Экспериментальное обоснование условий эффективной сенсибилизации эритроцитов O- и H-антигенами из фаголизатов шигелл и сальмонелл

• Автор: Канделаки, Нодар Ефграфович
• Шифр специальности: 03.00.07
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1984
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 124 c. : ил

1. Введение

2. Обзор литературы

2.1. Реакция пассивной гемагглютинации и ее модификации

2.2. Сенсибилизация эритроцитов белковыми и небелковыми веществами

2.8. Стабилизация эритроцитов

2.4. Получение сенситинов

2.5. Заключение по обзору литературы

3. Материалы и методы исследований

3.1. Штаммы бактерий и фаги

3.2. Сыворотки и диагностикумы

3.3. Получение бактериальных суспензий

3.4. Фаголизаты
3.5. Гретые вакцины
3.6. Получение Н-антигенов путем обработки ультразвуком
3.7. Получение ультразвуковых 0-антигенов сальмонелл
3.8. Дизентерийные ультразвуковые антигены
3.9. Комплексный антиген по методу Грассе
3.10. Содержание белков, углеводов и нуклеиновых кислот
3.11. Получение гипериммунных сывороток
3.12. 50$ формалинизированные эритроциты
3.13. Сенсибилизация эритроцитов 0-антигенами
3.14. Сенсибилизация эритроцитов Н-антигенами

3.15. Реакция пассивной гемагглютинации
3.16. Реакция торможения пассивной гемагглютинации
3.17. Статистическая обработка результатов
4. Результаты исследований
4.1. Получение и характеристика О-антигенов сальмонелл
4.2. Выделение и характеристика 0-антигенов из фаголизатов шигелл
4.3. Получение и характеристика Н-антигенов из фаголизатов сальмонелл
4.4. Оценка сенситивной активности 0-антигенов, выделенных из фаголизатов
4.5. Оценка сенситивной активности Н-антигенов, выделенных из фаголизатов
4.6. Характеристика специфической активности эритроцитарных О- и Н-диагностикумов, приготовленных из фаголизатов шигелл и сальмонелл
4.7. Схема технологии получения эритроцитарных диагностикумов из фаголизатов шигелл и сальмонелл
4.8. Применение эритроцитарных диагностикумов из фаголизатов шигелл и сальмонелл в процессе производства диагностических сывороток
5. Обсуждение результатов
6. Выводы
7. Список литературы

I. ВВЕДЕНИЕ
Методы исследований, основанные на проявлениях реакции антигена с антителом, широко применяются в различных областях биологии и медицины. Среди них важное значение имеют методы, в основе которых лежит феномен пассивной гемагглютинации. Благодаря относительно высокой чувствительности, простоте постановки и учета реакция пассивной агглютинации эритроцитов, сенсибилизированных антигенами или антителами, широко используется при решении ряда теоретических и прикладных задач.
В нашей стране уже выпускается ряд эритроцитарных диагности-кумов, однако качество и ассортимент этих препаратов пока еще не могут удовлетворить растущие потребности научно-исследовательских и клинических лабораторий. В связи с этим в ряде учреждений широко ведутся исследования по получению новых и совершенствованию выпускаемых эритроцитарных диагностикумов. Основное внимание при этом уделяют разработке новых методов получения высокоактивных специфических сенситинов, консервации и сенсибилизации эритроцитов, стабилизации и стандартизации препаратов.
Качество эритроцитарных диагностикумов определяется многими факторами, среди которых одним из наиболее существенных является качество сенситина. В свою очередь, качество сенситинов, в частности, сенситинов бактериальной природы, определяется методом получения антигенов, используемых для сенсибилизации эритроцитов. В настоящее время известно огромное количество методов получения бактериальных антигенов, большинство которых основано на физической, химической или энзиматической дезинтеграции бактериальных клеток. Эти методы, с одной стороны, предусматривают применение дорогого или дефицитного оборудования и реактивов и поэтому недо-

различия эти статистически незначимы. У всех изученных препаратов Н-антигенов был примерно одинаковым также химический состав. Основным компонентом полученных препаратов были белки, содержание которых было равным примерно 70$ от сухого веса. Содержание углеводов и нуклеиновых кислот было незначительным. Так, содержание углеводов колебалось от 3,9 до 6,5, в то время как нуклеиновых кислот было еще меньше (1,13-2,13$).
Таким образом, препараты Н-антигенов, полученные из фаголиза-тов сальмонелл, практически не отличаются по своему химическому составу от препаратов Н-антигенов, выделенных путем обработки бактерий ультразвуком. Использованная нами методика обеспечивает получение из фаголизатов сальмонелл препаратов, состоящих, главным образом, из белков.
Как уже упоминалось, полученные препараты Н-антигенов (На, Не/ и Н| , 1,2) из фаголизатов сальмонелл были использованы также для гипериммунизации кроликов. Кроликов иммунизировали по схеме, описанной в разделе 3 (Материалы и методы). Каждой серией препаратов иммунизировали I кролика (5 кроликов на каждый вид препарата). Кровь брали из сердца через 7 дней после завершения цикла иммунизации. Полученные антисыворотки титровали в РПГА с эритроцитарны-ми диагностикумами На, Не/ и Н { , 1,2, приготовленными в Центральном НИИВС им.Мечникова. Результаты этих исследований приведены в табл.10.
Из табл.10 следует, что препараты Н-антигенов из фаголизатов изученных сальмонелл при гипериммунизации кроликов обеспечивают получение антисывороток с высокими титрами антител, выявляемых в РПГА с гомологичными эритроцитарными Н-диагностикумами. Полученные антисыворотки практически не реагировали с гетерологичными Н-диагностикумами. Из этого следует, что препараты, полученные из