Генные мутации в соматических клетках человека IN VIVO: радиобиологические закономерности

• Автор: Замулаева, Ирина Александровна
• Шифр специальности: 03.00.01
• Научная степень: Докторская
• Год защиты: 2003
• Место защиты: Обнинск
• Количество страниц: 282 с. : ил.

содержанием ДНК.

2.5.2. Определение доли клеток, связывающих аннексии V,

в разных субпопуляциях лимфоцитов.

2.5.3. Морфологический анализ апоптоза

2.6. Определение субпопуляционного состава лимфоцитов

2.7. Статистический анализ.

Глава III. Результаты исследования.

г 3.1. Анализ частоты мутантных клеток в группах контрольных

необлученных лиц.

3.1.1. Воспроизводимость результатов многократного

определения изучаемых показателей.

3.1.2. Частота ТСЯмутантных клеток у контрольных лиц разного возраста, пола и образа жизни
3.1.3. Влияние возраста на частоту вРАмутантных клеток с разным фенотипом.
Зависимость частоты вРАмутантных клеток от дозы облучения
3.2.1. Частота 0 и ЫЫвариантных клеток у лиц, подвергшихся острому облучению в разных дозах
3.2.2. Увеличение частоты вРАмутантных клеток в зависимости от дозы пролонгированного воздействия.
Сопоставление частоты ТСИмутантных клеток с дозой в разные сроки после облучения.
3.3.1. Влияние внешнего облучения на частоту лимфоцитов мутантных по ТСЯлокусу
3.3.2. Частота ТСЯмутантных клеток после смешанного внешнего и внутреннего радиационного воздействия в различных дозах
Оценка эффектов действия ионизирующего излучения в малых дозах на частоту клеток с генными мутациями
3.4.1. Частота вРАмутантных клеток после радиационного воздействия в малых дозах
3.4.2. Повышение частоты ТСЯмутантных клеток у лиц, подвергшихся радиационному воздействию в малых дозах
3.4.2.1. Результаты обследования ликвидаторов аварии на ЧАЭС через 9 лет облучения .
3.4.2.2. Результаты обследования жителей загрязненных радионуклидами территорий.
3.4.2.3. Оценка влияния возраста при радиационном воздействии в малых дозах на частоту ТСЯмутантных клеток.
Сравнительное исследование частоты мутантных клеток у пациентов со злокачественными, доброкачественными новообразованиями и здоровых лиц.
Сравнительный анализ данных, полученных при одновременном использовании вРА и ТСЯметодов.
Исследование апоптотической элиминации поврежденных лимфоцитов и влияния этого процесса на количество ТСЛмутантных клеток.
3.7.1. Гйбель лимфоцитов путем апоптоза после гамма 8 облучения i vi
3.7.1.1. Подбор оптимальных условий исследования
апоптотической гибели с помощью метода проточной цитометрии.
3.7.1.2. Зависимость апоптотической гибели
лимфоцитов от дозы облучения i vi у контрольных доноров
3.7.1.3. Отсутствие влияния субпопуляционного
состава лимфоцитов на радиочувствительность в отношении
апоптоза.
3.7.1.4. Уровень апоптотической гибели лимфоцитов
после облучения i vi у ликвидаторов
аварии на ЧАЭС в сравнении с контрольными лицами
3.7.2. Сопоставление уровня радиационноиндуцированного
апоптоза лимфоцитов и частоты мутантных клеток.
Глава IV. Обсуждение результатов исследования.
4.1. Частота мутантных клеток в контрольной группе
4.2. Количество радиационноиндуцированных мутаций в разных
локусах в зависимости от дозы, мощности дозы и сроков радиационного воздействия.
4.2.1. Зависимость дозаэффект в отношении 4 мутантных клеток при остром и пролонгированном облучении.
4.2.2. Анализ частоты мутантных клеток после 8 радиационного воздействия.
4.2.3. Возможности использования методов определения 1 и мутантных клеток в целях биологической дозиметрии .
4.3. Влияние ионизирующего излучения в малых дозах на 4 показатели соматического мутагенеза в отдельных генных
локусах.
4.3.1. Повышение частоты мутантных клеток у
облученных в малых дозах лиц как следствие радиационноиндуцированной нестабильности генома
4.3.2. Отсутствие признаков генетической нестабильности
кроветворных клетках стволового типа по данным обследования лиц, облученных в малых
4.3.3. Закономерности проявления генетической 4 нестабильности после радиационного воздействия в малых дозах
4.4. Заключение по результатам одновременного определения 1 частоты клеток с разными вариантными фенотипами
4.5. Высокая частота мутантных клеток как показатель
повышенного риска возникновения онкологических заболеваний.
4.6. Анализ апоптотичсской элиминации поврежденных i vi 0 клеток в группах контрольных лиц и ликвидаторов аварии на ЧАЭС.
Заключение
Выводы.
Список литературы


Нестабильность генома наблюдалась и при облучении в дозах 0,2 и 0,4 Гр i . Учитывая существование этого феномена при действии ионизирующего излучения в малых дозах и отсутствие зависимости от дозы в широком диапазоне доз, можно полагать, что относительный вклад нестабильности генома в суммарный генетический эффект облучения будет особенно велик в области малых доз. Анализ данных литературы свидетельствует о широком спектре генетических изменений, характеризующих этот феномен. Он включает н генные i, v, , и структурные i . Однако ряд авторов отмечает, что редкоионизирующие излучения не способны индуцировать нестабильность, выявляемую на хромосомном уровне, по крайней мере, в некоторых типахлиниях клеток i . Исследование i, , представляет особенный интерес в связи с тем, что в нем сообщается об одновременном анализе генных и структурных мутаций, возникающих в отдаленные сроки после действия ионизирующих излучений с разной ЛПЭ па гемопоэтические стволовые клетки человека и мыши. Автор наблюдал проявление хромосомной нестабильности в случае действия а частиц и ее отсутствие при воздействии рентгеновского излучения. В тоже время повышенная частота мутаций отмечалась и в том и в другом случае, т. Следует отметить, что известно относительно мало данных о проявлении нестабильности генома на хромосомном и генном уровнях в параллельных экспериментах на одних и тех же объектах. Эти немногочисленные исследования, выполненные i vi, свидетельствуют о более эффективной индукции нестабильности, выявляемой на генном уровне, чем на хромосомном v . Так, в первой работе было показано, что только около клонов мутантных клеток, выделенных через 0 поколений последействия рентгеновского излучения на культуру клеток ТК6, характеризуются кариологической нестабильностью, которую идентифицировали по наличию двух и более мстафаз с неидентичными хромосомными аберрациями внутри одного клона. Напротив, в подавляющем большинстве клонов с кариологической нестабильностью наблюдалась повышенная частота мутаций в ТКгенс, достигающая десятикратных различий по сравнению с частотой мутаций в необлученных контрольных клетках. В работе i, , проводилось культивирование мутантных клонов клеток СНО с целью цитогенетического анализа хромосомных мутаций в отдаленные сроки после облучения. Указанные клопы различались по скорости роста из них росли медленно, остальные быстрее и не отличались по этому признаку от контрольных клеток. Медленно растущие клоны характеризовались большим количеством полиплоидных клеток, достигающем в одном клоне , а также высокой частотой аберраций хромосомного и хроматидного типов. Оставшиеся более многочисленные клоны с нормальной скоростью роста лишь в 6 случаях имели слегка повышенную частоту аберраций. Таким образом, только в клонов с генными мутациями были выявлены признаки хромосомной нестабильности. Дальнейший анализ данных литературы о спектре наблюдаемых хромосомных и генных мутаций позволяет отметить преобладание одноударных событий, лежащих в основе генетических изменений в отдаленные сроки после радиационного воздействия. Так, в отношении хромосомных мутаций большинство авторов отмечают преобладание ацентрических хромосомных фрагментов , , , Воробцова с соавт. По данным . Однако результаты этого исследования можно считать скорее исключением на фоне других работ. Таким образом, в тех ситуациях, когда удается зарегистрировать радиационноиндуцированную нестабильность хромосом, количество специфических маркеров радиационного воздействия дицентриков в большинстве случае не увеличено а преобладают, повидимому, менее характерные для прямого радиационного воздействия аберрации. В отношении спектров молекулярных изменений, наблюдаемых в отдельных генных локусах, также показано, что они существенно различаются в близкие и отдаленные сроки после облучения а. В работе i, установлено, что мутаций, выявляемых в локусе сразу после действия радиации, представлены достаточно большими делениями, тогда как среди отсроченных мутаций составляют точковые изменения, как и при спонтанном мутагенезе.