Закономерности SOS-индукции в клетках бактерий Escherichia coli при действии ультрафиолетового света и ионизирующих излучений с разными физическими характеристиками

• Автор: Комова, Ольга Викторовна
• Шифр специальности: 03.00.01
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2002
• Место защиты: Дубна
• Количество страниц: 106 с.

3.2.1. Влияние эксцизионной репарации УФиндуцированных повреждений ДНК на БСиндукцию

3.2.2. Влияние фотореактивации пиримидиновых димеров на 8индукцию

3.2.3. Влияние регуляции клеточного цикла на 8индукцию

3.3. 8ответ при действии ионизирующих излучений

3.3.1. уоблучение

3.3.1.1. Влияние мутации в гене итиС на 8индукцию

3.3.2. Ускоренные заряженные ионы

3.3.3. Влияние аноксического радиосенсибилизатора ТАН на 8индукцию

3.4. Оценка чувствительности метода Б 1ихтест

I лава IV. Обсуждение результатов

Заключение
Выводы
Список литературы


Индукция ответа в таких случаях позволяет решить две главные задачи повысить эффективность эксцизионной репарации, с одной стороны, а с другой повысить толерантность клетки к повреждениям, которые не могут быть эксцизированы. Последняя из этих задач в ii i решается путем снижения корректорских функций репликативной ДНКполимеразы, что делает репарацию крайне мутагенной. В результате исследований системы ii i удалось установить принципы ее регуляции, природу индуцирующего сигнала, а также значительную часть функций, контролируемых генами. При этом было выявлено существенное сходство некоторых из них с функциями индуцибельных белков в клетках млекопитающих и дрожжей. На основе принципов регуляции экспрессии генов для . Д1 Жповреждающих факторов различной природы. Существующие методы измерения уровня индукции в бактериальных клетках, главным образом хромотест i , , , i ii, , позволили накопить обширные данные, касающиеся генотоксичности химических соединений. Однако в научной литературе имеется лишь незначительное число работ, посвященных изучению эффективности индукции системы различными типами излучений и ее взаимодействию с другими репарационными механизмами клетки. Данные, представленные в них, весьма фрагментарны и противоречивы. Часто такие исследования ограничивались одной дозой облучения или одним временем пострадиационного инкубирования клеток. Однако очевидно, что подробное исследование закономерностей индукции способно внести существенный вклад в понимание последовательности молекулярных событий, приводящих к ее запуску и активизации тех или иных функций. Учитывая тесную взаимозависимость 8репарации, эксцизионной репарации и репликации ДНК, весьма информативным может оказаться исследование закономерностей 8ответа в клетках с мутациями в генах, ответственных за различные пути эксцизионной репарации и регуляцию клеточного цикла. Существующие методы слишком трудоемки и не могут быть использованы для решения таких задач. Для этой цели нами был разработан эффективный и весьма экономичный метод 8 1ихтест РШэуп е1 а1. Е.соИ, способных к 8индуцибельной биолюминесценции. Такую способность они приобретают после трансформации их специально сконструированной плазмидой рРЬБ, несущей люциферазный оперон светящихся бактерий РкоЬас1епит ii под конторолем Эиндуцибельного промотора стыена плазмиды Со1 О. Количественным показателем БОБ индукции в данном методе является световой выход, который может быть измерен на люминометре в течение нескольких секунд. Этот метод не требует разрушения клеток, поэтому позволяет исследовать эффективность 8ответа при действии различных ДНКповреждающих факторов в режиме реального времени. Он успешно может быть использован для изучения влияния на 8индукцию различных белков, контролирующих, в частности, другие пути репарации. Для этого не требуется создания новых штаммов с мутацией в соответствующем гене, поскольку репортерный компонент с биолюминесцентной системой находится на плазмиде, которая может быть трансформирована в любой из имеющихся мутантных штаммов. Целью настоящего исследования явилось изучение закономерностей индукции у бактерий . ЛПЭ с использованием метода xтест. ДНК, образующихся в присутствии аноксического радиосенсибилизатора ГАН. Научная новизна. Научнопрактическая значимость работы. Полученные результаты показывают, что xтест является чувствительным и высокоинформативным методом для исследования индукции в клетках бактерий ii i при действии излучений разного качества. Он также может быть использован для изучения генетического действия различных факторов физической и химической природы, т. ДНК. Результаты данной диссертации были использованы при разработке в рамках проекта I грант I СТ прибора для регистрации в автоматическом режиме генетического действия солнечной радиации. В экспериментах i viv получены новые данные о закономерностях индукции при действии излучений разного качества, что позволяет расширить понимание механизмов, приводящих к запуску индуцибельных репарационных процессов.