Исследование взаимосвязи между оптическими характеристиками тромбоцитов человека и их агрегационной и адгезионной активностью

• Автор: Дуплякин, Евгений Олегович
• Шифр специальности: 03.00.02, 14.00.41
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2005
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 92 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

Введение.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Активация тромбоцитов.

1.2 Гемостатические реакции тромбоцитов

1.2.1 Адгезия тромбоцитов

1.2.2 Реакция высвобождения

1.2.3 Агрегация тромбоцитов

1.3 Концентрация и объм тромбоцитов

1.4 Оптические методы исследования активации тромбоцитов

ГЛАВА 2. Материалы и методы
2.1 Выделение тромбоцитов
2.1.1 Забор крови в пробирки.
2.1.2 Забор крови в контейнеры.
2.2 Определение концентрации тромбоцитов.
2.3 Лазерный дифракционный анализ дисперсионного состава суспензии тромбоцитов
2.3.1 i i блок схема.
2.3.2 Восстановление распределения частиц по размерам из картины светорассеяния.
2.3.2 Объмная концентрация рассеивающих частиц.
2.3.3 Экспериментальные условия для вычисления углового распределения рассеянного света
2.3.4 Вычисление среднего объма тромбоцитов.
2.3.5 Вычисление концентрации тромбоцитов
2.3.6 Выбор презентации
2.3.7 Вычисление среднего объма и коэффициента преломления тромбоцитов
2.4 Исследование агрегациониой активности тромбоцитов
2.5 Исследование адгезионной активности тромбоцитов
2.5.1 Подготовка образцов
2.5.2 Визуализация адгезированных тромбоцитов и параметры оценки адгезионной активности клеток
2.6 Активация тромбоцитов
2.6.1 Добавки АДФ
2.6.2 Контакт с поверхностью тромбоцитарных контейнеров
2.6.3 Контакт с поверхностью трубок из ПВХ и СР
2.6.2 Контакт с поверхностью трубок из ПВХ и СР в условиях потока
2.7 Статистическая обработка данных
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ.
3.1 Исследование взаимосвязи между оптическими характеристиками тромбоцитов человека, их агрегационной и адгезионной активностью
3.1.1 Добавки АДФ
3.1.2 Контакт с поверхностью тромбоцитарных контейнеров
3.1.3 Контакт с поверхностью трубок из ПВХ и СР
3.1.4 Контакт с поверхностью трубок из ПВХ и СР в условиях потока
3.2 Коэффициент преломления тромбоцитов как параметр активации клеток.
3.2.1 Влияние ЛИК
Заключение.
Выводы.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ. Введение. ГЛАВА 1. Активация тромбоцитов. ГЛАВА 2. Забор крови в пробирки. Забор крови в контейнеры. Определение концентрации тромбоцитов. i i блок схема. Восстановление распределения частиц по размерам из картины светорассеяния. Объмная концентрация рассеивающих частиц. Вычисление среднего объма тромбоцитов. ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ. Коэффициент преломления тромбоцитов как параметр активации клеток. Заключение. Выводы. Гемосовместимость материалов и изделий медицинского назначения во многом определяется реакцией тромбоцитов на чужеродную поверхность, т. Традиционно функциональное состояние тромбоцитов связывают с протекающими при изменении окружающей среды процессами адгезии, агрегации и высвобождения внутриклеточных биологически активных компонентов 8, . Так, например, адгезия клеток на поверхность имплантата провоцирует реакцию высвобождения тромбоцитарных факторов во внеклеточное пространство, в том числе индукторов агрегации. Это приводит к активации не адгезированных тромбоцитов, что сопровождается интенсификацией процессов адгезии клеток, а также их агрегацией на поверхности и в объеме. Несмотря на прогресс в изучении механизмов активации тромбоцитов, процессы, протекающие при контакте этих клеток с чужеродным материалом, остаются до конца не изучены. В значительной степени это связано с ограниченностью, трудомкостью и иногда недостаточной информативностью имеющихся методологических подходов к изучению свойств и реакций тромбоцитов. В связи с тем, что регистрация активации тромбоцитов в реальном масштабе времени трудно осуществима, функциональное состояние тромбоцитов обычно исследуется до и после того или иного воздействия. Одним из наиболее информативных методов является исследование характера адгезии клеток с помощью сканирующего электронного микроскопа, что дает возможность одновременно изучать количество и морфологию адгезированных тромбоцитов , . Так например, в потоке, при наличии напряжения сдвига, на поверхности материала не всегда удается найти адгезироваиные тромбоциты. При этом активированные поверхностью тромбоциты могут накапливаться в циркулирующей крови и состояние клеток, таким образом, будет отличным от исходного , , . Помимо этого, активированные контактом клетки могут иметь большую адгезионную активность, что может реализоваться в образовании тромбов в застойных зонах. Широко распространенным методом анализа свойств тромбоцитов, проявляемых в объме жидкой фазы, является изучение их агрегационной активности 4, , , , . В основе метода лежит регистрация увеличения светопропускания суспензии тромбоцитов под действием физических или химических индукторов. Эффект увеличения светопропускания объясняют уменьшением количества рассеивающих объектов с одновременным увеличением их размеров вследствие агрегации тромбоцитов. Однако изменение светопропускания может быть связано не только с изменением количества рассеивающих объектов, а и с изменением оптических свойств среднего объма и коэффициента преломления единичных клеток. Методика, разработанная в Центре по исследованию биоматериалов ФГУ ИИИТиИО Росздрава, позволила привлечь метод лазерного дифракционного анализа для измерения среднего объма и коэффициента преломления тромбоцитов в суспензии клеток с известной концентрацией 5, 6. Полноценное использование оптических характеристик тромбоцитов в качестве параметров оценки их функционального состояния невозможно без понимания их взаимосвязи с такими хорошо изученными свойствами клеток, как агрегация и адгезия, что и обусловливает актуальность данной работы. Целыо работы является исследование взаимосвязи между адгезионными, агрегационными свойствами тромбоцитов и их оптическими характеристиками в условиях i vi. Продемонстрировать возможность использования оптических характеристик тромбоцитов как параметров, отражающих активацию клеток. АДФ, позволяющие по картине светорассеяния для суспензии клеток вычислять их средний объм и коэффициент преломления.