Усовершенствование методов лабораторной диагностики листериоза

• Автор: Савельева, Лариса Владимировна
• Шифр специальности: 03.00.07
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1999
• Место защиты: Саратов
• Количество страниц: 112 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ
Введение

1. Литературный обзор

1.1. Возбудитель листериоза

1.2. Листериоз как пищевая инфекция

1.3. Лабораторная диагностика листериоза

1.4. Методы генодиагностики листерий

Собственные исследования

2. Материалы и методы

2.1. Штаммы
2.2. Оборудование для метода косого освещения
2.3 Метод холодового обогащения
2.4. Конструирование новой селективной среды
2.5. Материалы для ПЦР
3. Конструирование селективной среды
3.1. Свойства штаммов
3.2. Выбор основы для селективной среды
3. 3. Выбор селективных добавок
3.4. Апробация селективной среды в
экспериментальных условиях.'
4. Применение усовершенствованных методов диагностики листериоза
4.1. Апробация сред при исследовании пищевых
продуктов и патматериала
4.2. Просмотр чашек под стереомикроскопом
в косопроходящем свете
4.3. Метод холодового обогащения
4.4. ПЦР при диагностике листериоза
Обсуждение результатов
Выводы
Практические предложения
Список литературы
Приложение
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
Аг - антиген Ат - антитело
ИФА - иммуноферментный анализ
КОЕ - колонийобразующие единицы
МФА - метод флюоресцирующих антител
ПЦР - полимеразная цепная реакция
РЛА - реакция латекс-агглютинации
РКОА- реакция коагглютинации
РИГА- реакция непрямой гемагглютинации
РНФ - реакция нарастания титра бактериофага
РСК - реакция связывания комплемента
ХЛ - хемолюминисценция

ВВЕДЕНИЕ
Листериоз является тяжелым инфекционным заболеванием многих видов животных и человека.С 1956 по 1990 г.г. в стране заболело листериозом 572584 животных. Летальность 33,1%. В 1992г. заболело 5962 животных, пало 2000. Из числа заболевших 77% падает на
мрс(Бакулов И.А., Котляров В.М., 1992).В 1991-95гг. в РФ было обследовано на листериоз 6582 человека и выделено 14 культур. За этот период исследовано 54224 объекта внешней среды и изолировано 73 культуры (Опочинский Э.Ф., Тясто A.C. , 1996). За последние годы возрос интерес, к этой инфекции. Участившиеся случаи этой болезни, широкая контаминация листериями пищевых продуктов и объектов внешней среды приводит к крупным вспышкам (Daniels-son-Tham М.-L., Jutell I. е.а. 1995; Seeliger H. 1988). Новая обстановка заставляет искать более совершенные методы лабораторной диагностики листериоза. Оказалось, что листериоз - сапроноз-ная инфекция т.е. возбудитель не только длительно переживает, но и размножается во внешней среде (Пушкарёва В.И., Емельяненко E.H.,Литвин В.Ю. и др. 1997). Листериозу подвержены не только беременные женщины и их потомство, но и люди пожилого возраста с отклонениями в иммунной системе, особенно принимающие кортикостероиды, которые используются при удалении опухолей, пересадке органов и т.п. Нередко возникают листериозные абсцессы после проведения полостных операций, часто в тканях, окружающих фистулу, у больных, находящихся на постоянном гемодиализе. (Козлова Д.И., Котляров В.М. и др. 1994; . J.McLauchlln, J.C.Low 1994;
J.McLauchlln, L.Newton 1995).

делены до уровня первой группы; 28 штаммов до уровня рода. Авторы подчёркивают что применение панели позволяет сократить время идентификации с 2-7 дней до одного дня. Зарубежные производители предлагают коммерческий набор Micro-ID Listeria для выявления листерий. Набор представляет собой двадцать реагент-пропитанных бумажных дисков. Эти реагенты представляют собой вещества, на которые воздействуют бактериальные ферменты и определяющую систему, которая взаимодействует с конечными продуктами обмена веществ, что легко распознается по изменению цвета. В состав реагирующих систем входят тесты: реакция Фогес-Проскауэра, нитрат
редуктаза, реактивы на сероводород, орнитин-декарбоксилазу, лизин, декарбоксилазу, малонат, уреазу, рамнозу, маннит и сорбит. Идентификацию обычно делают при сравнении результатов свойств выделения микробов в чистой культуре с биохимическими свойствами тест-штамма микроорганизма. Другой коммерческий набор Api Listeria является удобным в обращении методом идентификации листерий. Он представляет собой десять отдельных и оптимальных биохимических тестов для рода листерий. При этом методе готовят бактериальную смесь, сеют полоской в лунки набора, инкубируют 24 часа при 37°С. После этого добавляют реагент ZYM В, а затем расшифровывают результаты.К. сожалению,- все эти тест-системы не получили широкого применения в нашей стране.
Таким образом, современные тест-системы для диагностики листериоза за рубежом заняли прочное место среди всех методов диагностики. Популярность их применения объясняется тем, что они менее громоздки, позволяют в кратчайшие сроки получить точные результаты, а также являются относительно дешевыми.