Радиочувствительность потомков опухолевых клеток, выживших после γ-облучения в больших дозах

• Автор: Сланина, Светлана Викторовна
• Шифр специальности: 03.00.01
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2000
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 128 с.

ОГЛАВЛЕНИЕ

Список СОКРАЩЕНИЙ.

Введение

I. Обзор литературы.

1.1. Отдаленные эффекты воздействия радиации на клетки млекопитающих.

1.1.1. Летальные и нелегальные эффекты в отдаленном потомстве

облученных клеток

Т. 1.2. Радиоиндуцированная нестабильность генома

1.1.3. Отдаленные эффекты излучения в опухолевых клетках.

1.2. Проблема возобновления опухолевого роста после облучения.

1.2.1. Репопуляция опухоли после радиационного воздействия.

1.2.2. Повышение радиоустойчивости опухоли к повторному облучению
1.3. Исследование радиочувствительности потомков облученных опухолевых клеток в условиях i vi.
II. Материалы и методы исследования.
II. 1. Линии клеток, условия культивирования и облучения
.2. Получение линий потомков облученных клеток
.3. Подготовка и анализ хромосомных препаратов
.4. Радиочувствительность клеток
.5. Рост клеток в полужидкой среде
.6. Кинетика роста клеточных популяций
.7. Подготовка цитологических препаратов для световою и флуоресцентного микроскопирования.
.7.1. Цитологические препараты для световой микроскопии
.7.2. Цитологические препараты для флуоресцентной микроскопии

.8. Распределение клеток по фазам клеточного цикла метод проточной цитофлуориметрии
.9. Восстановление клеток от радио индуцированных повреждений.
Прививка клеток животным.
Статистическая обработка полученных результатов
Результаты собственных исследований.
III. Получение и цитоморфологическая характеристика потомков облученных клеток.
III. 1. Динамика изменений в облученной популяции клеток ДХТК.
1.2. Морфологическая характеристика полученных популяций потомков облученных клеток 1ЮК и ГЮК
1.3. Хромосомная характеристика линий потомков облученных клеток.
IV. Радиочувствительность потомков облученных клеток
IV. 1. Дозовые кривые выживаемости линий ДХТК, ПОКЮ и IКЖ
IV. 1.1. Зависимость формы дозовых кривых выживаемости от
материала подложки.
IV. 1.2. Зависимость формы дозовых кривых выживаемости от сохранения межклеточных контактов
IV.2. Радиочувствительность потомков облученных клеток при росте в полужидкой среде.
V. Репопуляция потомков облученных клеток после радиационного воздействия.
V.. Кривые роста линий ДХТК, ПОКЮ и ПОК в норме и после
облучения в дозах 8, , ,5 и Гр.
V.2. Динамика цитоморфологичсских изменений в клеточных
популяциях в первые 4 суток после облучения в дозе I р.
V.3. Распределение клеток по фазам клеточного цикла после облучения
в дозе ,5 Гр
VI. Эффективность восстановления потомков облученных клеток от радиоиндуцированных ПОВРЕЖДЕНИЙ.
VI. 1. Восстановление от ПЛП
VI.2. Восстановление от СЛП.
VII. Туморогбнностъ КЛЕТОК
Обсуждение полученных результатов.
Библиография


Целью нас гоя дей работы было исследование радиочувствительности и способности к постлучевой репопуляции отдаленных потомков опухолевых клеток, выживших после однократного уоблучения в больших дозах. В соответствии с этим были поставлены следующие задачи. Получить i vi экспериментальную модель линии потомков фибробластов джунгарского хомячка, выживших после уоблучения в дозах и Гр ПОК и ПОК. Дать им морфологическую и хромосомную характеристики. Изучить радиочувствительность потомков облученных клеток и клеток исходной линии. Провести сравнительное исследование способности ПОК и родительских клеток к постлучевой репопуляции. Сравнить эффективность восстановления от радиоиндуцированных повреждений клеток родительской линии и ПОК. Провести сравнительное изучение туморогенной активности исследуемых . Научная новизна полученных результатов. Предложен способ выделения i vi потомков облученных клеток, с помощью которого после однократного уоблучения в дозах и Гр фибробластов джунгарского хомячка были получены линии ПОКЮ и ПОК. ПОК значительно отличаются от исходных клеток по ряду свойств морфологии, распределению клеток по числу хромосом, клоногенной способности, радиочувствительности, способности к постлучевой рспопуляции. Впервые обнаружена чрезвычайно высокая радиоустойчивосгь ПОК, значение которых в 23 раза превышало родительских клеток. Наличие межклеточных контактов у потомков в момент облучения способствовало выявлению гетерогенности клоногенных клеток ПОК по радиочувствительности. При изучении i vi способности ПОК к постлучевой репопуляции впервые показано, что, в отличие от клеток родительской линии, потомки быстрее и эффективнее восстанавливали свою численность после уоблучения в больших дозах 8 Гр. Впервые обнаружено, что туморогенная способность необлученных и облученных в дозах 5, и Гр ПОК не различалась. Выявленные i vi свойства ПОК высокая радиоустойчивость и способность к быстрой и эффективной постлучевой репопуляции, были подтверждены в опытах i viv. Научная и практическая значимость работы. Результаты настоящей работы представляют теоретический интерес для разработки проблемы отдаленных последствий действия ионизирующего излучения на опухолевую популяцию. Полученные в работе данные способствуют пониманию процессов возобновления роста опухоли после больших лучевых нагрузок, а также возможных механизмов повышения радиорезистентности рецидивов к повторному облучению. Наличие общих количественных закономерностей, выявленных i vi и i viv, свидетельствует о том, что предложенная нами экспериментальная клеточная модель может быть полезна для разработки новых и совершенствования имеющихся методов в лучевой терапии опухолей. Апробация результатов исследования. Материалы диссертации докладывались на заседаниях кафедры Биофизики, радиационной физики и экологии Московского государственного инженернофизического института технического университета, а также на семинарах Отдела молекулярнобиологических и радиоизотопных методов исследования РОПЦ РАМН им. П.П. Блохина. Москва, октября, , Научных сессиях МИФИ Москва, январь, , , II Съезде биофизиков России Москва, августа, . Публикации. По материалам диссертации опубликовано 3 статьи и 9 тезисов, 1 статья принята в печать. СТРУКТУРА и объем ДИССЕРТАЦИИ. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, результатов исследования, обсуждения полученных результатов, основных выводов и библиографии материал изложен на 8 стр. II фотографий, рисунков и 9 таблиц. Личный вклад СОИСКАТЕЛЯ. Основные результаты, представленные в диссертационной работе были получены непосредственно автором. При проведении исследований использовались теоретические и методические разработки научных руководителей доктора биологических наук, профессора Календо Г. С. и кандидата биологических наук Тырсиной Е. Г. Хромосомный анализ и опыты на животных проведены в соавторстве с ведущим научным сотрудником НИИ Канцерогенеза РОНЦ РАМН им. Н.Н. Ьлохина, кандидатом биологических наук Какпаковой Е.