Характеристика и локализация углевод-связывающего центра на молекуле ангиотензин-превращающего фермента

• Автор: Чемоданова, Елена Евгеньевна
• Шифр специальности: 02.00.15, 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2001
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 175 с.

1.1. Углеводуглеводные взаимодействия

1.1.1. Примеры участия углеводов в клеточной адгезии

1.1.2. Молекулярная природа углеводуглеводного взаимодействия

1.1.3. Углеводуглеводное взаимодействие с участием гликопротеинов

1.2. Белок углеводные взаимодействия

1.2.1. Молекулярные основы взаимодействий белоксахар

1.3. Структурные особенности пектинов как углеводраспознающих молекул

1.3.1. Протяженные центры лектинов и поливалентное связывание

1.3.2. Молекулярная организация лектинов

1.3.3. Бифункциональные свойства лектинов

1.3.4. Лектиноподобные свойства белков и ферментов

Глава 2. АНГИОТЕНЗИНПРЕВРАЩАЮЩИЙ ФЕРМЕНТ
2.1. Локализация и функции фермента в организме
2.2. Структурные особенности различных форм фермента и мембранная организация
2.3. Иммунологические свойства ангиотензинпревращающего фермента
2.3.1. Получение панели моноклональных антител тАЬ
против АГ1Ф
2.3.2. Эпитопная специфичность панели тАЬ и антигенное картирование молекулы соматического АПФ человека
2.4. Состав и функции углеводных цепей АПФ
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ.
Глава 3. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
3.1. Материалы
3.2. Методы исследования
3.2.1. Синтез аффинного сорбента
3.2.2. Получение соматического ангиотензинпревращагощего фермента из легких быка
3.2.3. Получение соматического ангиотензинпревращающего
фермента из почек человека
3.2.4. Получение домена ангиотензиниревращающего
фермента из легких быка
3.2.5. Получение тестикулярного ангиотензинпревращающего фермента быка
3.2.6. Модификация ангиотензинпревращающего фермента
3.2.7. Получение ЕаЬфрагментов антител
3.2.8. Кинетические измерения в водных условиях
3.2.9. Кинетические измерения в обращенных мицеллах
тройной системы АОТводаоктан
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
Глава 4. ФУНКЦИОНИРОВАНИЕ АНГИОТЕНЗИНПРЕВРАЩАЮЩЕГО ФЕРМЕНТА В ТРОЙНОЙ СИСТЕМЕ АОТВОДАОКТАН
4.1. Стабильность растворимой и мембранной форм соматического
и мемранного фермента человека в системе обращенных мицелл
4.2. Зависимость каталитической активности фермента
от концентрации ПАВ
4.3. Образование олигомерных структур АПФ в системе
обращенных мицелл
Глава 5. ВЛИЯНИЕ УГЛЕВОДОВ НА ОБРАЗОВАНИЕ ДИМЕРОВ
АПФ ЧЕЛОВЕКА И БЫКА В СИСТЕМЕ АОТВОДАОКТАН
5.1. Специфичность влияния моносахаридов на
димеризацию АПФ
5.2. Специфичность влияния олигосахаридов
на димеризацию АПФ
5.3. Специфичность влияния олигосахаридных цепей
на димеризацию АПФ
5.4. Влияние углеводов на димеризацию асиало и
агалактоАПФ
5.6. Установление структурных особенностей углевод
связывающего центра АПФ человека
Глава 6. ЛОКАЛИЗАЦИЯ УГЛЕВОДСВЯЗЫВАЮЩЕГО ЦЕНТРА НА МОЛЕКУЛЕ АНГИОТЕНЗИНПРЕВРАЩАЮЩЕГО ФЕРМЕНТА
6.1. Функционирование тестикулярного АПФ в обращенных
мицеллах тройной системы АОТводаоктан
6.2. Функционирование Ыдомена соматического АПФ в
обращенных мицеллах тройной системы АОТводаоктан
6.3. Влияние моноклональных антител тАЬ на димеризацию
АПФ человека в тройной системе АОТводаоктан
6.3.1. Определение времени установления равновесия в тройной
системе АОТводаоктан
6.3.2. Влияние комплексообразования АПФ человека с моноклональными антителами на зависимость каталитической активности фермента от степени гидратации
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.
АПФ ангиотензинлревращающий фермент
УСД углеводсвязывающий домен
Кон А конканавалин А
3 ганглиозид,
3 ганглиотриаозилиерамнд 4 1 Сег
ЭДТА этилендиаминтетрауксусная кислота
лактозилцерамид 1 4
x пентасахарид 1 4 1 3 1 3 1
пентасахарид 1 2 1 4 1 3 1
галактозилцерамид 1 1
сульфат цреброзида
фурилакрилоилЬфенилаланилЬглицилглицил Лизиноприл 1 карбокси3фенилпропилЬлизилЬпролин
М2гидроксиэтилниперазинМ2этансульфокислота
i трисгидроксиметиламинометан
2Ыморфоли1юэтансульфокислота
ФМСФ фенилметилсульфонилфторид
додеци л сульфат натрия
ПАВ поверхностноактивное вещество
аэрозоль ОТ, ЛОТ натриевая соль ди2этилгексилового эфира сульфоянтарной кислоты
0 степень гидратации, молярное отношение НА0Т тАЬ моноклональные антитела.
ВВЕДЕНИЕ


Кальцийнезависимое взаимодействие основано на образовании водородных связей и вандервальсовых контактов между взаимодействующими углеводными компонентами. При благоприятном пространственном положении партнеров действует положительный кооперативный эффект, и, как результат, связывание заметно усиливается. В работе показано взаимодействие x пентасахарида i3i4 с различными катионами, определены константы связывания с кальцием в диметилсульфоксиде 9. М и в метаноле . М . Найдены две области взаимодействия с катионами первая более специфичная около фукозы, вторая менее специфичная ближе к лактозной части. Углеводуглеводные взаимодействия стабилизируются не только за счет водородных, координационных связей и вандерваальвовых контактов, но и за счет гидрофобных взаимодействий. В работе показано, что образование димеров xx термодинамически стабилизируется посредством гидрофобных контактов между пиранозными кольцами и сопровождается реорганизацией сольватационной оболочки. Контакты двух трисахаридов i стабилизируются комплементарностью гидрофобных поверхностей двух молекул таким образом, что конформация x трисахарида позволяет антипараллельную димеризацию с гидрофобными контактами между галактозой и ацетилнейраминовой кислотой, при этом вытесняется связанная вода, что приводит к энергетическому за счет энтропийного фактора выигрышу . Структура комплекса позволяет присоединять один или два иона кальция, это делает первоначальный комплекс более устойчивым. В работе была также рассчитана эффективная константа связывания между двумя xx исходя из предположения, что комплекс главным образом находится в
Рис. Схематическое изображение стабилизирующих сил между углеводными цепями в гликанах морской губки . Ка оценено как М1. Следует заметить, что в работах не приводятся абсолютные величины констант связывания, принимая во внимание обязательную мультивалентность связывания так как обычно взаимодействуют поверхности, а не молекулы. На рисунке 1 представлено взаимодействие двух углеводных цепей в гликанах морской губки . Показана стабилизация комплекса за счет
водородных связей, гидрофобных, ионных взаимодействий с участием Са . При изучении углеводуглеводного взаимодействия галактоцерамидсодержащих липосом с галактозилцерамидсульфатсодержащими липосомами показано, что не только плотность олигосахарида, но и увеличение длины цепи жирных кислот и I идроксилирование жирных кислот увеличивает агрегацию за счет усиления гидрофобных взаимодействий. В работе изучены силы притяжения между гликосфинголипидсодержащими бислойными мембранами. Силы взаимодействия между мембранами рассчитаны как функции плотностей гликолипидиых поверхностей. Полученные результаты авторы приписывают вандерВаальсовым силам. Углеводуглеводное взаимодействие с участием гликопротеинов. Углеводуглеводное связывание может играть существенную роль во взаимодействии гликопротеинов с образованием различных комплексов и олигомерных структур. Очевидно, что на гликопротеине практически невозможно найти благоприятные условия для кооперативное взаимодействия, как это имеет место для плотно расположенных гликолипидов на мембране. На гликопротеине, даже при муциновом типе гликозилирования когда олигосахариды присоединены к нескольким соседним остаткам серина или треонина, олигосахариды если и не отделены один от другого значительными расстояниями, то расположены под углом друг к другу, что не способствует мультивалентному узнаванию другого гликопротеина или ансамбля гликолипидов. Это объясняет незначительность числа найденных примеров углеводугле водного взаимодействия с участием гликопротеинов . Тем не менее примеры доказанных углеводуглеводных взаимодействий с участием гликопротеинов найдены это взаимодействие гликофорина с гликолипидами , взаимодействие двух гликопротеинов ламинина и гликопротеин клеточной линии мышиной меланомы друг с другом , взаимодействие эмбриогликана из клеток 9 мультивалентный гликопротеин, носитель эпитопов x клеточной линии 9 с другими x содержащими гликоконьюгатами , взаимодействие гликопротеина асиалофетуина и маннозосвязывающего лектина .