Разработка экспресс-методов диагностики ботулизма

• Автор: Мустафин, Тимур Рустемович
• Шифр специальности: 06.02.02
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2014
• Место защиты: Казань
• Количество страниц: 120 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

ВВЕДЕНИЕ
1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1 Биология возбудителя ботулизма
1.2 Химический состав и антигенная структура возбудителя ботулизма
и его токсина
1.3 Лабораторная диагностика и идентификация возбудителя ботулизма
и его токсина
2 РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ
2.1 Материалы и методы исследований
2.2 Изучение культурально-морфологических и биохимических свойств
CI. botulinum
2.2.1 Получение антигенов из Cl.botulinum типов А, В, С, D
2.2.2 Получение анатоксинов из Cl.botulinum типов А, В, С, D
2.2.3 Изыскание оптимального состава антигенной композиции CI. botulinum типов А, В, С, D
2.2.4 Изыскание оптимального варианта гипериммунизации кроликов с целью получения высокоактивной ботулинической поливалентной сыворотки..
2.3 Разработка полиспецифического антигенного эритроцитарного
диагностикума для экспресс-диагностики ботулизма в РИГА

2.4 Разработка полиспецифического антительного эритроцитарного диагностикума для экспресс-диагностики ботулизма в РИГ А..
2.5 Разработка полиспецифического люминесцирующего ботулинического глобулина для метода флуоресцирующих антител (МФА)
2.6 Разработка полиспецифического иммуноферментного конъюгата
для иммуноферментного анализа (ИФА)
2.7 Обнаружение возбудителя Cl.botulinum и его токсина в объектах ветеринарного надзора с помощью поливалентного флуоресцирующего глобулина и поливалентного иммуноферментного
конъюгата
2.8 Способы хранения культур CI. botulinum и диагностических биопрепаратов
3 ЗАКЛЮЧЕНИЕ
СПИСОК СОКРАЩЕННЫХ ТЕРМИНОВ
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ
СПИСОК ИЛЛЮСТРИРОВАННОГО МАТЕРИАЛА
ПРИЛОЖЕНИЕ

ВВЕДЕНИЕ
Актуальность темы. Ботулизм - тяжелая интоксикация, возникающая в результате употребления в пищу продуктов, содержащих токсины Clostridium botulinum и характерезующаяся преимущественным поражением центральной и вегетативной нервной системы.
В настоящее время известно 8 типов возбудителя ботулизма (А, В, Са, Cp, D, Е, F, G), которые отличаются между собой по антигенным свойствам вырабатываемых ими токсинов и некоторыми другими признаками.
Возбудитель ботулизма относится к политропным представителям микробов, которые в ходе инфекционного процесса занимают ряд последовательных локализаций в организме, тем самым обнаруживая свою адаптированность к ряду различных органов и тканей, однако это есть единая форма болезни, в которой разные локализации возбудителя соответствуют разным стадиям болезни (кишечник, печень, легкие, нервная система).
Токсин ботулизма представляет собой протеин, состоящий как бы из двух фрагментов, связанных дисульфидными мостиками и попадая в кишечник животного всасывается в кровь и разносится по всему организму. Вследствии разрушения нервных центров продолговатого мозга развиваются параличи глотки, жевательных мышц и языка. Токсин подавляет выделение ацетилхолина, что ведет к расслаблению скелетных мышц, нарушению движения, параличам дыхательных и сердечных мышц, асфиксии и смерти животных. Люди наиболее восприимчивы к ботулиническим ядам типов А и С; лошади - типу В; крупный рогатый скот - типам D и С; овцы - типам А и С; птицы и норки - к типу С.
Впервые возбудитель ботулизма Clostridium botulinum (синоним Bacillus botulinus) был описан Е. Van Ermengem (1896).
Анализируя литературные данные по вопросу обнаружения антигенов и антител вообще, токсинов микробного происхождения в частности, можно заключить, что в этих целях наиболее перспективными являются иммуноферментный анализ (Бочарова Н.Г. Новая тест система обнаружения специфических антител // Сб.

так как им не удалось отдифференцировать возбудителя ботулизма А, В, Clostridium sporogenes, а также ими были получены противоположные результаты по специфичности РНГА. (Булатова Т.И. Журн. микробиологии // 1964. № 1. С.96; 1964. №7. С.79; Баяр Г.И., Конникова P.E. Реакция непрямой гемагглютинации как метод экспресс-индикации в объектах внешней среды // ВПБЗН. 1966. Вып. 10. С.175-180; Булатова Т.И., Матвеев К.И. К вопросу о применении РНГА для обнаружения ботулинических токсинов//ВПБЗН. 1966. Вып.10. С.167).
Н.М. Jonson et al. устранили перекрестные реакции в РНГА при работе с высо-коочищенными ботулиническими токсинами типа А и В, а также с Clostridium sporogenes.
РНГА для индикации ботулинических токсинов во внешней среде применяли А.Х. Шамсутдинова, К.Х. Папуниди, Д.А. Кирилюк, П.К. Сметов. Минимальное обнаруживаемое количество ботулинического токсина типа А составило 21 и более DLM для белых мышей в исследуемой пробе. В качестве объектов ветнадзора были использованы пробы мяса, воды, зерна, комбикорма, мясо - костной муки и грубые корма. На основании экспериментальных данных авторами составлены «Методические указания по индикации ботулинического токсина типа А в объектах ветнадзора», утвержденные ГУВ при ГК СМ СССР (1989 г.).
Для обнаружения ботулинического токсина реакцией преципитации еще в 1927 году J.B. Gunison и P. Schocnholz приготовили преципитирующую сыворотку типов А и В. Специфичность реакции преципитации при обнаружении ботулинического токсина отмечали С.И. Наследышева, П.С. Браславская (Наследышева С.И., Браславская П.С. Обнаружение токсина В. botulinum в пищевых продуктах посредством реакции кольцепреципитации // Сообщ. т. Анналы Мечниковского института. Харьков. 1935. Т. 1. Вып. 1. С. 123-132; Gunnison J.B., Schoenhoiz P. Studies on the sérologie classification of B. botulinus. The precipitin reaction // Joum.Immunol. 1927. P.237-241).
М.Я. Канцур и Ф.А. Черткова обнаруживали ботулинический токсин в реакции преципитации при наличии его не менее 1000 DLM для мышей в 1 мл. Хотя эта реакция специфична, однако по чувствительности уступает биологической пробе