Роль полиморфизма и уровня экспрессии генов цитокиновой сети в формировании молекулярно-генетических основ предрасположенности к эссенциальной гипертензии

• Автор: Тимашева, Янина Римовна
• Шифр специальности: 14.00.06
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2008
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 173 с. : 7 ил.

СПИСОК УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ
Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1. Генетические аспекты эссенциальной гипертензии и методы 12 анализа сердечно-сосудистых заболеваний
1.2. Роль системы цитокинов в развитии сердечно-сосудистых 16 заболеваний
1.2.1. Система цитокинов, хроническое воспаление и атеросклероз
1.2.2. Интерлейкин-1, полиморфизм гена интерлейкина-1 бета и 20 риск сердечно-сосудистых заболеваний
1.2.3. Полиморфизм гена антагониста рецептора интерлейкина-1 и 22 риск сердечно-сосудистых заболеваний
1.2.4. Полиморфизм гена интерлейкина-6 и риск сердечно- 24 сосудистых заболеваний
1.2.5. Полиморфизм гена интерлейкина-12 и риск сердечно- 26 сосудистых заболеваний
1.2.6. Полиморфизм гена интерлейкина-10 и риск сердечно- 27 сосудистых заболеваний
1.2.7. Полиморфизм гена фактора некроза опухолей альфа и риск 29 сердечно-сосудистых заболеваний
1.2.8. Полиморфизм гена лимфотоксина альфа и риск сердечно- 31 сосудистых заболеваний
1.2.9. Взаимосвязь ренин-ангиотензиновой системы и цитокинового

каскада
1.2.10. Полиморфизм гена ангиотензиногена и риск сердечно- 36 сосудистых заболеваний
1.2.11. Оксид азота, полиморфизм гена эндотелиальной синтазы 38 осида азота и риск сердечно-сосудистых заболеваний
1.2.12. Хемокины и риск сердечно-сосудистых заболеваний
Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Общеклинические методы исследования
2.2. Лабораторные методы исследования
2.3. Инструментальные методы исследования
2.4. Молекулярно-генетические методы
2.4.1. Выделение ДНК из периферической крови человека
2.4.2. Выделение РНК из периферической крови
2.4.3. Метод полимеразной цепной реакции
2.4.4. Метод обратной транскрипции
2.4.5. Метод обратной транскрипции - полимеразной цепной 55 реакции в режиме реального времени
2.4.6. Метод электрофореза в агарозном и полиакриламидном геле
2.5. Методы статистического анализа результатов исследования
Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ 6 [
3.1. Клиническая характеристика исследуемых групп
3.2. Ремоделирование левого желудочка и основные параметры 64 гемодинамики у больных эссснциальной гипертензией
3.3. Анализ ассоциаций полиморфных маркеров генов системы 72 цитокинов с ЭГ
3.3.1. Анализ ассоциаций полиморфизма-5/1 Т/С гена 1Ь1В с ЭГ

3.3.2. Анализ ассоциаций VNTR полиморфизма гена IL1RN с ЭГ
3.3.3. Анализ ассоциаций полиморфизма-572 G/С гена IL6 с ЭГ
3.3.4. Анализ ассоциаций полиморфизма-<527 С/А гена IL10 с ЭГ
3.3.5. Анализ ассоциаций полиморфизма 1159 А/С гена IL12 с ЭГ
3.3.6. Анализ ассоциаций полиморфизма -308 G/А гена TNFA с ЭГ
3.3.7. Анализ ассоциаций полиморфизма 252 А/G гена LTA с ЭГ
3.3.8. Анализ ассоциаций полиморфизма Т174M гена AGT с ЭГ
3.3.9. Анализ ассоциаций РА77?-полиморфизма гена NOS3c ЭГ
3.4. Анализ ассоциаций сочетаний генотипов полиморфизма генов 97 цитокинов с развитием сердечно-сосудистых заболеваний
3.5. Сравнительный анализ профиля экспрессии генов цитокинов и их 103 рецепторов в клетках периферической крови больных ЭГ и контрольной группы
Глава 4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ {Q6
выводы
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ
БИБЛИОГРАФИЧЕСКИЙ СПИСОК
ПРИЛОЖЕНИЯ

промывали 70% раствором этилового спирта, высушивали и растворяли в 1мл ТЕ буфера с рН=8.0. Раствор хранили при температуре -20°С.
2.4.2. Выделение РНК из периферической крови
Выделение суммарной РНК из периферической крови проводили с использованием набора AquaPure RNA Isolation Kit компании Bio-Rad в соответствии с протоколом фирмы-производителя. К 300 мкл добавляли 900. мкл Red Blood Cells Lysis solution, перемешивалии 10 мин инкубировали при комнатной температуре. Затем центрифугировали 20с при 11 тыс об/мин и отбирали супернатант. Ресуспендировав лейкоциты в остатке супернатанта , добавляли 300 мкл RNA Lysis solution.
Осаждение ДНК и белков проводили с использованием 100 мкл ProteinDNA Precipitation Solution, помещали пробирку в лед на 5 мин, затем центрифугировали в течение 3 мин при 11 тыс об/мин. После этого отбирали РНК-содержащий супернатант в пробирку, содержащую 300 мкл 100% изопропанола, перемешивали и центрифугировали в течение 3 мин при 11 тыс об/мин. Удаляли супернатант, добавляли 300 мкл 70% этанола и промывали осадок РНК. Центрифугировали в течение 1 мин при 11 тыс об/мин, сливали спирт, высушивали РНК и растворяли в 50 мкл RNA tlydration solution.
Контроль качества выделенных препаратов РНК проводили с помощью спектрофотометра UVmini-1241 (Shimadzu, Япония), а также электрофорезом в 0.8%-ном агарозном геле, содержащем 0.5 мкг/мл бромида этидия. В использованных образцах РНК соотношение оптической плотности при длинах волн 260 и 280 нм (A26o/A2So) находилось в пределах 1.9 - 2.1.
Выделенную РНК использовали для построения первой цепи кДНК, которая была необходима для гибридизации на чипах и количественной ОТ-ПЦР в режиме реального времени.