Исследование структуры полисахаридов мать-и-мачехи обыкновенной и разработка параметров их стандартизации

• Автор: Корж, Анна Петровна
• Шифр специальности: 14.04.02
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2012
• Место защиты: Самара
• Количество страниц: 158 с. : 5 ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ

Глава 1 Обзор литературы

1.1 Характеристика растений, ПСК которых обладают выраженными иммуномодулирующими свойствами

1.2 Иммуномодулирующая активность полисахаридов

1.3 Сравнительный анализ методов, используемых для

изучения полисахаридов

Глава 2 Объекты и методы исследования

2.1 Объекты исследования

2.2 Методы исследования

2.2.1 Выделение полисахаридных комплексов из растительного сырья

2.2.2 Методы химического исследования
2.2.3 Методы исследования иммуномодулирующей активности
2.3 Статистическая обработка результатов
Глава 3 Общая характеристика полисахаридных комплексов листьев мать-и-мачехи, корневищ и корней девясила, надземной части клевера лугового и выбор перспективного объекта исследований
3.1 Выделение полисахаридных комплексов из листьев мать-и-мачехи, корневищ и корней девясила, надземной части клевера лугового
3.2 Характеристика полисахаридных комплексов листьев мать-и-мачехи, надземной части клевера лугового, корневищ и корней девясила по молекулярно-массовому распределению, содержанию углеводов, общего белка, уроновых и нуклеиновых кислот

3.3 Сравнительное исследование иммуномодулирующей активности полисахаридных комплексов листьев мать-и-мачехи, надземной части клевера лугового, корневищ и корней девясила и
выбор перспективного объекта
Глава 4 Разделение полисахаридного комплекса листьев мать-и-мачехи на индивидуальные соединения и изучение их структуры
4.1 Разделение полисахаридного комплекса на индивидуальные полисахариды и их характеристика по молекулярной массе, содержанию уроновых кислот и белка
4.2 Исследование мономерного состава индивидуальных компонентов полисахаридного комплекса листьев мать-и-мачехи .
4.3 ЯМР-спектроскопия индивидуальных компонентов
полисахаридного комплекса листьев мать-и-мачехи
Глава 5 Исследование иммуномодулирующей активности индивидуальных компонентов полисахаридного комплекса
листьев мать-и-мачехи
Глава 6 Разработка параметров стандартизации полисахаридного комплекса листьев мать-и-мачехи
6.1 Разработка методик определения подлинности и чистоты полисахаридного комплекса
6.2 Разработка методики количественного определения кислых полисахаридов в полисахаридном комплексе листьев мать-и-мачехи
6.3 Валидация методики количественного определения кислых полисахаридов в полисахаридном комплексе листьев
мать-и-мачехи
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

ПРИЛОЖЕНИЕ

ПРИЛОЖЕНИЕ

ПРИЛОЖЕНИЕ

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ СОКРАЩЕНИЙ
- биологически активные вещества
- низкомолекулярные соединения
- полисахариды
- полисахаридный комплекс
- водорастворимые полисахариды
- уроновые кислоты
- молекулярно-массовое распределение
- молекулярная масса
- время удерживания
- эмбриональная телячья сыворотка
- макрофаги
- липополисахариды
- ядерно-магнитный резонанс
- высокоэффективная жидкостная хроматография
- газожидкостная хроматография с масс-спектрометрическим детектором
- бычий сывороточный альбумин
- эмбриональная телячья сыворотка
- липополисахариды

разделение проводилось на эксклюзионной колонке TSK-gel GMPXl 300x7,8 mm («Supelco», Япония), подвижная фаза - вода, 1,0 мл/мин.
б) Моносахара в гидролизате идентифицировали методом ГЖХ-хроматомасс (ГЖХ-МС) в виде соответствующих триметилсилильных производных (ТМС) моносахаридов.
Пробоподготовка: к навеске (3-6 мг) исследуемого образца ПС
добавляли 1 мл 2М раствора кислоты трифторуксусной (TFA). Смесь нагревали в течение 5 ч при 100 °С в запаянной ампуле. Избыток TFA удаляли многократным упариванием досуха со спиртом метиловым. ТМС-моносахаридов получали по следующей методике: к полученной в результате кислотного гидролиза смеси моносахаров добавляли 80 мкл безводного пиридина, смесь выдерживали в сушильном шкафу при 50 °С в течение 20 мин. Далее добавляли 30 мкл N-триметилсилилимидазола (Sigma-Aldrich Chemie GmbH, Германия), смесь выдерживали в сушильном шкафу при 70 °С в течение 40 мин. К полученной смеси ТМС-производных добавляли 1 мл гексана, интенсивно взбалтывали и оставляли до расслоения смеси. Далее верхний слой отбирали и анализировали ГЖХ-МС.
Аналитические условия: хроматомасс-спектры регистрировали на газовом хроматографе «Agilent 7890А” с масс-селективным детектором Agilent 5975С, капиллярной колонкой HP5MS (30 м/250мкм><0,25мкм), газ-носитель - гелий (скорость потока 1 мл/мин). Температурный режим: 80 °С (1 мин)—>220 °С (2 мин)—>310 °С. Температура испарителя - 280 °С. Введение 1/50. Количество вводимой пробы 1 мкл. Диапазон сканирования масс 50-90.
в) Спектры ЯМР 'Н и 13С записывали на спектрометрах DRX-500 и DRX-300 («Bruker», Германия) для 1-2% растворов полисахаридов в D20, при 55 °С и 70 °С (внутренний стандарт - диметилсульфоксид).
Количественное содержание полисахаридов определяли гравиметрическим [16] и спектрофотометрическим [116] методами анализа.