Разработка технологии гемодеривата из отхода производства интерферона и перспективы его использования.

• Автор: Мальгина, Дарья Юрьевна
• Шифр специальности: 14.04.01
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2014
• Место защиты: Пермь
• Количество страниц: 156 с. : 4 ил.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Биотехнологические аспекты переработки белковых отходов

1.2. Перспективы использования производных крови человека

1.3. Аспекты переработки эритромассы крови доноров

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

2.1. Объекты исследований

2.2. Материалы исследований

2.3. Методы исследований

2.3.1. Физико-химические методы

2.3.2. Биологические методы
2.3.3. Вирусологический контроль
2.4. Статистический анализ результатов
ГЛАВА 3. Разработка технологии гемодеривата
и оценка его физико-химических свойств
3.1. Поиск оптимальных методов ферментативного гидролиза эритромассы крови человека
3.2. Характеристика физико-химических свойств гемодеривата
Г ЛАВА 4. Изучение биологической активности гемодеривата
4.1. Оценка токсичности гемодеривата
4.2. Экспериментальное изучение антибактериальной активности
гемодеривата
4.2.1. Оценка противомикробного действия гемодеривата на бактерии люминесцентного штамма E.coli Lum+
4.2.2. Изучение антибактериальной активности гемодеривата на штаммы
условно-патогенных микроорганизмов
4.3. Изучение местно-раздражающего действия гемодеривата при кожных аппликациях in vivo

4.4. Оптимизация контроля качества человеческого лейкоцитарного интерферона с использованием перевиваемой клеточной линии БРЕУ,
выращенной на питательной среде с гемодериватом
ВЫВОДЫ
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
СПИСОК ИЛЛЮСТРАЦИЙ
ПРИЛОЖЕНИЯ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
АБПК - антибактериальный пептидный комплекс;
ВНК-21 - клетки почки новорожденного сирийского хомячка;
ГБ-Г - ферментативный гидролизат белков гороха;
ГБ-С - ферментативный гидролизат белков сои;
ГЛА - гидролиза лактальбумина;
ГСБМ - ферментативный гидролизат белков сыворотки молока;
ЖКТ - желудочно-кишечный тракт;
ИП - индекс пролиферации;
ИПБ - индекс подавления биолюминесценции;
ИФН - интерферон; кДа — килодальтон;
КРС - крупный рогатый скот;
ЛЭК — легкое эмбриона коровы;
Мг - молекулярная масса;
МЕ - международная единица.
МТ-4 - линия Т-клеточной лейкемии;
ПГК - панкреатический гидролизат казеина;
ПС - питательная среда;
ПТ-80 - перевиваемая линия почки теленка;
СБК - сухой белковый концентрат;
ФГМ-С - гидролизат мышечных белков ферментативный сухой;
ФГОМП - ферментативный гидролизат белков мышечной ткани плодов коров и свиней, отходов мясоперерабатывающей промышленности;
ФЛЭЧ - фибробласты легкого эмбриона человека;
ФЭК - фибробласты куриных эмбрионов;
ЧЛИ - человеческий лейкоцитарный интерферон;
СНО-КІ - клетки яичника китайского хомячка;
Б-929 - культура клеток мышиных фибробластов;
МЕБ - первичная культура клеток мышиных фибробластов;
Иашаїуа - линия лимфобластоидных клеток;
БРЕУ - перевиваемая культура клеток почки эмбриона свиньи;
Уего - линия клеток почки африканской зеленой мартышки.

Присутствие белков и высокомолекулярных соединений пептидной природы контролировали в реакции с трихлоруксусной кислотой путем добавления по каплям к исследуемому образцу. Отсутствие осадка и опалесценции означало полную депротеинизацию раствора низкомолекулярных пептидов [29].
Протеолитическую активность пепсина в очищенных препаратах гемодеривата контролировали в качественной реакции протеолитического расщепления и просветления раствора нормальной лошадиной сыворотки [35, 75]. Методика:
1. Готовили 10 % раствор сульфосалициловой кислоты;
2. Готовили разведенную сыворотку из нормальной лошадиной с известной концентрацией белка. Концентрация белка в разведенной сыворотке должна быть 0,5 %; нагревали разведенную сыворотку на водяной бане до температуры (40±2) °С. При перемешивании доводили значение pH до (2,0±0,1), медленно добавляя 10 % раствор сульфосалициловой кислоты.
3. Готовили 2 раствора: пепсина и гемодеривата. Для этого 0,2 г вещества растворяли в 100 мл 0,01 М хлористоводородной кислоты.
4. Проводили реакцию: ставили в штатив 2 ряда по 7 пробирок, предварительно подписанных: 0,1; 0,2; 0,3; 0,4; 0,5; 0,6; контроль.
5. Наливали в каждую пробирку, кроме контроля, соответственный обозначению объем исследуемых растворов в мл: в 1-ый ряд - раствор пепсина, во 2-ой ряд - раствор гемодеривата. Доводили объем каждой пробирки до 1 мл, включая контроль, очищенной водой.
6. В каждую пробирку, включая контрольную, добавляли по 5 мл раствора сыворотки с 10 % раствором сульфосалициловой кислоты. Перемешивали.
7. Помещали штатив с пробирками на водяную баню при температуре (40±1) °С на 30 минут
Учет результатов проводили визуально. Отмечали пробирки, где наблюдалось наибольшее просветление раствора. Сравнивали результаты действия раствора гемодеривата и пепсина в соответствующих разведениях.