разных стадий развития
3.3.1. Влияние различных сред на развитие 8клеточных эмбрионов мышей и крыс
3.3.2. Влияние разных сред на развитие эмбрионов
мышей и крыс i vi со стадии мору л ы
3.3.3. Культивирование бластоцист мышей и крыс в различных культуральных средах.
3.4.Влияние гипотермии на эмбрионы 3х видов млекопитающих
3 4 1.Влияние скорости снижения температуры до 4С и последующего гипотсрмичсско о хранения на развитие компактных морул мышей и крыс .
3 .4.2. Гипотермическое хранение эмбрионов мышей
в различных культуральных средах.
3.4.3. Хранение при положительных околонулевых температурах эмбрионов мышей разных стадий доимплантационного развития
3.4.4. Хранение 8клеточных эмбрионов мышей различных линий при положительных околонулевых температурах
3 4.5. Развитие компактных морул крыс 2х линий и после охлаждения со скоростью 0,1Смин и последующего хранения
3 4.6. Сравнительное изучение устойчивости к гипотермии
эмбрионов 3х видов млекопитающих.
3.4.7. Влияние транспортировки на дальние расстояния в условиях гипотермии на приживляемость эмбрионов КРС после трансплантации.
3.5. Влияние двух способов криоконсервации на жизнеспособность эмбрионов различных стадий развития, полученных от мышей и КРС разных
линий и пород.
3 5 1. Развитие 8клеточных эмбрионов мышей после
криоконсервации на программном замораживателе.
3.5.2. Развитие i vi 8клсточных эмбрионов мышей разных линий после сверхбыстрого замораживания.
3.5.3. Развитие эмбрионов мышей i viv до последних сроков беременности после сверхбыстрого замораживания
3.5.4. Развитие i vi компактных морул и бластоцист мышей после сверхбыстрого замораживания.
3.5.5. Развитие i viv эмбрионов коров породы после замораживания программном замораживателе.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Приготовление гистологических суховоздушных препаратов эмбрионов мышей. Оттаивание замороженных эмбрионов мышей . Оценка качества эмбрионов крыс . Гипотермическое хранение и культивирование i vi эмбрионов крыс
2. Трансплантация эмбрионов крыс. Работа с эмбрионами к. Нехирургическое извлечение и трансплантация эмбрионов к. Определение стадии развития и оценка качества эмбрионов к. Разделение эмбрионов к. Хранение эмбрионов к. Культивирование i vi эмбрионов к. Транспортировка эмбрионов к. ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ. Влияние различных культуральных сред на доимплантационных эмбрионов млекопитающих. Культивирование бластоцист мышей и крыс в различных культуральных средах. Влияние скорости снижения температуры до 4С и последующего гипотсрмичсско о хранения на развитие компактных морул мышей и крыс . Влияние транспортировки на дальние расстояния в условиях гипотермии на приживляемость эмбрионов КРС после трансплантации. Развитие i vi 8клсточных эмбрионов мышей разных линий после сверхбыстрого замораживания. Развитие i vi компактных морул и бластоцист мышей после сверхбыстрого замораживания. Развитие i viv эмбрионов коров породы после замораживания программном замораживателе. Настоящее исследование посвящается комплексному анализу устойчивости эмбрионов к различным стрессовым воздействиям механическим, химическим, термическим, для выявления потенциальных возможностей эмбрионального развития млекопитающих, важных для решения как фундаментальных, так и прикладных задач биологии развития. Эти исследования проводились в сравнительном плане на эмбрионах трех видов млекопитающих мышей, крыс, крупного рогатого скота КРС. На современном уровне биологии развития в практику экспериментальных исследований для решения тех или иных задач включены методы и приемы воздействия на эмбрионы млекопитающих, в результате которых зародыши переживают состояние на границе жизни и смерти Это механические воздействия связанные, как правило, с микрохирургией, биопсией или удалением отдельных участков эмбриона, разрезанием зародышей и т. Важным биотехнологическим приемом, приводящим к экстремальным механическим повреждениям, является разделение эмбрионов на две половинки в работах по получению монозиготных близнецов. В настоящей работе исследовались потенциальные возможности таких половинок на эмбрионах крупного рогатого скота КРС. Эго химические воздействия применение культуральных сред с разным химическим составом, влияние различных ингредиентов этих сред на развитие эмбриона на разных стадиях, а также различные токсические воздействия при использовании криопротекторов. В качестве оценки экстремального химического фактора в настоящей работе проводили сравнительное исследование влияния разных сред и разных криопротекторов на эмбрионах грех видов упомянутых животных. Это термические воздействия, связанные с влиянием разных скоростей охлаждения, а также с разными конечными температурами. Таких, например, как гипотермия, т. С, с последующим разогревом. В настоящее время имеется значительное количество работ по анализу влияния глубокого охлаждения с последующим отогревом на развитие эмбрионов млекопитающих. В связи со сказанным, в настоящей работе проводился анализ эффективности различных приемов указанных воздействий на развитие эмбрионов млекопитающих в строго одинаковых экспериментальных условиях. Кроме того, в данной работе на грех отмеченных выше видах млекопитающих проводилось сравнительное исследование чувствительности предимплангационных эмбрионов к снижению температуры до околонулевых величин. В связи со сказанным основная цель настоящей диссертационной работы заключалась в сравнительном исследовании устойчивости лредимплатационных эмбрионов трех видов млекопитающих мышь, крыса, к к отмеченным выше экстремальным факторам механическим, химическим, термическим. Видовые отличия могут оказаться существенными в способности исследуемых видов млекопитающих адаптироваться к тем или иным экстремальным воздействиям на разных стадиях раннего эмбрионального развития.