Структурные особенности эритроцитарной мембраны новорожденных в норме и при гемолитической анемии невыясненной этилогии

• Автор: Матвеев, Александр Валерьевич
• Шифр специальности: 03.00.02
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2002
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 95 с.

Содержание
главах .

1.1. Сравнительная характеристика эритроцитарных мембран новорожденных

1.1.1. Структурная организация эритроцитарной мембраны

1.1.2. Перекисное окисление липидов в эритроцитах новорожденных

1.1.3. Антигены поверхности мембраны

1.1.4. Эндоцитоз.

1.1.5. Рецепторы на поверхности мембраны.

1.1.6. Ферменты, связанные с мембраной.

I I.7. Ионный транспорт через мембрану.

I.I.8. Механические свойства эритроцитарной мембраны.

1 Морфология эритроцитарной мембраны новорожденных.
I.III. Термотропные свойства эритроцитарной мембраны.
ГЛАВА П. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
II.1. Реактивы.
.2. Получение мембран теней эритроцитов
.3. Модификация эритроцитов I.
.4. Экстракция тритоном Х0
.5. Экстракция спектрина.
.6. Щелочная экстракция
.7. Обработка эритроцитов проназой.
.8. Обработка фосфолипазами А2 и С.
.9. Электрофоретическое исследование.
. Микрокалориметрическое исследование
Электронномикроскопическое исследование
Статистическая обработка данных.
ГЛ А1ДЛГЗУ ЛЪТАТЬ1ХОВСУЖДЕШ1
.1 Сравнительное исследование структуры мембран эритроцитов новорожденных
1.1.1 Элекрофоретическое исследование
III. 1.2. Исследование термотропных свойств
III. 1.3 Электронномикроскопическое исследование.
1.2. Исследование структурной организации эритроцитарных меммбран у новорожденных, страдающих гемолитическими анемиями невыясненной этиологии
1.2.1. Электрофоретическое исследование
1.2.2. Исследование термотропных свойств.
1.2.3. Электронномикроскопическое исследование.
Сводная таблица данных исследования мембран эритроцитов новорожденных с ГАНЭ
методами микрокалориметрии, электронной микроскопиии и электрофореза.
ГЛАВА IV. ЗАКЛЮЧЕНИЕ.
ВЫВОДЫ.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Актуальность таких исследований обусловлена также широким использованием пуповинной крови для проведения аутотрансфузий и создания банков пуповиной крови для аутотрансфузий, например в Италии i , и в США , . ВЬаМасЬагуа е1 а, , и других заболеваниях. Таким образом, исследование эритроцитарной мембраны новорожденных закладывает теоретическую базу технологии обработки, хранения и использования пуповинной крови. Проведение исследования структурной организации эритроцитарной мембраны новорожденного было инициировано вспышкой гемолитической анемии невыясненной этиологии ГАНЭ в некоторых регионах Алтайского края в начале х годов, которая, как полагают, явилась следствием испытаний ядерного оружия на Семипалатинском полигоне. Было проведено медикобиологическое обследование состояния матерей и новорожденных в рамках государственной программы Полигон. Наиболее распространенными патологиями новорожденых были заболевания нервной системы и анемии Фадеева Н И. Белоусов В. А., и др. Исследование морфологии эритроцита выявило макроцитоз, повышенное содержание эхиноцитов и стоматоцитов Баркаган З. С. и др. В связи с этим одной из приоритетных задач данной работы была оценка состояния новорожденых с ГАНЭ и определение маркеров, харктеризующих данную патологию. Объектом для изучения выбрана эритроцитарная мембрана новорожденного а источником пуповинная кровь, так как е состав полностью отражает состояние гемопоэза плода на момент рождения ребенка Торубова и др. Целью работы являлось сравнительное исследование свойств мембранного скелета теней эритроцитов пуповинной крови здоровых новорожденных и новорожденных с ГАНЭ, а также взрослых. Провести сравнительное исследование термотропных свойств и морфологии поверхности сколов эритроцитарных мембран новорожденых и взрослых. Изучить структуру белка полосы 3 в мембране новорожденных с помощью модификации РЮБ, щелочной экстракции, протеолиза. Исследовать взаимодействие спектринактинового домена с мембраной эритроцитов новорожденных с помощью экстракции спектринактинового комплекса. Исследовать влияние липидной фазы на термотропные свойства и ультраструктуру мембран эритроцитов новорожденных с помощью гидролиза фосфолипидов. Исследовать термотропные свойства и морфологию поверхности сколов мембран эритроцитов новорожденных с ГАНЭ. Для выполнения этих задач использованы три основных метода дифференциальная адиабатная сканирующая калориметрия ДСК, электронная микроскопия замораживанияскалывания и гельэлектрофорез. ДСК позволяет одномоментно исследовать весь комплекс основных компонентов эритроцитарной мембраны спектрина, анкирина, актина, белка полосы 3 и белков 4. Этот метод наиболее информативен в исследовании кооперативных структурных перестроек. Он обладает рядом преимуществ, поскольку позволяет изучать нативные мембраны в естественных физикохимических условиях их функционирования. Метод электронной микроскопии позволяет оценить состояние интегральных белков мембраны, среди которых основной вклад вносит белок полосы 3, и проанализировать состояние спектринактинового комплекса мембраны. Следует отметить, что использование микрокалориметрического исследования эритроцитарной мембраны при гипертонической болезни, наследственом гемохроматозе, овалоцитозе позволило определить наличие дефекта мембраны Акоев и др. , , . В нашем случае встала задача дать сравнительную характеристику термотропных свойств мембран новорожденного в норме для того, чтобы иметь возможность проводить исследование неонатальных эритроцитов при различных заболеваниях. Полученные в работе результаты демонстрируют различия в структурной организации мембранного скелета эритроцитов новорожденных и взрослых. Впервые показано что, различия в структурной организации спектринактинового комплекса эритроцитарной мембраны новорожденных обусловлены изменением термодинамических параметров перехода и увеличением доли ВМЧ больших размеров и не связаны с изменением количества спектрина, актина, анкирина, белков 4.