Цитогенетическое исследование культур лимфоцитов периферической крови людей в отдаленные сроки после острого внешнего облучения

• Автор: Дудочкина, Наталья Евгеньевна
• Шифр специальности: 03.00.01
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2009
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 196 с.

СОДЕРЖАНИЕ

1. ВВЕДЕНИЕ.

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

2.1. Цитогенетический анализ культур лимфоцитов периферической

крови как метод биологической индикации дозы

2.2. Элиминация радиационноиндуцированных нестабильных хромосомных аберраций в лимфоцитах периферической крови с течением времени после облучения и возможности их

использования для ретроспективной оценки дозы.

2.3. Методы учта стабильных перестроек хромосом и их применение при реконструкции поглощенных доз у пострадавших после воздействия ионизирующих излучений.

3. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

3.1. Характеристика обследованных групп.

3.2. Методики культивирования лимфоцитов периферической крови

и приготовления препаратов хромосом классическим методом.
3.3. Статистическая обработка результатов.
3.4. Компьютерный метод ретроспективной оценки дозы
4. РЕЗУЛЬТАТЫ
4.1. Изучение элиминации аберраций хромосом у лиц,
пострадавших при аварии на Чернобыльской АЭС
4.2. Ретроспективная оценка дозы радиационного воздействия с помошыо компьютерного метода у лиц, пострадавших
при аварии на Чернобыльской АЭС.
4.3. Изучение элиминации аберраций хромосом у лиц, пострадавших при различных радиационных инцидентах,
за исключением аварии на Чернобыльской АЭС
4.4. Сравнение частот хроматидпых аберраций с показателями периферической крови у пациентов
в отдалнные сроки после облучения
5. ОБСУЖДЕНИЕ
5.1. Изменение уровней аберраций хромосом с течением времени после облучения у лиц, пострадавших при аварии на Чернобыльской АЭС.
5.2. Частоты хроматидных аберраций в отдаленные сроки после облу
чения улиц, пострадавших при различных радиационных ситуациях.
5.3. Ретроспективная оценка дозы с помощью компьютерного
метода у лиц, пострадавших при различных радиационных авариях.
6. ВЫВОДЫ
7. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ.
ВВЕДЕНИЕ
Актуальность


Использование той или иной конкретной цитогенетической методики определяется поставленной задачей, условиями облучения и величиной интервала времени между моментом нанесения повреждения и осуществлением дозиметрического исследования. Классический метафазиый цитогенетический анализ стимулированных фитогемагглютинином ФГА лимфоцитов периферической крови с получением гомогенно окрашенных хромосом остается наиболее разработанным из методов биологической индикации дозы и оценки генотоксического воздействия в ближайшие сроки после острого облучения. ФГА, претерпевать бласттрансформацию с последующим вступлением в митоз, что дает возможность визуализировать хромосомы под световым микроскопом. В настоящее время метафазный метод анализа хромосомных аберраций для оценки дозы облучения при различных радиационных авариях показал свою надежность и является практически единственным международным апробированным методом биологической индикации дозы в случаях острого неконтролируемого облучения человека 9, , , , , , , , 1, 4. Изучение частоты возникновения аберраций хромосом в культурах лимфоцитов периферической крови при остром облучении организма проводилось на различных группах лиц, подвергшихся облучению. Хиросимы и Нагасаки 8, 9, 6,4, 8, при аварийных облучениях 3, 1, 5, в том числе при аварии на Чернобыльской АЭС , , , ,7. Источники и дозы облучения были разными, также как и время, прошедшее от момента облучения до момента исследования. Тем не менее, в этих наблюдениях выявлялось значительное увеличение одних и тех же, повторяющихся при различных радиационных воздействиях, типов структурных нарушений хромосом. Их классификация достаточно устоялась и описана в ряде работ и руководств , , , 7, 8. Аберрации хромосом, как класс изменений нормального наследственного материала, способны индуцировать, кроме ионизирующих излучений, и другие виды внешнего воздействия такие, как химические и биологические агенты. В связи е этим в данном разделе необходимо упомянуть о специфике воздействия разных агентов в различных стадиях клеточного цикла, что приводит к формированию аберраций двух основных типов хромосомного и хроматидного. Причисление аберраций к одному из них обусловлено вовлечнностью в перестройку обеих сестринских хроматид как следствие образования двойного разрыва ДНК в момент, когда хромосома представлена как однонитчатая структура и iфазы клеточного цикла, или только одной из них как следствие образования двойного разрыва ДИК в момент, когда хромосома представлена как двунитчатая структура и С2фазы. Основное отличие действия подавляющего большинства химических веществ от действия радиации связано с наличием необходимости прохождения через фазу синтеза ДНК фаза для формирования визуализируемых структурных повреждений хромосом, в какой бы период не было произведено само воздействие. При этом формируются аберрации хроматидного типа. Ионизирующие же излучения индуцируют повреждения хромосом во всех фазах клеточного цикла, то есть они способны птлзывать образование как аберраций хромосомного, так и хроматидного типов. Лимфоциты в крови людей в основном находятся в фазе покоя Следовательно, при радиационном воздействии i viv в них образуются аберрации хромосомного типа. В этом и заключено основное различие в генотоксическом воздействии радиации и химических веществ. Среди последних имеются и исключения радиомиметики, знание которых необходимо при проведении анализа. Например, такие весьма специфические химические вещества, как цитозинарабинозид цитозар, блеомицин, стрептоиигрин и 8метоксикофеин могут вызывать появление аберраций хромосомного типа, тогда как все остальные вызывают аберрации только хроматидного типа. Известны следующие аберрации хромосомного типа. Парные ацентрические фрагменты структуры, представляющие собой спаренные участки двух сестринских хроматид, не имеющих центромеры и располагающихся параллельно друг другу за счт сил взаимного притяжения. Ацентрические кольца структуры, представляющие собой спаренные участки двух сестринских хроматид, не имеющие центромеры и замкнутые в виде кольца. Данную аберрацию также относят к хромосомным внутриплечевым обменам.