Исследование влияния УФ-света и иммуномодуляторов на антиоксидантный статус и состояние мембран лейкоцитов

• Автор: Савостина, Ирина Евгеньевна
• Шифр специальности: 03.00.02
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2005
• Место защиты: Воронеж
• Количество страниц: 202 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

ГЛАВА 1. Действие УФсвета на структуру и функции белков и липидов

1.1. Механизмы пероксидного окисления липидов в биологических мембранах. Фотомодификации липидного компонента биомембран

1.2. Влияние УФизлучения на белки антиоксидантной системы крови

ГЛАВА 2. Бронхиальная астма механизмы формирования, пути коррекции патологического состояния

2.1. Формирование и развитие бронхиальной астмы

2.2. Механизм действия глюкокортикостероидных гормонов

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

ГЛАВА 3. Объекты и методы исследования

3.1. Объекты исследования
3.2. Методы исследования
3.2.1. Получение лейкоцитарной массы
3.2.2. Выделение лимфоцитов из крови человека
3.2.3. Получение нейтрофилов
3.2.4. Определение интенсивности люминолзависимой хемилюминес ценции иммуноцитов
3.2.5. Получение супернатанта лимфоцитов
3.2.6. Определение супероксиддисмутазной активности лимфоцитов методом люминолзависимой хемилюминесценции
3.2.7. Определение активности миелопероксидазы нейтрофилов
3.2.8. Облучение клеток крови
3.2.9. Методика проведения АУФОК
3.2 Методика проведения экстракорпоральной ультрафиолетовой и фармакологической модификации лимфоцитов крови
3.2 Регистрация спектров флуоресценции зонда 1анилинонафталин8сульфоната АНС
3.2 Получение лимфоцитарных лизатов для определения концентрации цитокинов
3.2 Определение концентрации ИЛi и ИЛ2 в лизатах лимфоцитов методом иммуноферментного анализа
3.2 Исследование синтеза супероксиддисмутазы v в лимфоцитах крови человека
3.2 Определение жизнеспособности лимфоцитов с помощью трипанового голубого
3.2 Статистическая обработка результатов экспериментов
РЕЗУЛЬТАТЫ ЭКСПЕРИМЕНТОВ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
ГЛАВА 4. Исследование воздействия УФсвета и дибазола на лимфоцитарные клетки
4.1. Влияние УФсвета и дибазола на лимфоциты крови доноров
4.2.Исследование взаимодействия дибазола с лимфоцитами крови доноров методом флуоресцентных зондов
4.3. Динамика показателей СОДактивности и интенсивности процессов ПОЛ лимфоцитов больных с гнойными патологиями в ходе проведения УФМЛ с дибазолом
ГЛАВА 5. Сочетанное воздействие УФсвета и циклоферона на лейкоцитарные клетки
5.1. Влияние УФоблучения и циклоферона на показатели СОДактивности и интенсивность ПОЛ лимфоцитов донорской крови
5.2. Исследование продукции интерлейкина i и интерлейкина 2 фотомодифицированными лимфоцитами
5.3. Действие УФсвета и циклоферона на нейтрофильные лейкоциты
5.4. Изучение опосредованного действия УФсвета и циклоферона на функциональную активность нейтрофилов крови доноров
5.5. Влияние УФМЛ с циклофсроном на показатели СОДактивности и интенсивности ПОЛ лимфоцитов больных с гнойными патологиями и бронхиальной астмой
ГЛАВА 6. Исследование действия УФсвета и глюкокортикостероидных гормонов на лимфоцитарные клетки
6.1. Исследование взаимодействия дексаметазона с лимфоцитами крови доноров с помощью флуоресцентных зондов
6.2. Влияние фотомодифицированных и инкубированных с дсксаметазоном лимфоцитов на функциональную активность нейтрофилов доноров
6.3. Влияние УФоблучения и дексаметазона на продукцию некоторых цитокинов лимфоцитами доноров
6.4. Динамика СОДактивности и интенсивности процессов ПОЛ лимфоцитов больных бронхиальной астмой в ходе проведения УФМЛ с глюкокортикостероидными гормонами
6.5. Продукция некоторых цитокинов лимфоцитами больных бронхиальной астмой на отдельных этапах проведения УФМЛ с глюкокортикостероидными гормонами
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
ПЕРЕЧЕНЬ СОКРАЩЕНИЙ И УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ
1фл интенсивность флюоресценции
1хл интенсивность хемилюминесценции
АМК активированные метаболиты кислорода
АОС антиоксидантная система
АУФОК аутотрансфузия УФоблученной крови
АФК активные формы кислорода
БА бронхиальная астма
ГКС глюкокортикостероиды
ИЛ интерлейкин
МПО мислопероксидаза
ПМЯЛ полиморфноядерные лейкоциты
ПОЛ пероксидное окисление липидов
ПФОЛ пероксидное фотоокисление липидов
СОД супероксиддисмутаза
СРО свободнорадикальное окисление
Тх Т клетки хелперы
УФМЛ ультрафиолетовая фармакологическая модификация лимфо цитов
УФсвет ультрафиолетовый свет ХЛ хемилюминесценция
ВВЕДЕНИЕ
Актуальность


Противоречивые данные имеются относительно изменения микровязкости липидного бислоя под действием ПОЛ одними авторами показано увеличение вязкости мембран в результате уменьшения содержания жидких липидов в бислойных участках, появления поперечных межмолекулярных сшивок и возрастания доли упорядоченных липидов с ограниченной подвижностью Д. О. Левицкий, Ю. А. Владимиров с соавт. Н.М. Эмануэль, Р. И. Жданов, . Повидимому, влияние ПОЛ на текучесть мембраны различно в гидрофобной и гидрофильной области мембраны, а также зависит от степени развития ПОЛ Н. М. Эмануэль, Р. И. Жданов, . ПОЛ всегда в норме протекает в организме. Генерирование липопероксидов в организме сопряжено с нормальными метаболическими реакциями, осуществляемыми специализированными ферментными системами зависимыми микросомальными оксигеназами, циклооксигеназами и липооксигеназами, и служит источником биосинтеза внутриклеточных медиаторов простагландинов, тромбоксанов, простациклина, лейкотриенов и липоксинов. X2, X2 и простациклин I2. Продуктами липооксигсназиого окисления ненасыщенных жирных кислот являются алифатические гидропероксиды гидропероксиэйкозатетраеновые кислоты промежуточные продукты биосинтеза лейкотриенов 4, 4 и другие. Между липооксигеназным и циклооксигеназным путями окисления полиненасыщенных жирных кислот существует тесная взаимосвязь ингибирование циклооксигеназного пути окисления клеток i viv сопровождается активацией их липооксигеназного окисления , . В нормально функционирующей клетке уровень утилизации липопероксидов значительно превышает уровень активности систем, генерирующих липопереокисление Болдырев, . В регуляции процесса ПОЛ в организме принимают участие 2 группы факторов про и антиоксиданты. Прооксиданты усиливают свободнорадикальные процессы ПОЛ, а антиоксиданты, наоборот, ингибируют эти реакции или разрушают образующиеся пероксиды. Ниже приведены сведения об агентах, регулирующих уровень ПОЛ. Легко самоокисляющиеся соединения, образующие свободные радикалы, витамины , , нафтохиноны. Восстановители , липоевая кислота, низкие концентрации аскорбиновой кислоты. Индуцированные прооксиданты свободнорадикальные продукты, различные по своему происхождению и химической природе И. В. Кондакова с соавт. Э.К. Рууге, . Живая клетка обладает многоступенчатой системой защиты от оксидантного стресса. Первая линия этой защиты ферменты супероксиддисмутаза i . В. iv, . Н.К. Зенков с соавт. Вторая линия защиты жирорастворимые антиоксиданты, прерывающие цепь свободнорадикальных реакций атокоферол С. Э.К. Рууге, , убихинон . А I. Д. Ещенко с соавт. V v, . В. iv, . Эти вещества способны обрывать цепи окисления или замедлять цепной процесс. В основе действия таких антиоксидантов лежит реакция ингибитора I со свободными радикалами, инициирующими цепи окисления i I . I I I2. Способность I к одноэлектронному окислению зависит от потенциала ионизации антиоксиданта и косвенно связана с его редокспотенциалом. Чем ниже окислительновосстановительный потенциал ингибитора, тем он эффективнее выше константа к, т. Л2, ацилкофермент Лсинтетаза, кофермент Ллизофосфолипидацилтрансфераза и лизофосфолипаза i, . Функционирование этого ферментного комплекса активируется образованием окисленных липидов. Развитие пероксидного окисления вызывает существенные изменения структуры липидного бислоя, что значительно облегчает проникновение фермента в липидную фазу и связывание с субстратом В. Г. Гогвадзе с соавт. Кроме того, активация ферментов деацилирования происходит при повышении концентрации Са2 за счет увеличения неспецифической проницаемости мембраны при окислении ее компонентов Л. Обратный процесс реацилирования фосфолипидов, подвергшихся гидролизу, стимулируется при низком уровне окисления и существенно ингибируется при высоком содержании окисленных соединений А. Механизм действия продуктов ПОЛ на организм до конца не выяснен. Однако известно, что, окисляя группы, пероксиды липидов могут легко инактивировать тиоловые ферменты, участвующие в дыхании и гликолизе. Инкубация различных белков цитохрома С, гемоглобина, катапазы и др. Н.Д. Ещенко с соавт. ПОЛ органические пероксиды, альдегиды, кетоны, эпоксиды, некоторые из них высокотоксичны для клеток.