Получение и свойства полимерных композиций и пленочных материалов на основе поливинилового спирта, содержащих протеазу С и полигексаметиленгуанидин

• Автор: Алешина, Елена Юрьевна
• Шифр специальности: 02.00.06
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2003
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 145 с.

Содержание
Введение

1. Литературный обзор

1.1. Методы иммобилизации белковых веществ на полимерахносителях для получения эффективных терапевтических систем.
1.2. Получение и свойства полимерных покрытий, содержащих иммобилизованные антимикробные вещества или ферменты, для хирургии и терапии

1.3. Полиэлектролитные комплексы с участием белков.

2. Методический раздел.

3. Основные результаты и их обсуждение.

3.1. Исследование взаимодействия между протеолитичсским ферментом протеазой С, альгинатом натрия и антимикробным поликатионом в водных растворах.
3.2. Изучение взаимосвязи состава и свойств формовочных композиций на основе поливинилового спирта, содержащих биологически активные вещества и модифицирующие добавки.
3.3. Исследование влияния состава формовочных композиций на свойства поливинилсгшртовых пленочных материалов, содержащих совместно иммобилизованные протеазу С, антимикробный поликатион и
модифицирующие добавки.
Литература


Обычно для иммобилизации ферментов используются полимеры, имеющие функционально активные группы в случае их отсутствия осуществляется предварительная модификация, которые могут участвовать в реакциях с макромолекулами белка непосредственно или с участием посредников, например, сшивающих реагентов. Одним из наиболее часто применяемых сшивающих реагентов является глутаровый альдегид 5,9,. Так, в работе описан метод ковалентной иммобилизации уреазы с помощью глутарового альдегида на полиэфирных волокнах, модифицированных прививкой полиакриламида. Эффективность связывания фермента возрастала с увеличением количества привитого полиакриламида и достигала максимального значения при содержании привитого полимера и концентрации глутарового альдегида 0,8 М. Иммобилизация не изменяла оптимума действия фермента 7,0, но несколько расширяла интервал стабильности температурный оптимум смещался с С для нативной до С для иммобилизованной уреазы. В литературе имеются данные об иммобилизации белковых препаратов с помощью глутарового альдегида и на немодифицированном целлюлозном волокнистом материале 9,. Авторы полагают, что фиксация биологически активных веществ на немодифицированном материале осуществляется за счет образования полимера сетчатой структуры в результате сшивки макромолекул белка непосредственно на полимере носителе. Таким образом был иммобилизован террилитин и получен материал, обладающий протеолитической активностью. При увеличении концентрации белка в растворе для обработки немодифицированного целлюлозного волокнистого материала количество фиксированного на нем белка и активность иммобилизованного террилитина возрастают. Увеличение количества глутарового альдегида при постоянной концентрации белка в растворе для обработки волокнистого материала приводит к уменьшению времени иммобилизации террилитина. Увеличение температуры сушки материалов с до С практически не влияет на активность иммобилизованного террилитина, а сушка при С приводит к снижению его активности на . Показана устойчивость материалов к устерилизации и дальнейшему хранению. Полученные материалы совместимы с биосредами кровью, плазмой и могут быть использованы в аппаратах колонного типа. Для более прочного удерживания ферментов пленку, образующуюся на носителях после высыхания гелевой матрицы, обрабатывали раствором глутарового альдегида. Путем последовательной адсорбции полистиролсульфоната и гидрохлорида полиаллиламина на агрегатах высоленных белков авторами получены полиэлектролитные микрочастицы, содержащие протеиназы трипсин и химотрипсин. Сканирующая электронная микроскопия показала наличие аморфных частиц с преимущественным диаметром от 1 до мкм, соответствующим распределению по размерам высоленных агрегатов белков. Показана высокая стабильность включенных белков при хранении. Таким образом, используя биодеградируемые полиэлектролиты ПЭ, можно получать микрочастицы, содержащие лекарственный препарат, с целью применения их в качестве фармакологических средств. В решении проблемы целевой доставки ферментов авторами предложен общий подход, заключающийся в использовании универсальной транспортной системы на основе термочувствительных полимеров, имеющих нижнюю критическую температуру растворения НКТР. Эти полимеры растворимы в воде и водных растворах при температуре ниже ПКТР. Как только температура поднимается выше НКТР, раствор разделяется с образованием полимерных преципитатов. Если полимер несет иммобилизованное лекарственное вещество, то оно накапливается в зоне повышенной температуры. Использование термической активации вполне приемлемо, потому что повышенная температура, как правило, характеризует зону поражения, где, таким образом, концентрируется лекарственное вещество. Указанные полимерные системы были получены с использованием двухстадийного процесса. Цель первой стадии получение активированного полимера, способного реагировать с молекулами лекарственных веществ и обладающего НКТР в водных растворах, немного превышающей физиологическое значение С.