Клонирование различий между геномами

• Автор: Лисицын, Николай Александрович
• Шифр специальности: 02.00.10
• Научная степень: Докторская
• Год защиты: 2000
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 54 с. : ил.; 20х14 см

Обнаружить районы гомозиготных делеций в опухолевой ДНК, картировать и клонировать делегируемые участки и идентифицировать закодированные в тсс гены. С помощью мутационного анализа геновкандидатов осуществить поиск генов супрессирующих развитие опухолей. В. Научная новизна и практическая значимость работы. В данной работе был разработан первый в мировой практике универсальный метод клонирования различий между геномами высших организмов дифференциальный анализ выборок, ДАВ, или i i i, , в английской транскрипции, открывающий возможность картирования и прямой идентификации наследуемых и соматических изменений в последовательности ДИК. Была показана эффективность разработанного метода для решения целого ряда генетических задач 1 обнаружения новых патогенов 2 генетически направленного клонирования полиморфных ДНК маркеров сцепленных с моногенным признаком 3 клонирования соматических изменений в ДНК опухолевых клеток делегируемых и аплифицируемых последовательностей. Дальнейшие исследования по генетике рака привели к идентификации гена I, инактивируемого в агрессивных опухолях различной природы. Разработанный метод был успешно использован во многих лабораториях США и Европы. Анализ генетических изменений в опухолевых ДНК позволил картировать и клонировать четыре гена супрессирующих развитие опухолей ген 2, наследуемые мутащш в котором приводят к предрасположенности к возникновению опухолей молочной железы, и гены , I и 1, супрессирующие возникновение широкого круга спорадических опухолей различной природы. Была показана эффективность разработанного метода для обнаружения амплифицнрованных районов генома раковых клеток, содержащих доминантные онкогены, и выявления метилированных участков ДНК. Дифференциальный анализ выборок был успешно применн для поиска и характеризации патогенных микроорганизмов. Калоши вируса герпеса ННУ8 и двух вирусов гепатита флавивируса ЬЮУНСВУС и ДНК вируса ТТУ. Аналогичный подход позволил обнаружить возможность участия вируса герпеса ННУ6 в этиологии рассеянного склероза. Метод оказался эффективным для сравнительного анализа геномов близкородственных штаммов возбудителей холеры, гонореи и шистосоматоза, обладающих различной вирулентностью. Научная и практическая ценность метода была также успешно продемонстрирована и в работах по генетическому анализу модельных организмов дифференциальный анализ выборок позволил значительно ускорить построение детальных генетических карт различных участков генома крыс, мышей, рогатого скота и растений. В некоторых случаях дальнейшие работы, основанные на использовании позиционного клонирования, привели к идентификации важных генов например гена Ри1, ответственного за развитие карликовости Эймса у мышей. Различные вариации дифференциального анализа выборок расширили арсенал методов клонирования ДНК, открыв возможность эффективного сравнения геномов соматических гибридных клеток, создания хромосомспецифических библиотек и получения представительных выборок геномной ДНК из нескольких сотен клеток путм ПЦРиммортализации. Наконец широкое распространение получила модификация метода применимая для сравнения транскрибируемых последовательностей различных типов клеток и тканей. Этот экспериментальный подход привл к идентифиции целого ряда генов индуцируемых в ответ на различные воздействия среды, а также генов специфически экспрессирующихся в различных типах клеток в процессах развития и дифференцировки. Личный вклад автора. В цикле исследований, составляющих диссертационнцю работу, автору принадлежит решающая роль в выборе направления исследований, разработке экспериментальных подходов и обобщении полученных результатов. В работах, выполненных в соавторстве, личный вклад автора заключался в непосредственном участии во всех этапах исследования от постановки задачи, проведения экспериментов до обсуждения и литературного оформления полученных результатов. Г. Апробация работы. Работа по теме диссертации была выполнена в Институте Б неорганической Химии им. М.М. Шемякина и Ю. А. Овчинникова, Колд Спринг Харбор Лаборатории США и Пенсильванском Университете США.