Частота мутантных по локусу Т-клеточного рецептора лимфоцитов у облученных лиц

• Автор: Смирнова, Светлана Гурьевна
• Шифр специальности: 03.00.01
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2002
• Место защиты: Обнинск
• Количество страниц: 110 с. : ил

Оглавление
Введение.

Глава 1. Обзор литературы

1.1. Генетические изменения в клетках периферической крови

после облучения

1.1.1. Генетические изменения, обусловленные прямым действием

радиации.

1.1.2. Отдаленные генетические эффекты действия облучения.

1.2. Методы определения хромосомных аберраций в клетках

периферической крови.

1.2.1. Анализ частоты нестабильных хромосомных аберраций

1.2.2. Анализ частоты стабильных хромосомных аберраций
1.2.3. Микроядерный тест
1.3. Методы определения генных мутаций в эритроцитах
периферической крови.
1.3.1 Определение частоты эритроцитов, мутантных по гену
гликофорина А
1.3.2. Определение частоты эритроцитов, мутантных по гену
гемоглобина
1.4. Методы определения генных мутаций в лимфоцитах
периферической крови.
1.4.1. Определение частоты лимфоцитов, мутантных по локусу
гипоксантингуанин фосфорибозил трансферазы
1.4.2. Определение частоты лимфоцитов, мутантных по гену
главного комплекса гистосовместимости
1.4.3. Определение частоты лимфоцитов, мутантных по генам Т
клеточного рецептора.
1.4.3.1. Строение ТСКСОЗ комплекса.
1.4.3.2. Селекция Т клеток в тимусе
1.4.3.3. Метод определения мутантных по генам Т клеточного рецептора лимфоцитов
1.4.3.4. Частота мутантных клеток у контрольных доноров.
1.4.3.5. Частота мутантных клеток у лиц, имевших контакт с ионизирующим излучением.
1.4.3.6. Изменение частоты мутантных клеток со временем после облучения.
1.4.3.7. Частота ТСЯ мутантных клеток при наследственной нестабильности генома.
Глава 2. Материалы и методы
2.1. Обследованные лица
2.2. Выделение мононуклеарной фракции лимфоцитов
2.3. Иммуннофлуоресцентное окрашивание.
2.4. Проточноцитометрический анализ
2.5. Влияние хранения образцов крови.
2.6. Статистическая обработка результатов
Глава 3. Результаты исследования
3.1. Оценка воспроизводимости метода и возможности хранения образцов крови
3.2. Частота лимфоцитов, мутантных по ТСЯ генам, в группе контрольных доноров.
3.3. Частота мутантных клеток у лиц, получивших острое облучение за и более лет до анализа
3.4. Частота мутантных клеток у лиц, получивших острое облучение в результате аварии на ЧАЭС 9 лет до анализа
3.5. Частота мутантных клеток в близкие сроки после длительного фракционированного облучения
3.6. Частота мутантных клеток у лиц, получивших
пролонгированное облучение в дозах до 0, Гр, через 9 лет после облучения
3.7. Частота мутантных клеток у работников радиационно
химических предприятий, являющихся носителями Ри
Глава 4. Обсуждение результатов
4.1. Частота мутантных клеток в группе контрольных
доноров
4.2. Использование ТС теста в отдаленные сроки после
острого облучения
4.3. Возможность проведения биологической дозиметрии с
помощью ТСЯ теста в близкие сроки после облучения
4.4. Возможности использования ТС теста в отдаленные
сроки после пролонгированного облучения в малых дозах
4.5. Перспективность использования ТС теста для индикации
хронического внутреннего облучения.
Заключение.
Выводы.
Список литературы


Несмотря на успешное во многих случаях использование цитогенетических методов, актуальной остается разработка новых методов биологической дозиметрии, более чувствительных и пригодных для проведения массовых обследований. Одним из возможных подходов является разработка и оценка информативности методов определения частоты клеток, несущих генные мутации в различных локусах. В отдаленные сроки после облучения на состояние генома соматических клеток могут влиять различные факторы, как уменьшающие, так и увеличивающие поврежденность генетического материала. В частности, с одной стороны, хорошо известно, что со временем после облучения происходит элиминация части соматических клеток с мутациями . i . В первую очередь погибают клетки с грубыми нарушениями, влияющими на их жизнеспособность. Затем происходит элиминация мутантных клеток с ограниченной продолжительностью жизни вследствие естественного обновления популяций дифференцированных клеток. С другой стороны, установлено, что действие радиации не ограничивается теми изменениями в геноме клеток, которые могут быть выявлены непосредственно после облучения i, Бурлакова, Мазурик, Михайлов, . В экспериментах с животными и культивируемыми i vi клетками млекопитающих показано, что в отдаленные сроки после облучения у части потомков облученных клеток может возникать нестабильность генома. Однако в отношении нестабильности генома соматических клеток человека в отдаленные сроки после облучения данные единичны и носят предположительный характер. Проблема оценки отдаленных генетических последствий действия радиации на соматические клетки человека является малоисследованной, хотя представляет несомненный интерес с теоретической и практической точек зрения, особенно в области малых доз. В частности, такая оценка может играть важную роль для прогноза канцерогенных эффектов облучения. Для изучения этой проблемы могут быть использованы методы, позволяющие определять частоту клеток с хромосомными и генными мутациями, динамику частоты таких клеток и спектр мутаций. Можно полагать, что информативность этих методов для изучения поврежденности генома соматических клеток человека i viv и факторов, определяющих эту поврежденность, будет зависеть от ряда обстоятельств, в том числе и от возможности раздельного анализа мутаций, возникших вследствие прямого действия радиации и возможной радиационноиндуцированной нестабильности генома. При отсутствии указанной возможности важное значение приобретает скорость элиминации клеток с мутациями, индуцированными прямым действием радиации. Существенно также, чтобы метод позволял обследовать большие контингенты людей. С этой точки зрения, среди методов оценки генных мутаций достаточно перспективным является тест, позволяющий определять частоту мутантных по генам Т клеточного рецептора лимфоцитов периферической крови ii . Он быстр в исполнении, характеризуется высокой чувствительностью и хорошей воспроизводимостью. Данные литературы об изменении частоты мутантных клеток после лучевой терапии онкологических больных позволяют полагать, что время жизни клеток с мутациями, индуцированными прямым действием радиации, весьма ограничено. Это обусловливает необходимость изучения частоты мутантных клеток у лиц, подвергшихся тотальному облучению, в близкие сроки после воздействия, а также позволяет предположить, что метод может быть полезен для исследования отдаленных мутагенных эффектов облучения соматических клеток, в том числе возникающих v мутаций вследствие возможной нестабильности генома. Данный метод пока редко используется для обследования лиц, подвергшихся радиационному воздействию. Судя по имеющимся публикациям, интенсивные исследования в этом направлении проводились только в 23х лабораториях в мире ii . Аклеев с соавт. . мутантных клеток у облученных лиц представляют несомненный интерес. ТСЯ мутантных клеток у лиц, являющихся носителями 9Ри провести сопоставление этого показателя с имеющимися расчетными величинами доз.