Разработка и совершенствование экспресс-методов для серодиагностики вирусных инфекций животных

• Автор: Васильев, Алексей Васильевич
• Шифр специальности: 16.00.03
• Научная степень: Докторская
• Год защиты: 2000
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 51 с. : ил.; 20х15 см

Общая характеристика работы.

Актуальность проблемы. Вирусные болезни животных причиняют значительный ухцерб животноводству всех стран мира. Особенно тяжело они протекают в крупных животноводческих хозяйствах, где на ограниченном пространстве находится большое количество животных “различного возраста. Поэтому обеспечение устойчивого благополучия по инфекционным болезням является первостепенной задачей ветеринарной службы. Эта работа проводится по нескольким направлениям, включающим ветеринарно-санитарные мероприятия, профилактические и лечебные, в случае развития болезни. Однако, ветеринарно-санитарные меры и специфическая профилактика болезней, вызываемых вирусами, при неточной диагностике не приносят желаемого результата. Многообразие симптомов проявления вирусных болезней животных, схожесть клинических форм проявления, вызванных возбудителями, относящимися к различным таксономическим группам, зачастую, латентный характер их течения, который периодически проявляется вспышками острого заболевания, затрудняет постановку диагноза и эффективное проведение противоэпидемических и профилактических мероприятий (Вишняков И.Ф., 1995). Поэтому, чтобы с определенностью установить этиологию каждого индивидуального заболевания, абсолютно необходимы лабораторные исследования, даже, если клинические данные достаточно очевидны (Филдс Б. И др.,1989, Сюрин В.Н. и др.,1989,1999). Выделение и идентификация вирусов является очень сложной, длительной и экономически дорогостоящей процедурой, оправданной лишь при некоторых особо опасных инфекциях. Методы, основанные на обнаружении вирусов в патматериале перспективны, но требуют для своего выполнения соответствующих дорогостоящих, сложных в обслуживании приборов и дефицитных вспомогательных материалов.
В случае выделения вируса необходимо доказать его этиологическую роль. Для этой цели используют серологические методы, направленные на выявление антител, такие, как: реакции нейтрализации (PH), диффузионной преципитации (РДП), связывания комплемента (РСК), радиального гемолиза в геле (РРГГ), торможения гемагпоотинации (РТГА), непрямой гемагглюти-нации (РИГА), иммуноферментиый анализ (ИФА). В диагностических целях используют факт прироста антител, регистрируемых методом парных сыво-

го применения в полевых условиях метод выявления как антигенов, так и антител. Реакция однокомпонентная, для ее постановки требуется минимум оборудования, которое имеется в наличие в ветеринарных лабораториях. Реакцию ставят микрометодом. Для этого необходимо всего 25-50 микролитров сыворотки или другого биологического материала. Учет реакции проводят через 2-3 часа. По чувствительности она не уступает иммуноферментно-му анализу, а по стоимости проведения является наиболее экономичной по сравнению с другими реакциями. (Phipps Р.Н. et al, 1983, Cheeseman S.H.et al, 1984). По мнению Каральника Б.В. и др. (1990), Жуматова К.Х. и др. (1994) по сочетанию критериев доступности и скорости получения результатов РНГА является наиболее удобным тестом для диагностики вирусных инфекций.
Однако, широкому внедрению РНГА в практику ветеринарных лабораторий препятствует отсутствие наборов диагностикумов с длительным сроком использования, устойчивых в процессе транспортировки и сохраняющих свои свойства при работе в разных климатических зонах.
В докладе приведены материалы по разработке реакции непрямой гемагг-лктшации для выявления антител к вирусам инфекционного ринотрахеита (ИРТ), респираторно-синцитиальной (PC) инфекций крупного рогатого скота (крс), чумы плотоядных (ЧП) и внедрению разработанных диагностических наборов в ветеринарную практику. Выбор объектов разработок был продиктован запросами ветеринарной службы нашей страны.
К началу исследований был накоплен большой фактический материал, свидетельствовавший о важной роли вирусов ИРТ и PC в возникновении респираторных болезней у крупного рогатого скота. Эта инфекции причиняют значительный ущерб скотоводству всех стран мира (Гуненков В. В., Сухарев В.И.,1987). В лаборатории вирусологии Московской ветеринарной академии под руководством академика ВАСХНИЛ, профессора В.Н. Сюрина велись интенсивные разработки по созданию диагностикумов и средств специфической профилактики этих инфекций. Что касается чумы плотоядных, то это одна из наиболее опасных, преимущественно остро протекающих, высоко контагиозных вирусных болезней животных отряда хищных (Appel М., 1987, Груздев К Н., Селиванов А.В.,1985). Борьба с ней ведется по следующим направлениям: разработка средств диагностики, разработка средств специфической профилактики и лечения. Наиболее узким местом в этой системе является диагностика. До последнего времени прижизненная диагностика чумы плотоядных основывалась исключительно на учете клинических признаков. Крупные звероводческие хозяйства использовали для этих целей биопробу на чувствительных к чуме животных. Лабораторные исследования, направленные на выявление вируса или его антигенов и антител, не проводились из-за отсутствия коммерческих тест-систем. Только в последние годы (Логунова Л.Б. и др., 1994, Сазонкин БД. и др.,1994, Хомов В.В. и др.,1997, Абраменко Т.В. и др., 1999) в нашей стране были разработаны методы выявления антигенов вируса ЧП в тоиничееких образцах, взятых от больных животных. Выявление антител для диагностических целей не проводили, так как отсутствовали соответствующие методы. Учитывая это разработка реак-

рокой циркуляции этого вируса среди обследуемого поголовья и о латентном течении инфекции.
9. Частота выявления серопозитивных к PC-вирусу животных (крупного рогатого скота) в различных хозяйствах и разных возрастных группах колеблется в широких пределах от 21% до 87%.
10.Набор эритроцитарных диагностикумов для выявления антител к вирусу чумы плотоядных в реакции непрямой гемагглютинации позволяет осуществить:
- контроль антигенной активности чумного компонента в составе моно- и ассоциированных вакцин для собак и пушных зверей;
- определить уровень колострального и напряженность поствакцинального иммунитета у собак и пушных зверей к чуме плотоядных;
- провести контроль лечебно-профилактических препаратов, содержащих антитела к вирусу чумы (сыворотки и иммуноглобулины).
11 .Применение наборов эритроцитарных диагностикумов для выявления антител к вирусам ИРТ и PC в ветеринарной практике позволяет осуществить комплекс противоэпизоотических мероприятий по предупреждению указанных инфекций и сохранению здорового поголовья скота.
12.Налажено производство лечебно-профилактического препарата против парвовирусного энтерита, аденовирусных инфекций и чумы собак.
Список опубликованных работ
1- Васильев А.В.. Стрельникова И.П., Сюрин В.Н.Модификация метода локального гемолиза для обнаружения клеток, синтезирующих антитела к вирусному антигену// Вопросы вирусологии-1976,№4- с.491-493.
2. Аль-Шайбани Н.П., Васильев А.В..Сюрин В.Н. Разработка реакции непрямой гемагглютинации для обнаружения антител к вирусу инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота// Рукопись депонирована в ВИНИТИ-1978-№ 2893-78.-C.43-45.
3. Васильев А.В.. Преображенская Э.А. Иммунологическая перестройка организма крыс после введения инактивированной вакцины притив инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота// Проблемы молекулярной биологии и патологии// Сб. науч. Трудов Моск. вег. Академии им. К.й.Скрябина- 1979- т.106- с.76-81.
4. Васильев А.В..Сюрин В.Н. Сравнительное изучение различных серологических реакций для обнаружения антител к вирусу инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота. //Актуальные вопросы ветеринарной вирусологии// Сб.науч.трудов- Казань- 1980- с.44.
5. Васильев A.B.Использование метода радиального гемолиза в геле для обнаружения анттел к вирусу инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота.// Проблемы молекуулярной биологии и патологии сельскохозяйственных животных//.Сб. науч. Трудов Моск. вет. Академии им. К.И.Скрябина- 198Ö-T.113- с. 56-58.
6. Васильев А.В. Обнаружение антител к вирусу инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота методом РДП// Там же.-с.61-65.