Синтез пептидомиметиков - ингибиторов сериновых протеиназ

• Автор: Сергеев, Максим Евгеньевич
• Шифр специальности: 02.00.10
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2010
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 120 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

I. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР

I.1 Ингибиторы протеиназ системы гемоста т.

1.1.1. Тромбин и плазм и н ключевые ферменты системы гемостаза

1.1.2. Природные ингибиторы ферментов системы гемостаза

1.1.3 Бифункциональные синтетические ингибиторы тромбина.

1.1.4 Сайтнаправленные синтетические ингибиторы тромбина

1.1.5 Ингибиторы плазмина

1.1.5.1 Природные ингибиторы плазмина

1.1.5.2 Синтетические ингибиторы плазмина
1.1.6. Ингибиторы других протеиназ системы гемостаза.
II. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ.
II.1. Синтез Ыацилааминоальдегидов
П.2. Синтез циклических амидов аминокислот.
.3. Синтез вторичных амидов пептидов.
.4. Синтез нуклеопептидов
.5. Фармакологические исследования.
III. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ.
III. 1. Материалы и методы.
1.2. Синтез ааминоальдегидов
1.2.1. Общая процедура на примере синтеза ВосЛ8рВиа1.
3.2.1.1. ВосАзрВиОН
1.2.1.2. ВосА8р0ВиОЫБи
1.2.1.3. ВосАзрВио1
П1.2.1.4.
III2.1.5 Синтез пептидилааминоальдегидов, производных V, ,
III.3. Синтез циклических амидов аминокислот
1.3.1. Общая процедура на примере синтеза i2
1.3.1.1. Синтез 2.
Ш.3.1.2. Синтез 2i
III.3.1.3. Синтез i2I.
1.3.1.4 Синтез защищенных и свободных циклических амидов аминокислот
II 1.4. Ферментативный синтез амида пептида Ii
Ш.4.1 Приготовление катализатора субтилизина, сорбированного на силохроме С.
1.4.2 Синтез амида Ii.
1.5. Синтез вторичных амидов пептидов.
1.5.1. Общая процедура на примере синтеза имидазол1иламида бензилоксикарбонилЬаланилСаланилС0мстилглутаминовой кислоты .
1.5.2. Синтез вторичных амидов пептидов.
1.6. Синтез нуклеопепгидов
1.6.1. Общая процедура i примере синтеза 302,4динитрофенилСаланилСаланилЬлейцил2дезокситимидина
1.6.2 Синтез нуклеопеп гидов, производных , и .
1.7. Методы фармакологических исследований
II 1.7.1. Методика определения активности сериновых протеиназ.
1.7.2. Методика ингибирования субтилизина.
II 1.7.3. Методика ингибирования плазмина.
1.7.4. Методика определения времени эуглобулинового фактор Хазависимого лизиса
1.7.5. Методика определения времени остановки кровотечения i viv.
II 1.7.6. Методика определения объема кровопотсри i viv
ВЫВОДЫ.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Как и большинство ферментов системы гемостаза, тромбин это мультикаталитическая сериновая протеиназа, состоящая из двух полипептидных цепей 2. Тромбин гидролизует четыре связи в фибриногене 3, при этом из молекулы фибриногена удаляются два фрагмента отрицательно заряженные фибринопептиды, и образуется фибринмономер. Длинные нерастворимые молекулы фибринмономера спонтанно ассоциируются в регулярные зигзагообразные структуры с образованием нерастворимого полимерного фибринового сгустка. Он захватывает тромбоциты, эритроциты и другие компоненты крови, в результате чего образуется тромбоцитная пробка тромб. Кроме превращения фибриногена в фибрин, функция тромбина заключается в переводе множественных факторов коагуляции например V, VIII и фактора стабилизации XIII, стабилизирующего фибрин, в активную форму V, Vi, XI, а также в инициации антикоагулянтных путей через активацию протеина С 4, 5. Так как тромбин участвует в таких различных биорегуляторных процессах, ингибирование его активного центра должно быть высокоэффективным при лечении различных заболеваний. При этом важно, чтобы используемые ингибиторы были в достаточной степени специфичными, так как сайтнаправленные ингибиторы могут взаимодействовать и с другими компонентами крови. Плазмин также является сериновой протеиназой, катализирующей расщепление фибрина, в результате чего происходит разрушение тромбов. В фибрине плазмин гидролизует пептидные связи, образованные остатками лизина и аргинина Субстратами плазмина являются также фибриноген, факторы свертывания крови V, VIII и XII, гликопротеины мембран тромбоцитов, компоненты С1, СЗ и С5 системы комплемента и другие. В плазме крови плазмин находится в виде предшественника профермента плазм иногена, который существует в двух формах, различающихся содержанием углеводного компонента 8. Одна форма содержит гликозилированные остатки Азп8 и ТЪг5, другая только гликозилированный ТЬг5. Плазмин представляет собой одну поли пептидную цепь, состоящую у человека из 0 аминокислотных остатков полностью расшифрованы первичная структура плазмина и его гена. Третичная структура плазминогена представлена семью доменами пять из нихгомологичные креиделеобразные структуры, массой около кДа. Подобные структуры обнаружены также у протромбина, тканевого активатора плазминогена, урокиназы и фактора XII свертывания крови. Два домена сформированы участком полипептидной цепи, соответствующим легкой цени плазмина. Эти участки определяют сродство плазминогена и плазмина к фибрину, на поверхности которого происходит превращение плазминогена в плазмин. Оно сопровождается расщеплением одной пептидной связи между аргинином и валином в положениях 0 и 1, соответственно. При этом образуется двухцепочечная структура плазмина. Тяжелая цепь плазмина содержит все пять кренделеобразных доменов плазминогена. Нативный плазмин с остатком глутаминовой кислоты на Ыкопце С1иплазмин способен автокаталитически, в результате гидролиза пептидной связи между двумя аминокислотными остатками лизина в положениях и отщепления Ыконцевого пептида с массой 9 кДа, превращаться в Ьуяплазмин, обладающий более высоким сродством к фибрину. Обе формы плазмина способны расщеплять эту связь в проферменте с образованием Ьуяплазминогена. Последний превращается в Ьуяплазмин в результате действия ферментов тканевого активатора плазминогена, урокиназы, комплекса плазминогена со стрсптокиназой. Активация плазминогена ускоряется в раз в присутствии фибрина, на поверхности которого происходит концентрирование профермента и его активаторов. Связывание с фибрином защищает плазмин от инактивации ингибитором а2антиплазмином плазмы крови, так как во взаимодействии с ним участвуют те же фрагменты структуры фермента, которые участвую при связывании с фибрином 9. Так как тромбин и плазмин осуществляют противоположные функции в системе гемостаза, целенаправленное воздействие на один из этих ферментов играет важную роль в лечении как тромбозов, так и геморрагий. Система свертывания крови в нормальном состоянии находится в динамическом равновесии, при котором фибриновые сгустки постоянно образуются, а затем растворяются.