Последствия воздействий ионизирующих излучений: цитогенетические изменения в лимфоцитах крови человека

• Автор: Снигирева, Галина Петровна
• Шифр специальности: 03.00.01
• Научная степень: Докторская
• Год защиты: 2009
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 284 с. : ил.

1.1. Цитогенетические изменения в лимфоцитах крови человека при радиационном воздействии и их применение для оценки последствий облучения.
1.2. Классический цитогенетический метод анализ нестабильных хромосомных аберраций в лимфоцитах крови

1.3. I метод анализ стабильных хромосомных аберраций

в лимфоцитах крови

I ЛАВА 2. ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. Характеристика групп обследования.

2.2. Методы исследования.

2.2.1. Методика проведения цитогенетического анализа

2.2.2. Статистическая обработка результатов исследования

ГЛАВА 3. СПОНТАНЫЙ УРОВЕНЬ ХРОМОСОМНЫХ ПОВРЕЖДЕНИЙ В ЛИМФОЦИТАХ КРОВИ ЧЕЛОВЕКА.

3.1. Нестабильные хромосомные аберрации

3.2. Стабильные хромосомные аберрации
ГЛАВА 4. ЦИТОГЕНЕТИЧЕСКИЕ ПОВРЕЖДЕНИЯ В ЛИМФОЦИТАХ
КРОВИ ЛИЦ, ПОДВЕРГШИХСЯ РАДИАЦИОННОМУ ВОЗДЕЙСТВИЮ ПРИ РАЗЛИЧНЫХ СИТУАЦИЯХ.
4.1. Профессиональное облучение
4.1.1. Космонавты, принимавшие участие в полетах на станции Мир и МКС.
4.1.2. Профессионалы ВНИИЭФ г. Сарова.
4.2. Население, подвергшееся радиационному воздействию в результате аварийных и чрезвычайных ситуаций и проживающее на территориях, загрязненных радионуклидами.
4.2.1. Жители Алтайского края и Казахстана, подвергшиеся облучению в результате ядерных взрывов на Семипалатинском полигоне
4.2.1.1. Жители Алтайского края.
4.2.1.2. Жители Казахстана.
4.2.2. Жители с. Муслюмово, расположенного на берегах реки Теча
в Челябинской области.
4.2.3. Жители Брянской области, проживающие на территории, загрязненной радионуклидами в результате аварии
на Чернобыльской АЭС
4.2.4. Население, проживающее в окрестностях атомной электростанции Три Майл Айленд США.
4.3. Цитогенетическое обследование участников ликвидации последствий
аварии на Чернобыльской АЭС.
ГЛАВА 5. ПРИМЕНЕНИЕ ЦИТОГЕНЕТИЧЕСКИХ ПОКАЗАТЕЛЕЙ КРОВИ ДЛЯ БИОЛОГИЧЕСКОЙ ИНДИКАЦИИ
И ДОЗИМЕТРИИ ИОНИЗИРУЮЩЕГО ИЗЛУЧЕНИЯ.
5.1. Анализ зависимостей дозаэффект при воздействии гамма и бегаизлучения и построение калибровочных кривых для частоты
дицентриков и транслокаций
5.1.1. Анализ зависимости дозаэффект и построение калибровочных кривых для частоты дицентриков и транслокаций при воздействии гамма излучения
5.1.1.1. Дозовые зависимости для частоты нестабильных хромосомных аберраций
5.1.1.2. Оценка уровня облучения по частоте дицентриков в лимфоцитах периферической крови
5.1.1.3. Дозовые зависимости стабильных хромосомных аберраций
и оценка уровня облучения по частоте транслокаций в лимфоцитах периферической крови.
5.1.1.4. Дозовая зависимость для частоты дицентриков,
полученная с помощью I метода.
5.1.2. Зависимость дозаэффект и построение калибровочных кривых для частоты дицентриков при радиационном воздействии бетаизлучением оксида трития.
5.2. Относительная биологическая эффективность излучений
разною качества
5.2.1 .Оценка относительной биологической эффективности
бетаизлучения оксида трития i vi.
5.2.2. Оценка относительной биологической эффективности бетаизлучения оксида трития и космического
излучения i viv.
5.3. Реконструкция доз ионизирующего излучения по частоте хромосомных аберраций в лимфоцитах периферической
крови биологическая дозиметрия.
5.3.1. Биологическая оценка доз ионизирующего излучения
у космонавтов.
5.3.2. Биологическая оценка доз у профессионалов г. Сарова
5.3.3. Биологическая оценка доз у участников ликвидации последствий аварии на Чернобыльской АЭС.
5.3.4. Биологическая оценка доз у населения, проживающего на территориях, загрязненных радионуклидами вследствие радиационных аварий
ГЛАВА 6. ПРИМЕНЕНИЕ ЦИТОГЕНЕТИЧЕСКИХ ПОКАЗАТЕЛЕЙ
КРОВИ ДЛЯ ПРОГНОЗА ПОСЛЕДСТВИЙ ОБЛУЧЕНИЯ
6.1. Анализ взаимосвязи цитогенетических повреждений и заболеваемости в группе профессионалов г. Сарова
6.2. Анализ взаимосвязи цитогенетических повреждений и заболеваемости в группе участников ликвидации последствий аварии
на Чернобыльской АЭС
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
СПИСОК ЛИТЕРАТРЫ
ВВЕДЕНИЕ


Цитогенетическое обследование включало анализ нестабильных хромосомных аберраций с применением классического цитогенетического метода и стабильных хромосомных аберраций с применением метода флуоресцентной гибридизации i i с ДНК зондами I метод. С помощью классического цитогенетического метода обследовано человека, I методом 1человек. Исследования, представленные в настоящей работе, выполнены на культуре лимфоцитов периферической крови. Для постановки культуры клеток использовали цельную кровь или плазму, обогащенную лейкоцитами, которую получали при центрифугировании крови обмин в течение мин. Г руппы Число обследованных лиц Возраст, лет Период обследования, гг. Сотрудники РФЯЦВИИИЭФ г. Ликвидаторы аварии на ЧАЭС гг. Жители Брянской обл. Жители Павлодарской обл. Жители с. Муслюмово Челябинской обл. Жители г. Жители с. МоогсЬеа е1 а. ВаисЫпег е а1. Культуральная среда ИРМ содержала эмбриональной телячьей сыворотки, 2,5 фитогемагглютинина, мМ 5бромдезоксиуридина и антибиотики. Инкубацию клеточ
ной культуры проводили при С в течение часов. Для блокирования митоза на стадии метафазы за 3 часа до окончания культивирования во флаконы с культурой клеток добавляли раствор колцемида в конечной концентрации 0,1 0,2 мкгмл. По окончанию культивирования содержимое флаконов тщательно перемешивали, переливали в мл центрифужные пробирки и центрифугировали при обмин в течение мин для осаждения клеток. Далее при помощи водоструйного насоса отбирали супернатант, клеточный осадок ресуспендировали в 8 мл гипотонического раствора 0, раствор хлористого калия, предварительно на
гретого до С, и оставляли на мин в термостате при 1 С. Затем пробирки с культурой клеток центрифугировали при обмин в течение мин и удаляли супернатант. Для фиксации клеток к осадку добавляли холодный свежеприготовленный фиксатор смесь метилового спирта с ледяной уксусной кислотой в объемном соотношении и тщательно перемешивали. Далее клетки осаждали центрифугированием при обмин в течение мин, отбирали супернатант и добавляли к осадку 5 7 мл свежего фиксатора. Последнюю процедуру повторяли 3 раза, при этом полная продолжительность фиксации клеток составляла не менее мин. Для получения препаратов метафазпых хромосом клетки ресуспендировали в фиксаторе с помощью пастеровской пипетки, наносили 3 капли клеточной суспензии на охлажденное влажное предметное стекло и высушивали
на термоплатс при 1 С. Препараты метафазных хромосом, предназначенные для анализа нестабильных хромосомных аберраций, окрашивали с использованием технологии флюоресценция плюс краситель Гимза метод, позволяющей учитывать хромосомные аберрации в лимфоцитах, находящихся на стадии первого после их стимуляции к делению в культуре митотического цикла . Для этого стекла с нанесенной суспензией клеток помещали в ванночку с раствором красителя 8 в конечная концентрация 0, мкгмл и оставляли на термоплате С под ультрафиолетовой лампой 5 нм на мин. Затем стекла промывали дистиллированной водой и окрашивали 5 раствором красителя Гимза в буфере в течение 5 мин. Цитогенетический анализ проводили на световом микроскопе при увеличении x под масляной иммерсией, причем анализировали только метафазы I митоза, хромосомы которых равномерно окрашены метафазы П митоза имеют арлекинную окраску и имеют в сумме центромер. При микросколировании учитывали все типы хромосомных аберраций, распознаваемые без кариотипирования. В зависимости от целей конкретного исследования для каждого обследуемого пациента или на точку при проведении экспериментального исследования анализировали от 0 до метафаз. Анализ стабильных хромосомных аберраций проводили с помощью метода окрашивания, основанного на молекулярной гибридизации ДНК зонда с ДНК метафазных хромосом, фиксированных на предметном стекле i i, с последующим использованием флуоресцентной микроскопии для детекции результатов гибридизации 1 метод. Для анализа использовали коктейль проб меченные биотином ДНКпробы для 1, 4 и хромосом в комбинации с меченной дигоксигенином панцентромерной пробой. Часть препаратов обрабатывали с помощью коммерческих наборов фирмы , которые включают ДНК зонды, меченные прямыми флюорохромами x или I и специфичные к 1, 4 и хромосомам человека.