Усовершенствование метода выделения L-форм микобактерий из патологоанатомического материала и объектов внешней среды

• Автор: Тарасова, Елена Владимировна
• Шифр специальности: 06.02.02
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2012
• Место защиты: Белгород
• Количество страниц: 132 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ

Перечень условных сокращений

Введение

1. Обзор литературы

1.1. Возбудители туберкулеза и их изменчивость

1.2. L-формы микобактерий и их биологические свойства

1.3. Диагностика туберкулеза

1.3.1. Эпизоотологический метод

1.3.2. Аллергический метод

1.3.3. Патологоанатомический метод

1.3.4. Бактериологический метод

1.4. Заключение по обзору литературы
2. Собственные исследования
2.1. Материалы и методы исследований
3. Результаты собственные исследований
3.1. Эпизоотическая ситуация по туберкулезу крупного рогатого скота в Российской Федерации
3.2. Разработка метода предпосевной обработки патологоанатомического материала для выделения L-форм микобактерий
3.3. Изучение реверсивных свойств L-форм микобактерий
3.4. Выделение L-форм микобактерий из проб сметаны и молока
3.5. Выделение L-форм микобактерий из проб почвы, кормов и воды
3.6. Изучение влияния антибиотиков на реверсию микобактерий
in vitro
3.7. Изучение сенсибилизирующих и патогенных свойств L-форм микобактерий
4. Анализ и обсуждение результатов исследований
3. Выводы
6. Практические предложения Список использованной литературы Приложения
ПЕРЕЧЕНЬ УСЛОВНЫХ СОКРАЩЕНИЙ
ИФА - иммуноферментный анализ
ТЕ - туберкулиновая единица
РА - реакция агглютинации
РП - реакция преципитации
РДП - реакция диффузной преципитации
ККРА - крове - капельная реакция агглютинации
РИД - реакция иммунодиффузии в агаровом геле
ПЦР - полимеразная цепная реакция
KAM - комплексный аллерген из атипичных микобактерий
КРС - крупный рогатый скот

Из бактериоскопических исследований наиболее чувствительными являются люминесцентная и фазово-контрастная микроскопия, при окраске специфическими красителями. Но не во всех случаях этими методами удается обнаружить в мазках-отпечатках из патологического материала кислотоустойчивые палочки, а при наличии таковых невозможно сделать заключение о их видовой принадлежности, так как в красный цвет окрашиваются как возбудители туберкулеза, так и атипичные. Вместе с тем, микобактерии при микроскопии мазков - отпечатков положительный результат можно получить при наличии в 10 см3 исследуемого материала от 1000 до 1500 микробных клеток. [7, 23, 62].
Бактериоскопический метод является ориентировочным, по его результатам нельзя установить диагноз или его исключить. По данным авторов H.A. Свириденко (2006); П.Е.Савченко (1998); В.И. Литвинова (2001), результаты микроскопии совпадают с результатами культуральных исследований лишь в 4,6%.
В таких случаях используют культуральный метод, который включает в себя выделение чистой культуры из патологоанатомического материала (лимфатические узлы, кусочки органов и тканей) и проб объектов внешней среды. Для выделения чистой культуры из исследуемого материала кусочки органов и тканей отмывают от консервирующей жидкости промывают стерильной дистиллированной водой, измельчают, растирают в ступке и заливают 5 - 10% раствором серной, соляной или щавелевой кислоты в соотношении 1 : 4, на 15 - 25 минут. Затем кислоту удаляют, гомогенную массу промывают физиологическим раствором и используют для посева на питательные среды с целью получения чистых культур (метод А.П. Аликаевой, 1940) [1].
Все выше перечисленные методы недостаточно информативные. В лабораторной практике наиболее информативным считается биологический метод. Этот метод применяется при диагностике туберкулеза не только для обнаружения возбудителей в исследуемом материале, но и в целях