Частота обнаружения труднокультивируемых микроорганизмов - возбудителей инфекций респираторного тракта у детей и взрослых и оптимизация способа их детекции

• Автор: Сперанская, Елена Валентиновна
• Шифр специальности: 03.02.03
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2015
• Место защиты: Нижний Новгород
• Количество страниц: 132 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ
ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1 Л. Характеристикатруднокультивируемых возбудителей воспалительных

заболеваний органов дыхания

1Л Л. Mycoplasma pneumoniae

1Л .2. Бактерии рода Chlamydophila

1Л .2 Л. Chlamydophila pneumoniae

1Л .2.2. Chlamydophila psittaci

1.1.3. Legionella pneumophila

1.1.4. Moraxella (Branhamella) catarrhalis
1.1.5. Вирусы группы герпеса
1.1.5.1. Herpes simplex I/II (HSVI/П)
1.2. Лабораторная диагностика заболеваний органов дыхания
1.2.1. Традиционные методы лабораторной диагностики, применяемые для выявления труднокультивируемых возбудителей воспалительных заболеваний органов дыхания
1.2.2. Современные молекулярно-биологические методы в диагностике бронхолегочных инфекций
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Объекты и объем исследований
2.2 Исследуемый материал
2.3. Выделение ДНК из исследуемого материала
2.4. Выделение ДНК из смеси субстратов
2.5. Постановка ПЦР
2.7. Выявление продуктов амплификации методом электрофореза в агарозном геле
2.8. Учет результатов электрофореза
2.9. Иммунологические исследования
2.10. Статистический анализ результатов
2.11. Нормативно-методические документы
ГЛАВА 3. ВЫБОР НАИБОЛЕЕ ИНФОРМАТИВНОГО СУБСТРАТА ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ НА КОНТАМИНИРОВАННОСТЬ
ТРУДНОКУЛЬТИВИРУЕМЫМИ ВОЗБУДИТЕЛЯМИ ВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ ОРГАНОВ ДЫХАНИЯ
ГЛАВА 4. ОПТИМИЗАЦИЯ СПОСОБА ПЦР-ДЕТЕКЦИИ РЕДКО ВСТРЕЧАЮЩИХСЯ ВОЗБУДИТЕЛЕЙ ИНФЕКЦИЙ РЕСПИРАТОРНОГО

ТРАКТА И ЭФФЕКТИВНОСТЬ ЕГО ИСПОЛЬЗОВАНИЯ
ГЛАВА 5. ЧАСТОТА ОБНАРУЖЕНИЯ ТРУДНОКУЛЬТИВИРУЕМЫХ ВОЗБУДИТЕЛЕЙ ИНФЕКЦИЙ РЕСПИРАТОРНОГО ТРАКТА У ДЕТЕЙ
ГЛАВА 6. ЧАСТОТА ОБНАРУЖЕНИЯ ТРУДНОКУЛЬТИВИРУЕМЫХ ВОЗБУДИТЕЛЕЙ БРОНХОЛЕГОЧНЫХ ИНФЕКЦИЙ У ВЗРОСЛЫХ
ГЛАВА 7. АЛГОРИТМ МОЛЕКУЛЯРНОЙ ДЕТЕКЦИИ ТРУДНОКУЛЬТИВИРУЕМЫХ ВОЗБУДИТЕЛЕЙ ЗАБОЛЕВАНИЙ ОРГАНОВ ДЫХАНИЯ
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ
ПЕРСПЕКТИВНЫЕ НАПРАВЛЕНИЯ ДАЛЬНЕЙШЕЙ РАЗРАБОТКИ ТЕМЫ
БЛАГОДАРНОСТИ
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

ВВЕДЕНИЕ
Актуальность работы.
Инфекционные воспалительные болезни органов дыхания (БОД), включая внеболышчные пневмонии (ВП), остаются одной из ведущих причин заболеваемости, госпитализации и смертности и представляют собой постоянную сложную проблему современного здравоохранения как в индустриально развитых, так и развивающихся странах [11, 17, 18, 27]. Согласно официальной статистике в Российской Федерации ежегодно регистрируется около 500 тыс. случаев пневмоний, хотя их предполагаемое число составляет около 1,5 млн.
[17,18]. Отдельную проблему представляют БОД в закрытых воинских коллективах, где уровни заболеваемости превышают показатели среди гражданского населения в несколько раз [9].
Поражения органов дыхания могут быть вызваны различными видами бактерий и вирусов, колонизирующими верхние и нижние дыхательные пути. Наряду с традиционными этиологическими агентами (Streptococcus pneumoniae, Haemophilus influenzae, вирусами гриппа) большую роль приобретают так называемые атипичные, труднокультивируемые патогены, такие как Mycoplasma pneumoniae, Chlamydophila pneumoniae, Legionella pneumophila, а также вирусы группы герпеса (Cytomegalovirus (CMV), Herpes simplex I/II (HSV I/II)) [4, 8, 9, 10, 11, 19, 25, 63, 75]. Этиологическая роль данных возбудителей в развитии респираторных инфекций и необходимость их индикации и идентификации отражена в новых нормативных документах: МУ 3.1.2
«Эпидемиологический надзор за внебольничными пневмониями»; МУК 4.2.3115 -13 «Лабораторная диагностика внебольничных пневмоний», СП 3.1.2.3116-13 "Профилактика внебольничных пневмоний". На фоне снижения иммунного статуса населения возрастает роль этих возбудителей в формировании патологии органов дыхания [1, 11, 17, 19]. По данным литературы на их долю приходится до 30 % случаев заболеваний респираторного тракта, при этом частота их выявления при различных нозологических формах у разных авторов существенно варьирует

иммунофлюоресценции (ПИФ) [14, 18, 100].
Культивирование хламидий происходит в монослое эукариотических клеток, поэтому данный метод применяется только в специализированных лабораториях, оснащенных специальным оборудованием [13]. Кроме того, из-за чувствительности возбудителей к факторам внешней среды критическое значение имеют условия забора, транспортировки и хранения проб клинического материала, предназначенных для исследования культуральным методом [90, 140]. При работе с C.psittaci необходимо соблюдать особые меры безопасности, поэтому культуральные исследования при орнитозе проводятся только в немногих референтных лабораториях.
C. pneumoniae отличается слабым и медленным ростом на культурах клеток, поэтому исследование является длительным, дорогим, трудоемким и недостаточно чувствительным, проводится только в научных целях в специализированных лабораториях [18].
Хламидийные антигены могут выявляться в респираторных образцах с помощью ПИФ с использованием видовых и родовых специфических моноклональных антител. Данный метод выявления C. pneumoniae недостаточно чувствителен (50%) и мало эффективен из-за низкой концентрации возбудителя в пробах клинического материала. Материалом для данного исследования может служить не только мокрота, но и мазки из глотки. Однако антиген может выявляться в течение нескольких месяцев после перенесенной острой инфекции, затрудняя интерпретацию результатов. Для C.psittaci не получены специфические антитела вследствие высокой антигенной вариабельности данного возбудителя
[14,18].
В диагностике хламидийных инфекций респираторного тракта наиболее распространены серологические методы. В реакции связывания комплимента используется родовой специфичный антиген, метод является достаточно чувствительным и специфичным в диагностике орнитоза. Ввиду того, что у взрослых большая часть инфекций C. pneumoniae является реинфекциями, ответ