Электрохимический метод определения патогенных микроорганизмов (Salmonella Thyphimurium) с использованием магнитных наночастиц

• Автор: Глазырина, Юлия Александровна
• Шифр специальности: 02.00.02
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2010
• Место защиты: Екатеринбург
• Количество страниц: 145 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ

СПИСОК УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ И СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР.

Биосенсоры

1.1. Ферментные сенсоры.

1.2. Сенсоры на основе микроорганизмов

1.3. Сенсоры на основе надмолекулярных структур клетки

1.4. Иммуносеисоры

1.5. ДНКсенсоры

1.6. Постановка задачи

ГЛАВА 2. АППАРАТУРА И ТЕХНИКА ЭКСПЕРИМЕНТА
2.1. Оборудование и средства измерений
2.2. Реактивы, рабочие растворы.
2.3. Методики эксперимента
ГЛАВА 3. СИНТЕЗ И ИССЛЕДОВАНИЕ НАНОЧАСТИЦ Ге,.
3.1. Выбор метода синтеза наночастиц Рез
3.2. Определение динамики изменения размеров агрегатов наночастиц Ее4 в водных суспензиях
ГЛАВА 4. ИССЛЕДОВАНИЕ ВЗАИМОДЕЙСТВИЯ НАНОЧАСТИЦ Ее4 С РАЗЛИЧНЫМИ КУЛЬТУРАМИ КЛЕТОК
4.1. Электронномикроскопическое исследование взаимодействия наночастиц Ее4 с различными культурами клеток.
4.2. Жизнеспособность клеточных культур при воздействии наночастиц
4.3. Определение количества наночастиц, поглощенных клетками
ГЛАВА 5. ПРИМЕНЕНИЕ НАНОЧАСТИЦ Ее4 В ГИБРИДНОМ ИММУНОАНАЛИЗЕ.
5.1. Метод детектирования магнитной нанометки.
5.2. Применение магнитного поля.
5.3. Определение правильности и специфичности метода электрохимического иммуноанализа
5.4. Анализ реальных объектов
5.4 Антитела, меченные наночастицами 4.
5.5. Использование микроорганизмов ii i в качестве модельной системы.
ВЫВОДЫ.
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ


Предложено использование бактериального антигена для определения патогенных микроорганизмов, позволяющее увеличить чувствительность анализа. Предложенный метод анализа обеспечивает предел обнаружения 8. КОЕсм3 для бактерии и антигена 1. Ю6 мгсм3 ii, что соответствует характеристикам ПЦР анализа. Простота и экономическая эффективность метода позволяет организовать иммуноанализ на месте в небольших клиниках. На основе результатов работы получен патент РФ 3 от . Проведены испытания предложенного иммуноэлекгрохимического метода количественного определения ii в сравнении с традиционно используемыми методами ПЦР анализа и бактериального посева в ФГУН ГНЦ ВБ Вектор, г. Новосибирск. Получен акт испытаний, подтверждающий возможность использования предложенного электрохимического способа иммуноанализа для диагностики патогенных микроорганизмов. Федеральной целевой программы Развитие инфраструктуры наноиндустрии в Российской Федерации на годы для разработки нормативнометодического обеспечения и средств контроля содержания наночастиц на объектах производственной сферы. ПЭМ. Апробация работы. Результаты исследований представлены на XVIII Менделеевском съезде по общей и прикладной химии Москва, Россия г. Международном семинареярмарке Российские технологии для индустрии Нанотехнологии в электронике, энергетике, экологии и медицине СанктПетербург, Россия, г. VII Всероссийской конференции по электрохимическим методам анализа с международным участием Электрохимические методы анализа ЭМА Уфа, Россия, г. Третьей Всероссийской конференции по наноматериалам НАНО Екатеринбург, Россия, г. Свердловской области Нанотехнологии Екатеринбург, Россия, г. Семинаре Биосенсоры и биоаналитические микротехнологии для защиты окружающей среды и клинического анализа Монреаль, Канада, г. III Всероссийской конференции с международным участием Аналитика России Краснодар, Россия, г. Нанотехнологии производству Екатеринбург, Россия, г. Съезде аналитиков России Москва пансионат Клязьма г. Симпозиуме с международным участием Теория и практика электроаналитической химии Томск, Россия, г. Публикации. По содержанию диссертационной работы опубликовано работ, в том числе 1 патент РФ, 3 статьи в журналах, рекомендованных ВАК, 1 глава в монографии, тезисы докладов на всероссийских и международных конференциях. Личное участие автора состоит в решении основных задач исследования, планировании и проведении экспериментов, обработке, интерпретации и систематизации результатов исследования. Уральского федерального университета им. Президента России Б. И. Ельцина г. Екатеринбург к. Козициной А. ФГУН ГНЦ ВБ Вектор, г. Новосибирск к. Агафонову А. Института физики металлов УрО РАН г. Сафронову А. П. УрГУ им. А.М. Горького, г. Екатеринбург за предоставление результатов исследований суспензий методом динамического рассеяния света. Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 5 страницах машинописного текста, включая таблиц, рисунков и состоит из введения, пяти глав, выводов, списка литературы из 0 наименований и 3 приложений. Во Введении раскрыта актуальность темы исследования, определены цели и задачи, сформулированы научная новизна, практическая значимость и положения, выносимые на защиту. В Литературном обзоре глава 1 рассмотрены основные направления создания биосенсоров, показана актуальность использования пиломатериалов в их составе. В Экспериментальной части глава 2 представлены данные об объектах исследования, используемых методах и измерительном оборудовании, приведены условия эксперимента. Глава 3 посвящена выбору метода синтеза магнитных наночастиц 4. В главе 4 приведены результаты исследования взаимодействия наночастиц 4 с различными видами клеточных культур культура клеток онкогенная клеточная линия человека кровт, больного лейкемией, клетки эмбрионального легкого человека, трансформированного вирусом V клетки I, микроорганизмы ii, с целью выбора оптимальных условий их взаимодействия. Глава 5 посвящена разработке электрохимического метода определения патогенных микроорганизмов ii с использованием магнитных наночастиц.