Сравнительное изучение дозовых зависимостей частоты нестабильных хромосомных обменов при облучении лимфоцитов человека in vivo и in vitro

• Автор: Семенов, Алексей Владимирович
• Шифр специальности: 03.00.01
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2003
• Место защиты: Санкт-Петербург
• Количество страниц: 187 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
0 ВВЕДЕНИЕ.

1 ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР

1.1 Спонтанный уровень нестабильных хромосомных обменов в лимфоцитах

ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ ЧЕЛОВЕКА.

1.2 Зависимость частоты нестабильных хромосомных обменов от дозы при ОБЛУЧЕНИИ ЛИМФОЦИТОВ ЧЕЛОВЕК, I VI

1.3 Особенности дозовой зависимости нестабильных хромосомных обменов в

ДИАПАЗОНЕ МАЛЫХ ДОЗ ОБЛУЧЕНИЯ.

1.4 Зависимость частоты нестабильных хромосомных обменов от дозы при ОБЛУЧЕНИИ ЛИМФОЦИТОВ I VIV 6

2 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

2.1 Характеристика пациентов доноров крови .

2.2 Методика тотального облучения пациентов и дозиметрия
2.3 Облучение лимфоцитов i и дозиметрия.
2.4 Приготовление цитогенетических препара тов.
2.5 Микроскопический анализ препара тов.
2.6 Ста тистическая обра ботка резуль та тов.
3 РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ.
3.1 Индивидуальные зависимости дозачастота клеток с нестабильными
хромосомными обменами. .
3.2 Заключение но результатам анализа индивидуальных зависимостей доза ЧАСТОТА КЛЕТОК С НЕСТАБИЛЬНЫМИ ХРОМОСОМНЫМИ ОБМЕНАМИ.
3.3 Цитогенетический эффектней одинаковых дозах облучения лимфоцитов i vi и i viv
3.3.1 Спонтанный уровень клеток с нестабильными хромосомными обменами НХО доза 0
3.3.2 Анализ частоты клеток с НХО при однократном облучении в дозах 8 сГр i vi и ,5 сГр i viv.
3.3.3 Анализ частоты клеток с НХО при дозах облучения ,
сГр i viv и сГр i vi
3.4 Суммарные зависимости дозачастота клеток с НХО при облучении
лимфоцитов i vi и i viv .
4 ЗАКЛЮЧЕНИЕ
5 ВЫВОДЫ
6 ПРИЛОЖЕНИЕ
7 СПИСОК ЦИТИРОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ
Список сокращений.
АХ аберрации хромосом
ДНК дезоксирибонуклеиновая кислота
ИИ ионизирующее излучение
НХО нестабильные хромосомные обмены дицентрики и центромерные кольца
ФГА фитогемагглютинин
ЧАЭС Чернобыльская атомная электростанция
I флуоресцентная гибридизация i i i i iii
метод окрашивания препаратов метафазных хромосом, позволяющий выявить клетки, находящиеся на стадии второго митоза i
О Введение.
Актуальность


Это принято объяснять Бочков, Севанькаев, , с одной стороны, малыми выборками обследованных людей и недостаточным для наджной статистики количеством проанализированных на каждого человека клеток, а с другой различиями в методах и сроках культивирования лимфоцитов. Кроме того, критерии учта и классификации аберраций не были унифицированы. Поэтому вопрос о влиянии на спонтанную частоту цитогенетических маркеров факторов методического характера изучался особенно тщательно. В работе Бочкова было показано, что при фиксации лимфоцитов в интервале от до 0 часов от начала культивирования частота регистрируемых АХ остатся постоянной, и только в более поздние сроки 0 ч наблюдается рост числа аберраций за счт одиночных и парных фрагментов. Причиной этого, как предположил автор, может быть воздействие на ДНК продуктов клеточного метаболизма в старых культурах. В более поздней работе Бочков, было продемонстрировано, что при фиксации клеток через часов после стимуляции, когда большинство из них находится на стадии 1ого митотического деления, и на часу, когда преобладают клетки Пго митоза, общая частота аберраций остатся постоянной. При этом наблюдается относительное увеличение доли двойных разрывов в общей сумме АХ за счт уменьшения доли аберраций хроматидного типа, что может быть связано с переходом первично одиночных повреждений ДНК в двойные в процессе е редупликации. Исследования кинетики клеточного цикла лимфоцитов, как ранние с использованием тимидина, меченого тритием, так и более поздние с использованием бромдезоксиуридина ВгсШ, показали, что доля вторых митозов в часовых культурах редко превышает 5. Поскольку именно такое время культивирования применяется в большинстве цитогенетических исследований, столь малый вклад клеток II митоза не может существенно занижать частоту нестабильных аберраций хромосомного типа изза их элиминации при делении. Таким образом, небольшие методические вариации и факторы субъективного характера не могут существенно влиять на спонтанный уровень регистрируемых маркеров радиационного воздействия и, следовательно, не объясняют имеющихся межлабораторных различий. Другой категорией факторов, которые могут влиять на спонтанный уровень АХ, являются так называемые пол, возраст, курение и другие. В отношении пола большинство авторов придерживается мнения об отсутствии какихлибо различий в числе и типах АХ у мужчин и женщин Бочков, , Севанькаев, и др. Однако, Бендер с соавт. . В некоторых работах было обнаружено близкое к статистически значимому различие между полами. Так, превышение частоты дицентриков у женщин над таковою у мужчин было установлено в работе V на уровне значимости, а в работе . Однако даже если подобное различие и существует, оно вряд ли является причиной межлабораторной вариабельности, поскольку в большинстве крупномасштабных исследований донорами крови были преимущественно мужчины. Данные о зависимости частоты различных типов АХ от возраста более разноречивы. В ряде работ Бочков, , Горбунова и др. Ь отмечается отсутствие возрастной зависимости для спонтанной частоты АХ, в других такая зависимость была обнаружена для суммы всех аберраций Ауа с Так, при сравнении 3х возрастных групп лиц , и лет было показано достоверное увеличение с возрастом количества аберраций хроматидного типа. По частоте аберраций хромосомного типа наблюдалась лишь тенденция к повышению в старшей возрастной группе Севанькаев, . В другой работе СагЬопеИ е1 а1. Коэффициент пуассоновской регрессии достоверно отличный от 0 был получен только в отношении индукции аберраций хроматидного типа медикаментами в первую очередь, анальгетиками. Влияние возрастного фактора на частоту аберраций хромосомного типа не было выявлено при общем регрессионном анализе. Однако, при разбиении выборки на три группы , , и лет в старшей возрастной группе частота хромосомных обменов и разрывов оказалась достоверно повышенной. В работе ВаисИег е