Изучение структурных свойств эритроцитов крови новорожденных при оксидативном стрессе, вызванном гипоксией

• Автор: Попова, Ирина Евгеньевна
• Шифр специальности: 03.00.02
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2007
• Место защиты: Воронеж
• Количество страниц: 250 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ
ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Особенности развития патологического процесса у новорожденных, перенесших гипоксию

1.2. Особенности развития оксидативного стресса у новорожденных

1.3. Общая морфология, строение и функции эритроцита

1.4. Особенности молекулярной структуры мембраны эритроцита

1.4.1. Цитоскелет эритроцита

1.4.2. Липидный состав мембраны эритроцита

1.4.3. Проницаемость эритроцитов для молекул

1.5. Влияние активных форм кислорода на эритроциты в условиях развития гипоксии

1.6. Физикохимические и антиоксидантные свойства глюкозо6фосфатдегидрогеназы
1.7. Окислительная модификация белков плазмы
1.8. Антибиотикотерапия в период новорожденности
1.9. Токсическое повреждение печени четыреххлористым углеродом как модель активации свободнорадикальных реакций
ГЛАВА 2. ОБЪЕКТ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Объекты исследования
2.2. Получение суспензий эритроцитов
2.3. Физикохимические свойства модификаторов карбонильной природы
2.3.1. Физикохимические свойства ацетона
2.3.2. Физикохимические свойства формалина .
2.3.3. Физикохимические свойства глутарового диальдегида
2.4. Структура и фармакологическая характеристика исследуемых антибиотиков
2.4.1. Фортум
2.4.2. Амикацин
2.4.3. Ципрофлоксацин
2.4.4. Ванкомицин
2.5. Автоматический метод регистрации осмотических и кислотных эритро грамм
2.6. Метод определения уровня окислительной модификации белков плазмы крови
2.7. Спектрофотометрический метод определения активности глюкозо6фосфатдегидрогеназы эритроцитов
2.8. Подсчет количества эритроцитов крови
2.9. Моделирование интоксикации крыс четыреххлористым углеродом
2 Статистическая обработка экспериментальных данных
ГЛАВА 3. ОСМОТИЧЕСКАЯ РЕЗИСТЕНТНОСТЬ ЭРИТРОЦИТОВ КРОВИ НОВОРОЖДЕННЫХ В ДИНАМИКЕ ПОСТГИПОКСИЧЕСКИХ ОСЛОЖНЕНИЙ
ГЛАВА 4. ИНТЕНСИВНОСТЬ РАЗВИТИЯ ОКСИДАТИВНОГО СТРЕССА У НОВОРОЖДЕННЫХ, ПЕРЕНЕСШИХ ГИПОКСИЮ
ГЛАВА 5. КИСЛОТНАЯ РЕЗИСТЕНТНОСТЬ ЭРИТРОЦИТОВ КРОВИ НОВОРОЖДЕННЫХ, ПЕРЕНЕСШИХ ГИПОКСИЮ
ГЛАВА 6. АКТИВНОСТЬ ГЛЮКОЗО6ФОСФАТДЕГИДРОГЕНАЗЫ ЭРИТРОЦИТОВ НОВОРОЖДЕННЫХ, ПЕРЕНЕСШИХ 1 ГИПОКСИЮ
ГЛАВА 7. СТРУКТУРНЫЕ СВОЙСТВА ЭРИТРОЦИТОВ, МОДИФИЦИРОВАННЫХ СОЕДИНЕНИЯМИ КАРБОНИЛЬНОЙ ПРИРОДЫ
7.1 Структурные свойства эритроцитов, модифицированных
глутаровым диальдегидом
7.1.1. Осмотическая резистентность эритроцитов в присутствии глутарового диальдегида
7.1.2. Кислотная резистентность эритроцитов в присутствии глутарового диальдегида
7.2. Структурные свойства эритроцитов, модифицированных формальдегидом
7.2.1. Осмотическая резистентность эритроцитов в присутствии формальдегида
7.2.2. Кислотная резистентность эритроцитов в присутствии формальдегида
7.3. Структурные свойства эритроцитов, модифицированных ацетоном
7.3.1. Осмотическая резистентность эритроцитов в присутствии ацетона
7.3.2. Кислотная резистентность эритроцитов в присутствии ацетона
ГЛАВА 8. СРАВНИТЕЛЬНАЯ ОЦЕНКА СТРУКТУРНЫХ СВОЙСТВ ЭРИТРОЦИТОВ И АКТИВНОСТИ ГЛЮКОЗО6ФОСФАТДЕГИДРОГЕНАЗЫ В ДИНАМИКЕ РАЗВИТИЯ ТОКСИЧЕСКОГО ПОРАЖЕНИЯ ПЕЧЕНИ КРЫС
8.1. Осмотическая резистентность эритроцитов в динамике развития токсического повреждения печени
8.2. Кислотная резистентность эритроцитов в динамике развития токсического повреждения печени
8.3. Активность глкжозо6фосфатдегидрогеназы эритроцитов в динамике развития токсического повреждения печени
ГЛАВА 9. СТРУКТУРНЫЕ СВОЙСТВА ЭРИТРОЦИТОВ, МОДИФИЦИРОВАННЫХ АНТИБИОТИКАМИ РАЗЛИЧНЫХ КЛАССОВ
9.1. Структурные свойства эритроцитов, модифицированных фортумом
9.1.1. Осмотическая резистентность эритроцитов, модифицирован
ных фортумом
9.1.2. Кислотная резистентность эритроцитов, модифицированных фортумом
9.1.3. Осмотическая резистентность эритроцитов, выделенных из крови, предварительно инкубированной с фортумом
9.1.4. Кислотная резистентность эритроцитов, выделенных из крови, предварительно инкубированной с фортумом
9.2. Структурные свойства эритроцитов, модифицированных амикацином
9.2.1. Осмотическая резистентность эритроцитов, модифицированных амикацином
9.2.1. Кислотная резистентность эритроцитов, модифицированных амикацином
9.2.3. Осмотическая резистентность эритроцитов, выделенных из крови, предварительно инкубированной с амикацином
9.2.4. Кислотная резистентность эритроцитов, выделенных из крови, предварительно инкубированной с амикацином
9.3. Структурные свойства эритроцитов, модифицированных ванкомицином
9.3.1. Осмотическая резистентность эритроцитов, модифицированных ванкомицином
9.3.2. Кислотная резистентность эритроцитов, модифицированных ванкомицином
9.3.3. Осмотическая резистентность эритроцитов, выделенных из крови, предварительно инкубированной с ванкомицином
9.3.4. Кислотная резистентность эритроцитов, выделенных из крови, предварительно инкубированной с ванкомицином
9.4. Структурные свойства эритроцитов, модифицированных ципрофлоксацином
9.4.1. Осмотическая резистентность эритроцитов, модифицированных ципрофлоксацином
9.4.2. Кислотная резистентность эритроцитов, модифицированных ципрофлоксацином
9.4.3. Осмотическая резистентность эритроцитов, выделенных из крови, предварительно инкубированной с ципрофлоксацином
9.4.4. Кислотная резистентность эритроцитов, выделенных из крови, предварительно инкубированной с ципрофлоксацином
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
ЛИТЕРАТУРА


Дискоцит имеет средний диаметр 7,5 мкм в плазме крови 8,4 мкм, площадь поверхности 3 мкм2 и средний объем ,1 мкм3. Форма двояковогнутого диска обеспечивает высокое отношение площади его поверхности к объему и способствует максимально быстрому газообмену 7, 6. При старении эритроцитов уменьшается их объем, площадь поверхности, увеличивается внутриклеточная вязкость и плотность, что снижает их деформируемость 7. Зрелый эритроцит не содержит ядра и органелл. В норме в крови циркулируют от 2 до ретикулоцитов безъядерные клетки, образующиеся на последнем этапе созревания эритроцитов. Они содержат митохондрии, рибосомы, эндоплазматический ретикулум ЭПР созревают в кровотоке за ч . Мембрана эритроцита представляет собой композитную структуру, основой которой является липидный бислой, пронизываемый интегральными белками, связанными с белковой сетью цитоскелета, локализованного на цитоплазматической поверхности липидного бислоя. Мембрана осуществляет координацию работы клетки в зависимости от физических и химических сигналов, поступающих к ней в организме 9 и позволяет эритроциту транспортировать кислород с минимальным расходом энергии . Показано наличие в эритроцитах газовых полостей, имеющих общебиологическое значение 3. Наружный слой мембраны эритроцитов образован гликопротеидами и содержит разветвленные комплексы олигосахаридов рис. А и лектинов 2. Групповые антигены эритроцитов выполняют и различные биологические функции рецепторную для хемокинов, экзогенных лигандов, паразитов, микробов, транспортную аквапорины, транспортеры глюкозы, нуклеозидов, мочевины и др. С5,С5,СЭ и др. Рис. Гликопротеиды обусловливают определенный заряд мембраны 2. Эритроцитарная мембрана не содержит опиатных рецепторов 0. Эритроциты отличаются высоким содержанием белка отношение липидбелок по массе сухого вещества составляет 0, . На долю углеводов может приходиться около массы мембран, при этом они всегда входят в состав гликолипидов или гликопротеинов 2. В эритроцитах человека обнаружено более 0 различных белковых структур, обладающих ферментативной активностью . На внешней стороне мембраны эритроцитов располагаются ферменты глицеральдегид3фосфатдегидрогеназа ГЗФД и ацетилхолинэстераза, активность которых зависит от структурного состояния мембраны 7. ГЗФД, транскетолаза, изоцитратдегидрогеназа и сукцинатдегидрогеназа связаны с интегральным белком полосы 3, который модулирует активность комплекса ферментов гликолиза на внутренней поверхности мембраны . Липидный матрикс и белковая сеть цитоскелета определяют упругость мембран эритроцитов при их деформациях 2. Белокбелковые взаимодействия между отдельными полипептидами мембраны эритроцита позволяют организоваться им в упорядоченную структуру мембранный скелет, связанный с фосфолипидным матриксом. Цитоскелет содержит около всех белков мембраны, которые являются периферическими, а белок полосы 3 и гликофорин Л интегральными . Белок полосы 3 образует анионный канал рис. Его цитоплазматический участок представляет собой полипептид с молекулярной массой кОа. Он связывает большинство гликолитических ферментов, гемоглобин, а также якорный белок анкирин и белок полосы 4. Рис. Схема расположения белков в примембранном цитоскелете эритроцитов. А, 9 мембрана эритроцита . Гликофорины или сиалогликопротеины представляют собой интегральные белки эритроцита рис. Наличие гидрофобных взаимодействий между остатками жирных кислот молекул фосфолипидов ФЛ и гликофоринами обеспечивает их прочную фиксацию в липидном матриксе мембраны. Аминоконцевой фрагмент молекул гликофоринов проявляет гидрофильные свойства и локализован на наружной поверхности мембраны, а карбоксиконцевой фрагмент находится на цитоплазматической поверхности мембраны . Идентифицировано несколько типов гликофоринов А, В, С, О, Е. Их полиморфизм определяет антигенные свойства эритроцитов и, соответственно, деление па группы крови по системе М гликофорины А, В, Е, или по системе ОегЫсЬ гликофорины С и О 4. Взаимодействие цитоплазматического участка молекул гликофоринов с белками полос 4. Актин присутствует в интактной клетке в виде олигомеров из субъединиц.