Активаторы плазминогена урокиназного типа : кинетические свойства и повышение их тромболитической эффективности in vitro

• Автор: Мухаметова, Лилия Инилевна
• Шифр специальности: 02.00.15
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2002
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 166 с. : ил

СОДЕРЖАНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР

Глава 1. Фибринолитическая система крови человека

1.1. Основные компоненты фибринолитической системы

1.1.1. Плазминоген и плазмин

1.1.2. Активаторы плазминогена

1.1.3. Ингибиторы фибринолитической системы

1.2. Дисфункция фибринолитической системы

1.3. Механизм действия нефизиологических активаторов

плазминогена
Глава 2. Образование и лизис фибринового сгустка
2 1. Строение фибриногена и механизм образования фибрина
2.2. Связывание компонентов фибринолитической системы с фибрином
и его лизис плазмином
Глава 3. Строение и свойства активаторов плазминогена урокиназного типа
3.1. Структура про-урокиназы и урокиназы
3.2. Взаимодействие про-урокиназы и урокиназы с субстратами
и ингибиторами
3.3. Механизм активации плазминогена про-урокиназой и урокиназой
3.4. Связывание про-урокиназы и урокиназы с рецепторами
Глава 4. Способы повышения тромболитической эффективности
активаторов плазминогена урокиназного типа
4.1. Повышение сродства урокиназы и про-урокиназы к материалу тромба
4.2. Защита урокиназы от инактивации ингибиторами плазмы
4.3. Повышение времени циркуляции урокиназы и про-урокиназы в плазме
4.4. Комбинированное использование тромболитических агентов

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
Глава 5. Исходные вещества и методы эксперимента
5.1. Исходные вещества
5.2. Методы эксперимента
5.2.1. Выделение, очистка и характеристика исходных
белковых препаратов
5.2.2. Определение активностей урокиназы и про-урокиназы
5.2.3. Изучение стабильности урокиназы в водных растворах
5.2.4. Кинетика фибринолиза под действием урокиназы, про-урокиназы
и их модифицированных производных
5.2.5. Получение ацилированных производных урокиназы
5.2.6. Кинетика деацилирования ацил-урокиназ
5.2.7. Изучение тромболитической эффективности ацил-урокиназ
5.2.8. Модификация про-урокиназы фенилглиоксалем
5.2.9. Исследование тромболитической эффективности комбинаций про-урокиназы и стафилокиназы
РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
Глава 6. Свойства активаторов плазминогена урокиназного типа.
6.1. Физико-химическая характеристика исходных препаратов
урокиназы и про-урокиназы
6.2. Инактивация и стабилизация урокиназы в водных растворах
6.3. Кинетика фибринолиза под действием урокиназы
Глава 7. Обратимое ацилирование активного центра урокиназы
7.1. Получение ацилированных производных урокиназы
7.2. Кинетика деацилирования ацил-урокиназ
7.3. Стабильность ацил-урокиназ в плазме крови человека
7.4. Эффективность ацил-урокиназ в лизисе фибриновых и
плазменных сгустков in vitro
7.5. Побочные эффекты урокиназы и ацил-урокиназ на важные белки
плазмы крови человека in vitro

Глава 8. Модификация про-урокиназы фенилглиоксалем
8.1. Получение производных про-урокиназы с различным числом модифицированных остатков аргинина
8.2. Стабильность в плазме крови и тромболитическая активность модифицированных производных про-урокиназы
Глава 9 Тромболитическая эффективность комбинаций про-урокиназы и стафилокиназы
9.1. Фибринолитические эффекты комбинаций стафилокиназы и про-урокиназы
9.2. Влияние комбинаций стафилокиназы и про-урокиназы на уровни основных плазменных белков
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

Глава 3. СТРОЕНИЕ И СВОЙСТВА АКТИВАТОРОВ ПЛАЗМИНОГЕНА УРОКИНАЗНОГО ТИПА.
Первоначально активатор плазминогена урокиназного типа был выделен из мочи в 1951 г. [6] и представлял собой двухцепочечный фермент с молекулярной массой 54 кД. Позже в 1973 г. Вегпю М.В. [90] предположил, что, как и большинство сериновых протеаз УК синтезируется в организме в виде профермента. Впоследствии несколькими группами ученых была выделена одноцепочечная про-УК из мочи [91], плазмы крови [92], культуры раковых клеток [67] и почек [93], а затем про-УК была получена и генно-инженерным способом [31, 75].
3.1. Структура про-урокиназы и урокиназы.
Ген, кодирующий последовательность про-УК расположен на хромосоме 10. Протяженность гена составляет 6,5 тысяч пар оснований и состоит из 11 экзонов. Про-УК - одноцепочечный гликопротеин с молекулярной массой, составляющей по разным данным 46 - 54 кД [31, 67, 22]. Описано также выделение про-УК с молекулярной массой 100-150 «Д, которая возможно, является мультимолекулярной формой про-УК [94]. Существует и низкомолекулярная форма про-УК с Мг 32 кД [67].
Полипептидная цепь высокомолекулярной про-УК содержит 411 аминокислотных остатков (Табл. 7) и карбогидратный остаток при Асп302 [22] (Рис. 6). Как было упомянуто ранее, молекула про-УК содержит 4 домена: (1) - домен, подобный домену фактору роста (Сер1-Лиз46); (2) - крингл-домен Сер47-Лиз134, (3) - пептидный домен Лиз136-Лиз158 и (4) - протеолитический домен Иле159-Лей411. Эти домены в значительной степени гомологичны доменам, обнаруженным в других белках (Рис. 3). Домен фактора роста родственен животному и человеческому эпидермальному фактору роста и отвечает за специфическое связывание УК и про-УК с их клеточными рецепторами. Связанные к рецепторам УК и про-УК функционируют локально, запуская протеолитический каскад, который расщепляет межклеточную матрицу и тем самым способствует миграции клеток при различных физиологических и патологических процессах. Подобные функции