Системная оценка состояния клеток врожденного иммунитета в организме с развивающейся опухолью

• Автор: Авхачева, Надежда Владимировна
• Шифр специальности: 03.00.02
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2008
• Место защиты: Пущино
• Количество страниц: 143 с. : ил.

1.1. Иммунитет и иммунная система

. 1.1. Общая характеристика иммунитета и иммунной системы

1.1.2. Неспецифическое звено иммунитета

1.1.3. Полиморфноядерные гранулоциты и мононуклеарные фагоциты

1.1.4. Участия макрофагов и нейтрофилов в воспалительной реакции 1

1.2. Фагоцитоз первая линия защиты организма

1.2.1. Кислороднезависимый фагоцитоз

1.2.2. Кислородзависимый фагоцитоз

1.2.2.1. НАОРН оксидаза фагоцитов

1.2.2.2. Активация ИАОРН оксидазы

1.3. Активные формы кислорода

1.3.1. Общая характеристика активных форм кислорода
1.3.2. Система генерации и элиминации активных форм кислорода
1.3.3. Окислительный стресс и его последствия
1.3.4. Молекулярные мишени активных форм кислорода 3
1.4. Редоксрегуляция выживания или гибели клетки
1.4.1. Активация внутриклеточных процессов, способствующих выживанию клетки
1.4.2. Активация внутриклеточных процессов, приводящих к гибели кстки
1.5. Роль клеток врожденного иммунитета при патологиях
1.6 Взаимосвязь между воспалением и развитием опухоли
Глава 2. Материалы и методы
2.1. Материалы
2.2. Методы
2.2.1. Биологический объект
2.2.1.1. Забор крови
2.2.1.2. Изолирование резидентных клеток из перитонеальной
полости
2.2.1.3. Изолирование клеток из очага острого воспаления
2.2.2. Создание экспериментальных моделей
2.2.2.1. Формирование солидной опухоли
2.2.3. Проточноцитофлуориметрический анализ
2.2.4. Регистрация хемилюминесцеиции
2.2.4.1. Описание хемилюминиметра и программного обеспечения
2.2.4.2. Измерение хемилюминесцеиции образцов с цельной кровью
2.2.4.3. Измерение хемилюминесцеиции образцов с изолированными
клетками
2.2.5. Микроскопия клеток
2.2.6. Определение состояния клеточного цикла с помощью метода проточной цитометрии
2.2.6.1. Определение уровня апоптоза с помощью Аxi VI
2.2.6.2. Определение фрагментации ДНК с помощью красителя
2.2.7. Кометатест
2.2.7.1. Приготовление проб из образцов цельной крови для комета
2.2.7.2. Приготовление проб из образцов изолированных клеток для
кометатеста
2.2.7.3. Условия проведеншг кометатеста
2.2.8. Электрофорез и иммуноблоттинг
2.2.8.1. Приготовление лизатов целых клеток устойчивых к протеазам
2.2.8.2. Приготовление экстрактов цитоплазматических белков
2.2.8.3. Приготовление экстрактов ядерных белков
2.2.8.4. Условия проведения электрофореза и иммунобпоттинга
2.2.8.4.1. Стриппинг мембраны и вторичная покраска антителами
2.2.9. Оценка изменения спектра белков в цитоплазматической и ядерной фракциях с помощью метода ПР1.С
2.2 Статистическая обработка результатов
Глава 3. Результаты
3.1. Создание экспериментальной модели
3.2 Оценка состояния лейкоцитов периферической крови
3.2.1. Продукция А ФК
3.2.2. Повреэсдение ДНК в лейкоцитах крови
3.3 Оценка состояния клеток изолированных из перитонеальной полости
3.3.1. Фенотипический состав резидентных клеток
3.3.2. Фенотипический состав клеток из очага острого воспаления
3.4. Функциональные изменения клеток перитонеальной полости
3.4.1. Продукция А ФК резидентными клетками
3.4.2. Продукция АФК воспалительными клетками 3.5.Оценка состояния клеточного цикла и развития апоптотических процессов
3.6. Активация р МАРК
3.7. Оценка повреждений ДНК и состояния репарационной системы ДНК
3.8. Оценка количества и спектра белков клеток, изолированных из очага острого воспаления
Глава 4. Обсуждение результатов
Выводы
Список литературы


Результаты работы свидетельствуют о системной трансформации периферических иммунных клеток во время роста опухоли. Научнопрактическая ценность. Исследование молекулярных механизмов, лежащих в основе модификации функциональной активности клеток иммунной системы, относится к фундаментальным проблемам биологии клетки и иммунологии. Полученные в ходе данного исследования результаты помогают понять механизмы модификации клеток врожденного иммунитета и найти новые терапевтические подходы к лечению онкологических заболеваний. Апробация работы. Материалы диссертации были представлены на российских и международных конференциях и школах Всероссийский научный форум с международным участием Дни иммунологии и СанктПетербурге СанктПетербург, , Путинская конференция молодых ученых Пущино, XV зимняя международная молодежная научная школа Перспективные направления физикохимической биологии и биотехнологии Москва, i i i i Бельгия, отчетная годичная научная конференция ИБК РАН Пущино, ii i i ii i xiiv Венгрия, III Съезд биофизиков России Воронеж, ii i, , i , , , Международный Конгресс Нейронаука для медицины и психологии Судак, Украина, v i i i i Греция, i i ii Ii , . Публикации. По материалам диссертации опубликовано печатных работ, из них 5 статей и 1 статья в печати. Глава 1. Иммунный ответ состоит из сложного ряда клеточных взаимодействий, активируемых попаданием в организм чужеродною антигенного материала. После обработки макрофагами, антиген представляется лимфоцитам, которые являются главными клетками исполнительного звена иммунной системы. Активация лимфоцита антигеном приводит к пролиферации и трансформации лимфоцитов Кольман и Рем, . Существует два главных типа иммунного ответа клеточный иммунитет это функция Тлимфоцнтов при клеточном иммунитете происходит образование эффскторных клеток Ткиллсров, способных уничтожать клетки, имеющие антигенную структуру путем прямой циготоксичности и путем синтеза определенных веществ, названных лимфокинамп, которые участвуют в процессах взаимодействия клеток макрофагов, Тклеток, Вклсток при иммунном ответе. Кроме того, два подтипа Тклеток участвуют в регуляции иммунного ответа Тхелиеры усиливают иммунный ответ Тсупрессоры оказывают противоположное влияние. Гуморальный иммунитет это функция Вклсток и характеризуется преобразованием Вклсток в плазматические клетки, секретирующие иммуноглобулины антитела, которые имеют специфическую активность против внедрившегося антигена. Эти особенности отличают иммунный ответ от других нсспецифических ответов острою воспаления и неиммунного фагоцитоза Грин и др. Кои, . Неспецифическое звено иммунитета Неспецифический врожденный иммунный ответ включает в себя защитные механизмы 4х типов это анатомический барьер, физиологический барьер, фагоцитоз и воспалительная реакция Табл. Таблица 1. Характеристика основных типов неспсцифичсского иммунитета СосяЬу е а. Макрофаги и нейтрофилы являются основными исполнителями неспецифических иммунных реакций. Функции макрофагов и нейтрофилов включают в себя фагоцитоз, распознавание антигенов, продукцию и взаимодействие с цитокинами. Фагоцитоз может быть неиммунным макрофаги и нейтрофилы фагоцитируют чужеродные частицы, микроорганизмы и остатки поврежденных клеток непосредственно, без вызова иммунного ответа и иммунным нейтрофилы и макрофаги имеют поверхностные рецепторы для СЗЬ и фрагмента иммуноглобулинов. Характерным признаком нейтрофилов является сегментированное ядро и наличие нейтральных гранул в цитоплазме i . По сравнению с моноцитами и макрофагами, которые функционируют месяцы или даже годы, нейтрофилы короткоживущие суток клетки. Нарушение функционирования нейтрофилов приводят к различным формам иейтропеиии iv , , дефициту адгезии нейтрофилов ii . Гиперактивность нейтрофилов также сопровождает определенные заболевания. Одной из основных функций нейтрофилов является продукция активных форм кислорода АФК специализированным многокомпонентным ферментом оксидазой. Массированный выброс АФК, сопровождаемый усиленным потреблением кислорода и повышенной утилизацией глюкозы, называют респираторным взрывом , .