ТСХ-скрининг и ВЭЖХ-определение производных фенотиазина в биологических объектах

• Автор: Клищенко, Роман Александрович
• Шифр специальности: 02.00.02
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2005
• Место защиты: Краснодар
• Количество страниц: 137 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ

1. Обзор литературы.

1.1. Физикохимические свойства производных фенотиазина.

1.2. Определение производных фенотиазина в биообъектах

1.2.1. Общие проблемы пробоподготовки.

1.2.2. Методы определения фенотиазинов.

1.2.2.1. Идентификация по качественным реакциям

1.2.2.2. Спектральные методы.

1.2.2.3. Метод тонкослойной хроматографии

1.2.2.4. Метод высокоэффективной жидкостной хроматографии

1.2.2.5. Метод газовой хроматографии.
М 1.2.2.6. Электрофорез
1.3. Скрининг
1.4. Анализ метаболитов
1.5. Выводы к литературному обзору и постановка задач исследования .
2. Экспериментальная часть и обсуждение результатов
2.1. Использованное оборудование и материалы.
2.2. Теоретическое и экспериментальное обоснование аналитической схемы определения производных фенотиазина методом тонкослойной хроматографии
2.2.1. Твердофазная экстракция
2.2.2. Тонкослойная хроматография
2.2.2.1. Экспериментальный поиск оптимального элюента
2.2.2.2. Описание хроматографического процесса.
2.2.2А. Количественное определение исследуемых веществ на основе метода тонкослойной хроматографии.
2.2.3. Определение фенотиазинов методом ВЭЖХ
2.2.3.1. Оптимизация условий хроматографирования фенотиазинов
2.2.3.2. Количественное определение методом ВЭЖХ.
2.2.4. Построение аналитической схемы определения фенотиазинов
ВЫВОДЫ.
Список использованных источников


В судебной и клинической токсикологии для рутинного скрининга наркотических, лекарственных веществ и их метаболитов в биологических средах широко используются различные виды хроматофафии 19. Особую популярность в настоящее время приобретает систематический токсикологический анализ, так как такой подход позволяет с высокой степенью надежности определять широкий спектр токсикантов в биообразцах. Обычная стратегия аналитической процедуры токсикологического анализа включает на первом этапе скрининговые тесты, на втором этапе подтверждающий анализ проб, дающих положительные реакции при скрининге, вторым независимым методом с количественным определением идентифицируемого вещества. Такая двухступенчатая процедура оптимальна для анализов, в которых идентифицируются вещества, входящие в определенный ограниченный перечень. Существующие методики направлены главным образом на групповую идентификацию и контроль отдельных наиболее часто используемых веществ и обладают различными недостатками по селекгнвности и чувствительности. В этой связи практический интерес представляет разработка унифицированной методики скрининга соединений класса фенотиазина для терапевтической практики, а также при диагностике отравлений. Целью настоящей работы являлась разработка унифицированной аналитической схемы хроматографического определения производных фенотиазина в биологических средах для терапевтической практики и токсикологии. ВЭЖХ. Все производные фенотиазина относятся к веществам основного характера. В виде оснований плохо растворяются в воде, хорошо в этаноле, хлороформе, эфире. Являются химически очень лабильными соединениями, особенно легко окисляется атом серы, давая различные продукты сульфоокислсния. Химическая структура данной группы препаратов представляет собой гетероциклическую систему, состоящую из шестичленного гетероцикла тиазина, конденсированного с двумя ядрами бензола и двух заместителей и К2 в положениях 2 и соответственно рисунок 1. Структурные формулы исследуемых в настоящей работе фенотиазинов представлены на рисунке 2. Общие проблемы пробоподготовки. В большинстве случаев иробоподготовка при анализе биообъектов является основным, определяющим этапом аналитического метода, так как требует больших затрат труда, времени и химических реактивов. Среди классических и вместе с тем наиболее трудоемких процедур приготовления пробы следует отметить прежде всего жидкостную экстракцию, жидкостьжидкостную переэкстракцию и отгонку растворителя на ротационном испарителе. Жидкостная экстракция неизбежна, если матрица образца твердая в этом случае объектом дальнейших манипуляций является первоначальный жидкий экстракт аналогом жидкостной экстракции
для извлечения аналитов из твердых образцов может служить свсрхкритическая флюидная экстракция . Во всех остальных случаях, то есть при работе с жидкими образцами, классические методы пробоподготовки можно заменить значительно мепсс ресурсоемким и более удобным методом твердофазной экстракции ТФЭ в сочетании с методом твердофазной очистки. Большинство анализируемых биообъектов делятся на четыре группы 1 жидкости с небольшим содержанием биологического материала моча 2 жидкости с заметным содержанием биологического материала кровь 3 твердые вещества, которые являются простыми соединениями или простыми смесями таблегки, капсулы, порошок 4 твердые вещества, которые являются сложными смесями волосы, ногти. Каждая из этих групп требует своей аналитической
схемы пробоподготовки. В дальнейшем нами рассматривались только первые две группы биообъектов. Наиболее распространенным и простым объектом исследования на лекарственные соединения является моча, вследствие низкого содержания белковых компонентов. Как правило, изолирование из мочи проводят по схеме, приведенной на рисунке 3 . Другим объектом анализа на наличие лекарственных веществ и их метаболитов является кровь. Обработке экстракцией может быть подвергнута цельная кровь плазма или сыворотка. Преданалитическая подготовка крови проводится по схеме, приведенной на рисунке 4 . Подкисление образца конц. Высушивание бсзв. Высушивание безв.