Совершенствование электрофоретического и хроматографического определения водо- и жирорастворимых витаминов

• Автор: Хмельницкий, Иван Константинович
• Шифр специальности: 02.00.02
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2007
• Место защиты: Санкт-Петербург
• Количество страниц: 182 с. : ил.

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРНЫХ ДАННЫХ.

1.1. Общая характеристика витаминов

1.2. Методы определения водо и жирорастворимых витаминов

1.2.1. Газохроматографическое определение витаминов

1.2.2. Использование высокоэффективной жидкостной хроматографии ВЭЖХ при определении витаминов

1.2.2.1. ВЭЖХ определение жирорастворимых витаминов

1.2.2.2. ВЭЖХ определение водорастворимых витаминов

1.2.3. Определение витаминов методом высокоэффективной тонкослойной хроматографии ВЭТСХ
1.2.3.1. Методы детектирования в высокоэффективной тонкослойной хроматографии ВЭТСХ.

1.2.3.2. Инструментальное оформление количественного анализа в ВЭТСХ

1.2.3.3. Параметры удерживания в ТСХ, эффективносъ и селективность разделения.
1.2.3.4. Мицеллярная тонкослойная хроматография МТСХ
1.2.3.3. Определение жирорастворимых витаминов методом тонкослойной хроматографии.
1.2.3.6. Определение водорастворимых витаминов методом тонкослойной хроматографии.
1.2.3.7. Электроосмотическая тонкослойная хроматография ЭОТСХ
1.2.4. Определение витаминов электрофоретическими методами
1.2.4.1. Способы концентрирования при вводе проб стэкинг, свипинг в методах капиллярного электрофореза
1.2.4.2. Эффективность, разрешение и селективность
разделения в МЭКХ.
1.2.5. Капиллярная электрохроматография
1.3. Пробоподготовка биологических объектов при хроматографическом определении витаминов
1.3.1. Пробоподготовка при определении жирорастворимых витаминов.
1.3.2. Пробоподготовка при определении водорастворимых витаминов.
ГЛАВА 2. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ОБЪЕКТОВ И МЕТОДОВ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Аппаратура.
2.2. Вспомогательные устройства и материалы.
2.3. Подготовка стандартных растворов к анализу.
2.4. Методы исследования
2.4.1. Капиллярный электрофорез с УФдетектированием
2.4.2. Высокоэффективная жидкостная хроматография с УФдетектированием
2.4.3. Электроосмотическая тонкослойная хроматография ЭОТСХ.
2.4.4. Высокоэффективная тонкослойная хроматография ВЭТСХ.
2.4.5. Проточная твердофазная микроэкстракция с последующим газохроматографическим анализом.
2.4.6. Капиллярный электрофорез и капиллярная электрохроматография на микрочипе.
2.4.6.1. Процедура изготовления полимерного микрочипа
2.4.6.2. Изготовление колонок для электрохроматографии на микрочипе.
2.4.6.З. Получение монолитных акриламидных сорбентов в
канале м нкро ч и па
ГЛАВА 3. ХРОМАТОГРАФИЧЕСКОЕ И ЭЛЕКТРОФОРЕТИЧЕСКОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ
ВОДОРАСТВОРИМЫХ ВИТАМИНОВ
ЗЛ. Определение водорастворимых витаминов методом высокоэффективной тонкослойной хроматографии ВЭТСХ
3.2. Разделение водорастворимых витаминов в режиме электроосмотнческой тонкослойной хроматографии ЭОТСХ
3.3. Определение водорастворимых витаминов методом высокоэффективной жидкостной хроматографии.
3.4. Определение водорастворимых витаминов методоми капиллярного зонного электрофореза и мицеллярной
электрокинетической хроматографии.
3.4.1. ОпГте концентрирование водорастворимых витаминов
при их электрофоретическом определении
3.5. Определение рибофлавина и его коэнзимов методом капиллярного зонного электрофореза на микрочипе с флуоресцентным детектированием
3.5.1. Сорбенты для капиллярной электрохроматографии
3.5.2. Капиллярная электрохроматография на
микрочипе
3.6. Проточная твердофазная микроэкстракция иикотинамида и никотиновой кислоты с последующим газохроматографическим
анализом
ГЛАВА 4. ХРОМАТОГРАФИЧЕСКОЕ И ЭЛЕКТРОФОРЕТИЧЕСКОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ
ЖИРОРАСТВОРИМЫХ ВИТАМИНОВ.
4.1. Определение жирорастворимых витаминов методом высокоэффективной тонкослойной хроматографии ВЭТСХ
4.2. Определение жирорастворимых витаминов методом обращеннофазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии ОФ ВЭЖХ.
4.3. Определение жирорастворимых витаминов мицеллярной электрокинетической МЭКХ и мицеллярной микроэмульсионной хроматографией МЭЭКХ
4.4. Одновременное определение водо и жирорастворимых витаминов методом ВЭЖХ
4.5. Сравнительный анализ методов ОФ ВЭЖХ, ВЭТСХ и МЭКХ
при определении водо и жирорастворимых витаминов.
ГЛАВА 5. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРИЛОЖЕНИЯ
5.1. Количественное определение водорастворимых витаминов В,
В2, Вз, Вб и С в фармацевтических препаратах методом ВЭТСХ
5.2. Количественное определение водорастворимых витаминов В
В2, В3, В6 и С в пищевых продуктах методом МЭКХ
5.3. Количественное определение жирорастворимых витаминов А,
Е, ВЗ в пищевых продуктах методом ВЭЖХ.
ВЫВОДЫ
ПРИЛОЖЕНИЕ
ПРИНЯТЫЕ СОКРАЩЕНИЯ .
Список литературы


Предложить схемы хроматографического и электрофоретического определения водо и жирорастворимых витаминов в фармацевтических препаратах, пищевых продуктах соки, пиво и биологических объектах моча методами МЭКХ, ВЭТСХ и ВЭЖХ. ЭОТСХ, капиллярный зонный электрофорез КЗЭ и капиллярная электрохроматография КЭХ, в том числе на микрочипе, а также мицеллярная МЭКХ и микроэмульсионная электрокинетическая хроматографии МЭЭКХ. Результаты исследования влияния органических растворителей метанол, ацетонитрил и поверхностноактивного вещества додецилсульфата натрия в качестве составляющих рабочего буфера и подвижной фазы на эффективность и селективность электрофоретического и хроматографического разделения водо и жирорастворимых витаминов в режимах мицеллярной электрокинетической хроматографии МЭКХ, мицеллярной высокоэффективной жидкостной хроматографии ОФ ВЭЖХ и высокоэффективной тонкослойной хроматографии ВЭТСХ. Способы электрофоретического и хроматографического определения водорастворимых витаминов в пищевых продуктах методами мицеллярной электрокинетической хроматографии и ОФ ВЭЖХ с УФдетектированием. Обоснование возможностей и преимуществ высокоэффективной тонкослойной хроматографии ВЭТСХ и мицеллярной высокоэффективной тонкослойной хроматографии МВЭТСХ с использованием фракционного элюирования для одновременного определения водо и жирорастворимых витаминов. Методика селективного определения рибофлавина и его производных в режиме капиллярного зонного электрофореза и капиллярной электрохроматографии на микрочипе с флуориметрическим детектированием. ГЛАВА 1. Витамины от латинского vi жизнь необходимые для жизнедеятельности низкомолекулярные органические соединения, синтез которых в организме данного вида отсутствует или ограничен за исключением витамина , который может синтезироваться в коже человека. Нарушения регуляции процессов обмена и развитие различных патологий гиповитамтозы часто связаны с недостаточным поступлением витаминов в организм, полным отсутствием их в потребляемой пище, нарушениями их транспорта или изменениями синтеза коферментов с участием витаминов. В результате развиваются авитаминозы болезни, возникающие при полном отсутствии в пище или нарушении усвоения какоголибо витамина. В литературе описаны также патологические состояния, связанные с поступлением чрезмерно больших количеств витаминов в организм гипервитаминозы 1. По физикохимическим свойствам витамины делятся на две группы водорастворимые витамины группы В и С и жирорастворимые витамины А, Е, Д, К. Структурные формулуы и физикохимические свойства водо и жирорастворимых витаминов представлены в табл. С способствует формированию и поддержанию структуры костей, кожи, а также участвует в синтезе зрительного пигмента. Витамин В нормализует деятельность сердца В2 ускоряет процессы регенерации тканей В6 и В2 способствуют нормализации работы нервной системы. Витамин Эз регулирует обмен фосфора и кальция в организме, способствует всасыванию этих веществ в кишечнике и своевременному накоплению их в костной ткани 2. Таблица 1. А Ретинол 2Е. Е.6Е,8Е3. А Ретинол ацетат 2Е,. Е,8Е3. Тнамин хлорид . ХОХ амиио2метиширимилин5илметилгндроксиэтил4метил1 . Флавин мононуклеотид иоХ X 1 деокси7. В Флавиналенин динуклеотид бо л к ои аденозин 0рибо,8диметил2. Биотин 5 У СН 5За5. Аскорбиновая кислота НО МО но ом 2Я Б1 дигадроксиэтил4. Е атохофсрол 2Я2,5,7,8тстраметмлК,8К4,8. Е атокоферол ацетат Ч Д7. Таблица 1. Ретинол 6. СН,еО Этанол, метанол, хлороформ, Эфф, жиры, масла 5 5 . Реши ил ацетат . СаНЛ 5 5 . Реши ил пальимтаг 4. СкЛаО 5 0 . Холскалытифсрол 4, СгтНмО большинство органических растворителей 4 5 . Аскорбиновая кислота 6. СН0 разя. Вода 0,3 гмл, спирт 5 5 5 0 . Тиамин гидрохлорид 7. I4 не рем. Вода 1 гмл, спирт О. Зпмл. М фосфат, 2. М фосфат. М фосфат, 5. Рибофлавин 6, i . Пода 0,1 . И спиртплохо 0 5 0 6 2 4 ,7 ,6 . М фосфат, 0. М фосфат. М фосфат, 0. М фссфат. Рибофлавнн5 фосфат 6. Зола гл 0 5 0 4 8 7 . М фосфат, 0,1 М фосфат, 0. М фосфат. Флавниалемин динуклеотид 5, iii Вола 0 5 0 1 8 4 ,0 9,3 и. М фосфат, 0. М фосфат. Никотиновая кисло а 3, , 6. Вода . М фосфат.